全 文 ：均确证 β -AP诱导的皮质神经元死亡是典型的细胞
凋亡 ,黑海参多糖对 β -AP诱导的皮质神经元凋亡
有明显的保护作用。
黑海参多糖与肝素一样 ,都是酸性粘多糖 ,因
此 ,我们从研究结果推测 ,神经元细胞上可能存在酸
性粘多糖的特异性受体 ,酸性粘多糖对神经元的保
护作用是通过受体介导的。目前 ,受体的分离纯化及
黑海参多糖的分子作用机制研究正在进行之中。
参 考 文 献
1　 Frank , M L, et al . Nature Gen etics , 1995, 9: 21
2　 Barger, S W , et al . Nature, 1997, 388: 878
3　 Yan G M, et al . International Symposium of Alzh eimer s
diseas e. Osaka, Japan, 1996
4　唐孝礼 ,等 .中药材 , 1999, 22( 5): 223
5　 Yan G M, et al . Mol Pharmacol, 1995, 47: 248
6　 Yan G M, et al . J Neu rochem, 1995, 65: 2425
7　 Yan G M, et al . J Pharmacol Exp Th er, 1995, 274: 983
8　 Yan G M, et al . Brain Res , 1994, 656: 43
9　黎明涛 ,等 .生物化学与生物物理学报 , 1997, 29 ( 5): 495
10　 Bains J S, et al . Brain Res Brain Res Rev, 1997, 25 ( 3): 335
11　颜光美 .中山医科大学学报 , 1998, 19 ( 1): 1
( 1999-06-29收稿 )
阿魏酸钠和当归醇沉物对免疫性肝损伤的干预作用△
湖北医科大学药理教研室 (武汉 430071)　　李　颖 　彭仁
摘　要　阿魏酸钠 ( SF)及当归醇沉物 ( ESA)对卡介苗加脂多糖致小鼠免疫性肝损伤有保护作用 ,二者均降低肝损
伤小鼠血清 ALT和谷胱甘肽 S-转移酶活性 ,并增加肝细胞浆中谷胱甘肽还原酶活性 ,同时 ESA降低肝细胞浆中
丙二醛含量 ,提示当归的护肝作用与抗脂质过氧化有关。 ESA在护肝的同时尚能明显抑制小鼠脾脏指数的增加 ,提
示 ESA更广泛的护肝机制。
关键词　阿魏酸钠　当归醇沉物　免疫性肝损伤　谷胱甘肽还原酶
Protective Effects of Sodium Ferulate and Ethanol Sediments from Danggui
(Angelica sinensis ) on Immunological Liver Injury
　　Depar tment of Pha rmaco log y , Hubei Univ ersity of M edical Sciences (Wuhan 430071)　 Li Ying and Peng Renxiu
Abstract　　 Sodium ferula te ( SF) and ethanol sediments f rom Angelica sinensis ( Oliv. ) Diels ( ESA)
show ed thei r pro tectiv e ef fects on the immunological liv er injury induced by lipopolysaccharide ( LPS) in
bacillus calmet te-guerin ( BCG) primed mice. They both suppressed serum ALT and g lutathione S-
transferase activity, and increased g lutathione-reductase activi ty in hepatic cy tosol in liv er damaged mice.
ESA also reduced the lev el o f malondialdehyde ( MDA) , a product of lipid peroxidation, in hepatic cy tosol.
Al l these ef fects reminded that antio xida tion w as an important mechanism for A. sinensis to antag onize
immunolo gical liv er injury. That ESA decreased the spleen index in liver damaged mice also reminded that
there may be some other protectiv e mechanisms of A. sinensis .
