全 文 ：·1026· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
G一821树脂提取三七叶皂苷的工艺研究
刘 睿，高 巨，王春红，施荣富。
(南开大学功能高分子材料教育部重点实验室，高分子化学研究所，天津300071)
三七为五加科植物三七Panaxnotoginseng
(Burk)F．H．Chen的块根，具有活血化瘀、消肿止
痛的作用，且能滋补强身。其主要活性成分为三七总
皂苷。三七叶与块根有相似的药理作用，其主要活性
成分亦为三七总皂苷，以人参皂苷Rb。、Rg，、Re和
三七皂苷R。为主要成分。对于三七叶中有效成分
的提取常采用传统的溶剂法、平面色谱和硅胶柱色
谱等[1]。但是这些方法或者工艺落后、产品质量分数
不高，或者不利于大规模生产。目前树脂吸附法已用
于分离纯化已知活性天然产物，并显示出高效、简
单、快速、适于产业化等诸多优点。因此，本实验采用
树脂吸附法提取三七叶总皂苷，使其达到较高的质
量分数。在筛选了AB一8、D一380、G一821树脂后，发现
强极性树脂G一821对三七叶皂苷的分离纯化有良
好的作用。
1材料与仪器
三七叶购于云南省文山州；甲醇、乙腈为色谱
纯；人参皂苷Re、Rg。、Rb，和三七皂苷R。对照品均
购于中国药品生物制品检定所；G一821树脂由本实
验室合成；AB一8树脂、D一380树脂由南开和成公司
提供。Waters高效液相色谱仪：Waters510HPLC
泵，Waters484紫外检测器。
2方法和结果
2．1上样液的制备：取10g粉碎的干三七叶，投入
到带有搅拌的三口瓶中，加入i00mL70％乙醇，升
温至60℃，搅拌提取3次，每次各lh，滤过，合并滤
液，浓缩，用95％乙醇沉淀，至不再产生沉淀为止，
滤过除去沉淀，旋转蒸发除去乙醇，定容到100mL，
即得。
2．2定量成分的确定：三七总皂苷的成分中主要
包含人参皂苷Rb。、Re、Rg。和三七皂苷R，，但是这
4种成分的HPLC法检测很难在同一个流动相里实
现[5]，因此采用流动相水一乙腈(80：20)用于测定人
参皂苷Re、Rg，、三七皂苷R。，水一乙腈(69：31)用
于测定人参皂苷Rb。，结果见图1。可见三七叶皂
t／min
图1三七叶皂苷中人参皂苷Rg。、三七皂苷R。(A)
和人参皂苷Rb，(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsf insenosidesRgl，
andnotoginsenosideR1(A)andgi senoside
Rbl(B)fromP．n toginsengleavessaponins
苷成分中人参皂苷Rb，的量较大，人参皂苷Rg。、Re
和三七皂苷R。的量很小，因此选用人参皂苷Rb，作
为衡量三七叶皂苷的一个参照。
2．3 色谱条件：TurnerKromasilC18色谱柱(200
mm×4．6mm，5弘m)；流动相：水一乙腈(69：31)；
体积流量为0．8mL／min；检测波长为210nm；柱温
为常温。
2．4标准曲线的绘制：精确配制4mg／mL人参皂
苷Rb。对照品溶液，分别稀释2、4、5、10、20倍，进样
测定峰面积值。以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐
标，线性回归，得曲线方程y=1．645×10叫X+
0。0279，r一0．9961。
2．5 相关指标的确定：收率以得到人参皂苷Rb。
的质量与提取使用三七叶的质量相比计算而得，质
量分数以三七叶皂苷中人参皂苷Rb。的比例表示。
2．6树脂的比较：分别用3种树脂对提取的三七叶
收稿日期：2006—10—12
基金项目：国家自然科学基金资助项目(50203005)；天津市自然科学基金资助项目(023613111)
*通讯作者施荣富Tel：(022)23503935
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万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1027·
溶液进行了吸附，结果见表1。可以看出G一821树脂
对分离纯化三七叶皂苷的效果明显好于其他两种
树脂。
表1 3种树脂的比较
Table1 Comparisonofthreer sins
7
capability
2．7吸附和洗脱性能的研究：G一821树脂的床体积
为15mL，吸附时流量为1BV／h，吸附完成后用水
洗去其中的杂质。然后分别用2倍床体积(BV)的
30％、50％、70％、95％乙醇，以流量为1BV／h对吸
附在G一821树脂上的三七叶皂苷进行洗脱。收集洗
脱液，测定其中人参皂苷Rb，的质量浓度，分别为