Key words　　 sodium ferulate ( SF)　 ethanol sediments f rom Angelia sinensis ( Oliv. ) Diels ( ESA)　
immunolo gical liv er injury　 g lutathione-reductase
　　当归单体成分阿魏酸钠 ( SF)对多种化学性肝
损伤有保护作用 [ 1] ,但未见当归作用于免疫性肝损
伤报道 ,已知当归醇沉物 ( ESA)有免疫活性 [2 ] ,但未
见对肝损伤作用报道 ,本文用卡介苗加脂多糖的方
法制造小鼠免疫性肝损伤模型 ,观察 SF及 ESA的
影响 ,以期更全面认识当归对肝损伤的干预作用。
1　材料与方法
1. 1　药品与试剂:卡介苗 ( BCG)由卫生部兰州生物
制品所提供 ,细菌脂多糖 ( LPS)购自 Sigma公司 ,血
清型 Salmonella Typhimurium. 2、 4-二硝基氯苯
( CDNB)、氧化型谷胱甘肽 ( GSSG)、还原型谷胱甘肽
( GSH)和还原型辅酶Ⅱ ( N ADPH)为 Sigma公司产
品。硫代巴比妥钠 ( TBA)、 5, 5′-二巯-2, 2′-二硝基苯
甲酸 ( DTN B)、阿魏酸钠 ( Sodium Ferula te, SF)片、
·274· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 4期
Address: Li Ying, Departm ent of Ph armacology, Hubei Univ ersi ty of Medical Sciences , Wuhan李　颖　男 , 29岁 ,湖北医科大学药理教研室讲师 ,药理学硕士学位。专业方向为生化药理 ,主要从事药物代谢、肝损伤及肝保护方面的工作。△湖北省教委资助项目
地塞米松 ( DEX )注射液均为市售产品 ,当归 Angel ia
sinensis Diels醇沉物 ( ESA)本实验室制备 [2 ]。
1. 2　动物及处理:参照文献 [3 ]选用 5周龄的雄性小
鼠 (昆明种 ) ,体重 ( 12± 0. 5 g ) ,由湖北省医科院提
供 ,分成 6组 ,每组 5～ 10只。每只小鼠尾 iv BCG 1
mg, 12 d后再尾 iv LPS 4μg以制造免疫性肝损伤
模型。制造模型同时给药 ,阿魏酸钠 ( SF)组、小剂量
当归醇沉物 ( ESA1)组和大剂量当归醇沉物 ( ESA2)
组分别 ig SF 100 mg /kg、 sc ESA 250和 500 mg /kg
共 12 d, DEX组在注射 LPS 30 min前 ip DEX 3
mg /kg 1次 ,生理盐水 ( N S)为对照。注射 LPS后 6
h小鼠断头取血 ,并摘取肝脏、胸腺和脾脏。 2～ 3个
肝脏合为一个标本 ,在冰 N S中剪碎、漂洗后经超速
离心 105 000 g× 60 min( 4℃ )制备细胞浆 ( S105)。
部分小鼠肝脏经 10%甲醛固定 ,石蜡包埋 ,切片 ,
HE染色 ,光镜观察。
1. 3　指标及测定方法:改良金氏法 [4 ]测定血清丙氨
酸转氨酶 ( alanine t ransaminase, ALT)。按 Habig
等方法 [ 5]以 CDN B为底物测定血清谷胱甘肽 S-转
移酶 ( g lutathione S-transferase, GS T)活性。 TBA
比色法 [6 ]测定丙二醛 ( MDA)。 按文献方法 [7 ]以
NADPH为底物 ,测定谷胱甘肽还原酶 ( g lutathione
reductase, GSH-Re )活性。 以 H2O2 为底物 ,用
DTN B显 色法 [8 ]测 定谷 胱甘 肽过 氧化 物酶
(g luta thione peroxidase, GSH-Px )活性。脏器指数
为该脏器占动物体重的百分比。
1. 4　统计方法:用 Duncan s q检验进行多组数据
间对比。
2　结果
2. 1　对血清 ALT (s ALT)和 GST ( sGST)的影响:
与 N S组比 ,模型组的 s ALT 升高 255% ( P <
0. 05) ,表明肝损伤模型制造成功。 SF、 ESA1、 ESA2
组的 s ALT分别较模型组降低 37% 、 46%和 69%
(均 P < 0. 05) ,表明 SF和 ESA均能有效对抗
BCG+ LPS小鼠免疫性肝损伤 ,其效应均不弱于免
疫抑制剂 DEX对模型组 s ALT 31%的降幅。上述 3
个给药组中 , ESA2组的降 s AL T作用均强于另两个
给药组 (均 P < 0. 05) ,且将 sALT降至 NS组水平 ,
提示 ESA降 sALT作用的剂量依赖趋势 (表 1)。
与此同时免疫性肝损伤使 sGST升高 321%
(与 N S组比 P < 0. 05) ,与文献报道 sGS T在化学
性肝损伤中强烈的升高 [4 ]一致 , SF、 ESA1、 ESA2分
别使模型的 sGST降低 72%、 88%和 84% (均 P <
0. 05) ,其效应均与 DEX接近 ,且达到与 NS组相似
的水平 (表 1)。
表 1　 SF和 ESA对免疫性肝损伤小鼠血清
ALT和 GST活性的影响
分组 n 剂量
(mg /kg)
s AL T　　
( U% )　　
sGST
(μmol /L /min)
N S 8 — 205. 4± 64. 6 23. 9± 8. 8
M od el 10 — 730. 0± 373. 0* 100. 5± 81. 7*
SF 10 100 458. 9± 199. 7△ 28. 1± 26. 8△
ESA1 10 250 397. 4± 103. 6△ 12. 1± 4. 9△
ESA2 5 500 226. 0± 19. 8▲ 16. 1± 6. 3△
DEX 9 3 501. 2± 172. 0△ 24. 7± 19. 8△
　　与 N S组比较: * P < 0. 05;与 Model组比较: △ P < 0. 05;与
M odel或 SF或 ESA1或 DEX组比较: ▲ P < 0. 05
2. 2　对肝细胞浆谷胱甘肽相关酶和 MDA的影响:
模型 组 肝细 胞 浆 MDA 较 N S组 升 高 78%
( P < 0. 05) ,表明 BCG+ LPS肝损伤中严重的脂质
过氧化作用。 与模型组比 SF、 ESA1组肝细胞浆
GSH-Re活性分别升高 44%和 45% (均 P < 0. 05) ,
GSH-Px较模型组分别升高 10. 5%和 33% ,虽未出
现统计学意义 ,但可提示 SF和 ESA均有增加抗氧
化酶活性的作用 ,其中 ESA尚能显著降低模型组引
起的肝细胞浆中 MDA的上升 ( P < 0. 05) ,其作用
强于 SF( P < 0. 05) ,这也与 ESA升高上述两酶活
性较 SF更明显相对应。 DEX虽可通过免疫抑制作
用阻止肝损伤 [3 ] ,但并不影响肝细胞浆谷胱甘肽相
关酶活性及 MDA,表明其不通过抗氧化作用参与
护肝 (表 2)。
表 2　 SF和 ESA对免疫性肝损伤小鼠肝细胞浆脂质
过氧化产物 MDA和 GSH相关酶的影响
分组 n M DA
( nm ol /mg)
GSH-Re
( nmol /min /mg)
GSH-Px
(nmol /min /mg )
N S 9 0. 29± 0. 03 48. 2± 4. 4 35. 9± 5. 2
M od el 10 0. 53± 0. 17* 43. 0± 3. 6 30. 6± 7. 5
SF 10 0. 59± 0. 35 62. 1± 5. 1△ 33. 8± 12. 3
ESA1 10 0. 22± 0. 16▲ 62. 2± 11. 7△ 40. 7± 7. 6
DEX 9 0. 75± 0. 33 47. 8± 9. 0 41. 5± 18. 4
　　与 N S组比较: * P < 0. 05
　　与 N S或 M odel组或 DEX组比较: △ P < 0. 05
　　与 Model或 SF或 DEX组比较: ▲ p < 0. 05
　　 n为动物例数 ,每 2～ 3例合一个超速离心标本
2. 3　脏器指数变化及组织学改变:免疫性肝损伤引
起脾脂数显著增大 ( P < 0. 05)的结果与文献一
致 [3, 9 ]。 ESA显著阻止肝损伤小鼠脾指数的增大
( P < 0. 05)与 DEX相似。 SF则对脾指数的增加无
显著影响 ,与此同时胸腺指数皆无显著变化 ,表明
BCG+ LPS肝损伤与胸腺关系不大 (表 3)。
病理切片见模型组肝细胞普遍肿大 ,有片状的
·275·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 4期
变性坏死 ,中央小静脉充血 ,肝窦内见大量的红细胞
瘀积。 ESA与 SF组的损伤都有不同程度减轻 ,仅见
局部细胞肿胀 ,小面积变性 ,尤其未见到大量红细胞
瘀积于肝窦。
表 3　 SF和 ESA对免疫性肝损伤小鼠免疫脏器指数的影响
分组 n 脾脏指数 胸腺指数
NS 9 0. 420± 0. 173 0. 231± 0. 087
Model 10 0. 617± 0. 147* 0. 191± 0. 082