6．898、7．732、12．396、3．259mg／mL。可以看出，
70％乙醇的洗脱性能最好。
2．8树脂的吸附和洗脱曲线：G一821树脂为季胺基
功能基树脂，装柱15mL，通过处理，转换为
NH。+Cl一型树脂[2]。将转为水相的清亮的提取液上
柱，上柱液质量浓度为6．037mg／mL，流量为1
BV／h，每15rain收集一次，进行HPLC法测定，得
到树脂吸附曲线，见图2。可以看出，G一821的工作
吸附量为5BV的提取液，相当于每克树脂可以吸附
75mg的三七叶皂苷；饱和吸附量为7倍床体积，相
当于每克树脂可以提纯100mg以上的三七叶
皂苷。
吸附结束后，以3倍床体积水洗去杂质，然后用
70％乙醇溶液以1BV／h进行洗脱，每15rain收集
一次，进行HPLC法测定，得到树脂动态洗脱性能
曲线，见图3。可以看出，只要用2倍床体积的洗脱
剂就能达到洗脱的目的，70％乙醇对吸附在G一821
上的三七叶皂苷洗脱能够达到少量、快速的要求，洗
脱性能良好。
2．9树脂的再生和重复试验：将G一821树脂用乙
醇进行再生，进行重复试验，每个周期后再用同样的
方法再生，结果见表2。可以看出，树脂的性能稳定，
再生性和重复性良好。
3讨论
实验中发现，如果用1BV和2BV水来洗，得到
的三七叶皂苷粗提物发黏，含有较多的杂质；用
O 2 4 6 8
床体积／BV
图2 G一821树脂对三七叶皂苷的吸附曲线
Fig．2AdsorptioncurveofP．notoginseng
leavesonG一821resin
O 5 10 15 20 25 30
床体积／BV
图3 G一821树脂动态洗脱性能曲线
Fig．3StrippingcurveofP·notoginseng
leavesonG一821resin
表2 G一821树脂再生后的结果
Table2 ResultsofregeneratingG一821resin
再生次数 人参皂苷Rb-收率／％人参皂苷Rbl质量分数／％
3BV水洗时，杂质较少，而用4BV水洗时，产率降
低。所以选用3BV水来洗除杂质。
树脂对三七叶皂苷的吸附量很大，1g树脂一
次能够处理7．5～10g三七叶，经过树脂除去杂质
后，最后收率为4．05％，质量分数为83．4％。笔者在
工厂进行了中试规模的生产，干三七叶投料2．1t，
分25批生产，最后得到了约87．5kg三七叶皂苷，
产率都在4％以上，质量分数在80％～85％，与文献
报道相符口]。
本实验采用的溶剂主要是水和乙醇。在提取分
离三七叶总皂苷的整个工艺中不使用和接触其他有
机溶剂，因而“三废”无污染，生产环保安全，实现真
正意义上的天然、绿色产品。
References：
r1]XuX，XiaLZ，GaoJR．Capabilityofmacroporousad一
弱如巧加”m，O弓
万方数据
·1028· 中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
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TraditChinMed(云南中医学院学报)，2001，24(3)：7．
罗布麻、绿茶及其配伍对活性氧清除能方的比较
徐仰仓
(天津科技大学海洋生物制品研究室，天津300457)
茶叶中含有多种对人体健康有益的物质，能有
效清除氧自由基和脂类自由基，预防脂质过氧化，提
高血清SOD酶的活性，延缓衰老[1]。罗布麻茶是近
年来常见的一种保健茶，具有清除过氧亚硝酸离
子‘2|，清除羟自由基‘3|，抑制脂质过氧化‘引，提高血
清中SOD、CAT和GSH—PX酶活性的作用[5]。罗布
麻和绿茶的抗氧化能力的差别以及将两者混合，实
现功能互补还未见研究报道。因此本实验考察了绿
茶和罗布麻抗氧化能力的差异以及两者混合后抗氧
化能力的改变。
1仪器与材料
AL204电子天平(梅特勒一托利多上海有限公
司)，752N紫外可见分光光度计(上海精密科学仪
器有限公司)，RE一52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化
仪器有限公司)，电热恒温水浴锅(天津市中环实验
电炉有限公司)。
芦丁、氮蓝四唑(NBT)为Sigma公司产品，核
黄素、血红蛋白为生化试剂，其他试剂均为分析纯，
实验用水为二次蒸馏水。
罗布麻干叶和绿茶干叶购自天津市中新药业药
店，产地均为云南。
2方法和结果
2．1样品溶液的制备：罗布麻干叶和绿茶干叶购回
后，以芦丁为对照，采用UV法测定其中黄酮的
量‘引，结果罗布麻干叶中的黄酮的质量分数为45．2
mg／g，茶叶中的黄酮的质量分数为79．6mg／g。将
i00％罗布麻、50％罗布麻+50％绿茶，100％绿茶3