SF 10 0. 540± 0. 190 0. 244± 0. 081
E SA1 10 0. 504± 0. 064△ 0. 179± 0. 046
DEX 9 0. 453± 0. 102△ 0. 183± 0. 059
　　与 NS组比较: * P < 0. 05;与 Model组比较: △ P < 0. 05
3　讨论
当归的成分 SF和 ESA均显著降低 BCG+
LPS免疫性肝损伤小鼠血清 ALT,表明其良好的抗
肝损伤效应。有报道血清 GST作为化学性肝损伤敏
感指标与血清 ALT改变有良好的平行关系 [4 ] ,实验
发现在免疫性肝 损伤中血清 GST同步升高 ,且上
升比例更大 ,说明血清 GST也是免疫性肝损伤的敏
感指标 , SF和 ESA降低血清 AL T的同时抑制了血
清 GST的上升 ,进一步证实它们对 BCG+ LPS免
疫性肝损伤的保护作用。
已知 BCG+ LPS所致肝损伤的机制为巨噬细
胞 ( M )介导的免疫性肝损伤 ,激活的 M 释放多种
免疫效应分子如活性氮 、活性氧和细胞因子
等 [3, 10 ] ,最终都导致组织严重的过氧化损伤 ,本实验
显示该模型肝细胞浆脂质过氧化产物 MDA明显升
高 ,证明肝细胞内脂质过氧化是本模型的重要终末
肝损伤机制。 谷胱甘肽相关酶在机体清除过氧化产
物的过程中起重要作用 ,如下所示:
　　 SF和 ESA均升高肝损伤小鼠肝细胞浆内
GSH-Re和 GSH-Px活性 ,提示 SF和 ESA通过抗
氧化实现其抗肝损伤效应。 ESA在提高抗氧化相关
酶活性时降低了肝细胞浆 MDA,从而进一步证实
其抗脂质过氧化机制。而已证明对化学性肝损伤有
较好抗脂质过氧化作用的 S F[1 ]则未能降低免疫性
肝损伤肝细胞浆中 MDA,提示 SF的作用弱于
ESA。 BCG+ LPS肝损伤小鼠脾脏指数增大 ,有认
为此时脾脏中活化的巨噬细胞亦通过分泼细胞因子
参与肝损伤 [3 ] , ESA抗肝损伤同时有与免疫抑制剂
DEX相似的减小脾脏指数的作用 ,结合 ESA中的
主要成分当归多糖 [2 ]有多种免疫学活性 [11 ] ,提示
ESA尚通过免疫机制在发生终末脂质过氧化损伤
之前阻断了肝损伤的发生。由于多重有效机制 , ESA
抗免疫性肝损伤作用既优于单纯的免疫抑制剂
DEX,也优于主要起抗氧化作用的 SF。 本结果提示
在当归中可能找到更为有效的对抗免疫性肝损伤的
成分 ,尤其是作为制备当归注射液废弃部分的 ESA
仍具有不可忽视的药理活性。
参 考 文 献
1　汪　晖 ,等 .中国药理学报 , 1994, 15: 81
2　夏雪雁 ,等 .中草药 , 1999, 30( 2): 112
3　 Nagak aw a J, et al . Gas troenterology, 1990, 99: 758
4　汪　晖 ,等 .中国药理学报 , 1993, 14( 5): 41
5　 Habig W H, et al . J Biol Ch em , 1974, 249: 7130
6　 Uchiyama M , et a l. Analyt Biochemis t ry, 1978, 86: 271
7　 Carlb erg I, et al . J Biol Ch em, 1975, 250: 5475
8　夏亦明 ,等 .卫生研究 , 1987, 16( 4): 29
9　许建明 ,等 .中国药理学通报 , 1997, 13( 2): 186
10　 Wang G S, et al . Biochem Ph armacol, 1995, 49( 8): 1277
11　王亚平 ,等 .中西医结合杂志 , 1990, 11( 1): 60
( 1999-05-20收稿 )
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简单地重复题名中已有的信息 ; 3)要用第三人称的写法 ,不必使用 “本文”、“作者”等作为主语 ,应采用“对……进行了研究”等
记述方法 ; 4)结构严谨 ,表达简明 ,一般不分段落。 缩略语、代号等除了相邻专业的读者也能清楚理解的以外 ,在首次出现处必
须加以说明。
另外 ,英文摘要中所有作者都需要提供英文单位名称。
2　参考文献写法按 GB7714- 87规定。
期刊: 作者〔3人全写 , 3人以上写 3位作者 ,后加等〕. 杂志名 (缩写 ,但不要加缩写点 ) ,年 ,卷 (期 ):起始页
《中草药》杂志编辑部
·276· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 4期