种配伍样品以50％乙醇37℃水浴浸提24h，减压
浓缩至20mL，即得罗布麻、罗布麻+绿茶、绿茶醇
提液。
2．2 提取液对超氧阴离子(O≯)的清除作用：采用
核黄素一NBT还原法[7]测定。0．1mL醇提液、0．2
mL0．1mol／LEDTA，0．1mL1．5mmol／LNBT，
2．55mL磷酸缓冲液(pH7．8)，0．05mL0．12
mmol／L核黄素组成反应体系，25℃下光照lo
min，在560nm波长下测定样品组吸光度(A，)值，
同法以水为对照组成反应体系，测定对照组吸光度
(A。)值，计算清除率[清除率一(A。一A。)／A。×
100％]。结果茶叶、茶叶+罗布麻和罗布麻醇提液的
清除率分别为71．4％、52．3％、38．1％(以一3)。可见
茶叶醇提液的清除效果最好，茶叶+罗布麻醇提液
的清除效果次之，罗布麻醇提液的清除效果
最差。
2．3 对羟自由基(·OH)的清除作用：·OH自由
基由Fenton反应产生，采用水杨酸比色法测定·
OH自由基[7]。0．5mL10m ol／L水杨酸，样品组
采用2．8mL0．4mol／L磷酸缓冲液(pH7．4)+0．2
mL醇提液，对照组采用3．0mL0．4mol／L磷酸缓
冲液(pH7．4)，0．5mL3．8mmol／LFe2+_EDTA
溶液，1mL4mmol／LH202组成反应体系，25℃
反应90min后，用乙醚抽提2，3一二羟基苯甲酸，分
别在510nm波长处测定样品组吸光度(A。)和对照
组吸光度(A。)，计算清除率[清除率一(A。一A。)／
A：×100％]。结果茶叶、茶叶+罗布麻和罗布麻醇
提液的清除率分别为18．6％、48．8％、69．8％(一
3)。可见茶叶醇提液对·OH的清除效果最差，茶
叶+罗布麻醇提液的清除效果次之，罗布麻醇提液
的清除效果最好。
2．4对过氧化氢(H。0。)的清除作用：采用碘化钾
收稿日期：2006—09—19
基金项目：国家自然科学基金项目(30670493)；天津市高等学校科技发展基金项目(20040711)
作者简介：徐仰仓(1964一)，男，甘肃人，副教授，博士(后)，从事自由基研究，在该领域内发表论文20余篇，获省部级奖1项。
Tel：(022)60601458Fax：(022360600358E—mail：xuyc@tust．edu．cn
万方数据
G-821树脂提取三七叶皂苷的工艺研究
作者： 刘睿， 高巨， 王春红， 施荣富
作者单位： 南开大学,功能高分子材料教育部重点实验室,高分子化学研究所,天津,300071
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(7)
被引用次数： 4次

参考文献(3条)
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南中医学院学报 2001(03)

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1. 邢秀芳.张颖.张志华.齐鹤.孙操.赵晶岩 三七不同工艺提取物的药效学比较[会议论文]-2006
2. 潘旭初 三七总皂甙的提取工艺[期刊论文]-数理医药学杂志2003,16(5)
3. 王玉华 三七总皂苷对脑缺血的药理作用研究[期刊论文]-中外医疗2011,30(14)
4. 王绪英.赵永芳 探讨NKA-9树脂分离七叶皂苷的效果[期刊论文]-武汉植物学研究2002,20(3)
5. 高春波 三七不同提取工艺的研究[期刊论文]-河北医学2005,11(9)
6. 余昌东.邱雄泉.梅全喜 三七总皂苷对脑血管的药理作用研究新进展[期刊论文]-中国医疗前沿2008,03(14)
7. 何晶 三七的药理作用[期刊论文]-首都医药2004,11(18)
8. 大孔树脂在三七叶皂苷脱色中的应用研究[期刊论文]-云南中医学院学报2005,28(3)
9. 李琼.钟秋明 三七的药理作用及其在牙膏中的应用研究[期刊论文]-牙膏工业2007(2)

引证文献(4条)
1.范云鸽.施荣富 离子交换树脂对三七叶总皂苷的脱色精制研究[期刊论文]-中国中药杂志 2008(20)
2.刘睿.武春密.王春红.施荣富.史作清 高比表面季铵基树脂的结构调控及在三七叶总皂甙纯化中的应用研究[期刊
论文]-高分子学报 2008(7)
3.龚行楚.闫安忆.瞿海斌 大孔树脂分离纯化中草药中皂苷类成分的研究进展[期刊论文]-世界科学技术-中医药现
代化 2013(2)
4.黄凤.向飞军.伍杰雄 三七叶皂苷成分及其单体提取分离研究进展[期刊论文]-中药材 2009(6)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200707025.aspx