全 文 ：中草蔼ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月·221·
二仙汤中总黄酮和淫羊藿苷的测定
年 华，张巧艳，郑汉臣，秦路平
(第二军医大学药学院，上海200433)
二仙汤由淫羊藿、仙茅、巴戟天、当归、黄柏、知
母6味中药组成，主要用于更年期综合征和骨质疏
松的治疗，临床应用疗效确切。处方中淫羊藿为君
药，具有补肾壮阳的功效，黄酮类成分为其主要有效
成分，而淫羊藿苷为主要活性成分。淫羊藿苷的测定
方法有毛细管电泳法[1]、薄层扫描法‘23和HPLC
法[3]。由于复方成分十分复杂，常用检测方法干扰较
大。因此本实验采用紫外分光光度法和高效液相色
谱法分别测定了二仙汤中总黄酮和淫羊藿苷，为复
方质量控制和工艺研究提供了依据。
1仪器与试剂
Shimadzu高效液相色谱系统，SPD一10A紫外
可见光检测器，LC一10ATVP(恒流泵)。UV一2450
紫外可见分光光度仪(Shimadzu)。Branson8510超
声提取器。淫羊藿苷(批号：0730—200111)购自中国
药品生物制品检定所，二仙汤由本院生药教研室提
供。试剂均为分析纯，水为重蒸水。
2总黄酮的测定
2．1溶液的制备：精密称取干燥至恒重的淫羊藿苷
对照品5mg，置25mL量瓶中，加甲醇适量，超声使
之溶解，用甲醇稀释至刻度，制成0．2mg／mL淫羊
藿苷对照品溶液。供试品溶液：精密称量组方所需6
味药材各1g，加入60mL蒸馏水，煮沸提取2次，每
次2h，滤过，合并滤液，冷却，浓缩定容至100mL，
即得。检测时用甲醇稀释100倍，作为供试品溶液。
2．2标准曲线制备：精密称取干燥至恒重的淫羊藿
苷对照品5mg，置25mL量瓶中，加甲醇适量，超声
使之溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述
溶液0．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0mL于50mL量
瓶中，用甲醇加至刻度，摇匀。分别精密量取10．0
mL，各加入0．1mol／L三氯化铝溶液1．0mL，摇
匀，于70℃恒温水浴中放置10min使充分显色，取
出后室温放置15min，以第1份试样为空白，照分
光光度法，在410am波长处测定吸光度。以淫羊藿
苷质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲
线，并进行线性回归，得回归方程：C一87．325A一
0．1714，r—O·9999。
2．3 回收率试验：精密量取5份已知总黄酮量的样
品溶液1mL，各加入1．10mg淫羊藿苷对照品，稀
释后测定，计算回收率。结果平均回收率为
100．27％，RSD为1．36％(咒=5)。
2．4样品的测定：将二仙汤用甲醇稀释100倍后，
作为供试品溶液。量取10mL，精密加入0．1mol／L
三氯化铝溶液1mL，使摇匀，于70℃恒温水浴放置
10min，取出后室温放置15min，以试剂为空白，按
比色法规定进行检查，在410nm波长处测定吸光
度。按照回归方程计算，结果见表1。
表1 二仙汤中总黄酮和淫羊●苷测定结果
TableTotalf avonoidsanicariinInErxianDecoction
3淫羊藿苷的测定
3．1 色谱条件：色谱柱：Hypersil—BDSC18(200
mm×4．6mm，5弘m)；流动相：甲醇一水一冰醋酸
(80：70：2)；体积流量：1．0mL／min；检测波长：
270am；灵敏度：0．08AUFS。
3．2溶液制备：精密称量组方所需6味药材各1g，
加入60mL蒸馏水，煮沸提取2h，提取液冷却浓缩
后定容至100mL，即得二仙汤。检测时用蒸馏水稀
释10倍后，摇匀，微孔滤膜滤过，滤液为供试品溶
液。按照处方比例，除去淫羊藿药材，相同制备方法
制得阴性溶液。
3．3标准曲线的制备：精密称量干燥至恒重的淫羊
藿苷对照品适量，以流动相制成0．5、1．0、2．0、4．0、
6．0、8．0、10．0、15．0ttg／mL淫羊藿苷对照品系列
收稿日期：2005—04—13
基金项目：国家自然科学基金资助项目(90209043)
作者简介：年华(1978一)，男(纳西族)，上海市人，药师，博士研究生，研究方向：生药学。
Tel：(021)25074578(021)55833965E—mail：jackynian@sohu．corn
万方数据
·222· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第2期2006年2月
溶液，取20弘L注入色谱仪，测定。以质量浓度为横
坐标、峰面积为纵坐标，进行线性处理，得回归方程
y=19055X一278．08，r=0．9999。结果表明，淫羊
藿苷在0．51～15．20}tg／mL内呈良好的线性关系。
最低检测质量浓度为0．05pg／rnL。
3．4精密度试验：精密吸取淫羊藿苷对照品溶液，
重复进样5次，测峰面积，结果其RSD为0．56％。
3．5重现性试验：取同一批号的样品5份，制备供
试品溶液，进样，测定，计算淫羊藿苷的质量浓度，结
果其RSD为0．97％。
3．6稳定性试验：取配制好的待测供试品溶液，每
隔4h测定1次。结果表明淫羊藿苷的面积在48h
内保持稳定，RSD为1．2％。
3．7回收率试验：精密量取含淫羊藿苷9．0,ug／mL
样品适量，各5份，分别精密加入4．oo弘g淫羊藿苷
对照品，在上述色谱条件下测定并计算回收率。结果
平均回收率为100．29％，RSD为1．12％。
3．8样品的测定：将二仙汤用蒸馏水稀释10倍后，
摇匀，微孔滤膜滤过，滤液为供试品溶液。精密吸取
20肛L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。根据
标准曲线计算淫羊藿苷，结果见表1。色谱图见图1。
』止■一8 10 12 148 10 12 14 8 】0 12 14
t／min—
*一淫羊藿苷
*一icariin
圈1淫羊藿苷对照品(A)、二仙汤(B)和缺淫羊藿
阴性对照(C)的HPLC图
Fig。lHPLCchromatogramsfic riinreference
SUbstance(A)，ErxianDecoction(B)，and
negativesample(C)
4讨论
4．1黄酮显色剂的选择：由于复方成分复杂，紫外
吸收相互干扰大，必须运用显色剂。比较了亚硝酸
钠一硝酸铝法、硝酸铝、三氯化铝显色系统，发现只有
氯化铝显色后，峰形稳定且回收率可靠。显色时间和
显色剂用量反复考察后，发现在本法显色剂用量下，
对照品和供试品溶液显色后15～40min内显色稳
定，吸光度变化不大。
4．2紫外检测波长的选择：在控制的显色时间内将
对照品溶液与供试品液在200～600nm波长进行
扫描。结果均在410nm波长处有良好的吸收峰，且
阴性对照在此波长处无干扰。故选择410nlTI波长
处测定总黄酮。
4．3 高效液相色谱条件的选择：对淫羊藿苷对照品
在200～600nm波长进行紫外扫描，淫羊藿苷在
270nlTl处有最大吸收，并且供试品色谱中其他组分
在淫羊藿苷出峰处可以达到基线分离，且灵敏度高，
故确定270nm作为测定波长。通过对流动相分离
效果的反复比较，本实验的色谱条件分离效果最佳，
杂质干扰最少。
4．4本研究采用紫外分光光度法和高效液相色谱
法直接测定复方二仙汤中总黄酮和淫羊藿苷，无需
进一步纯化提取过程。该法简便易行，快速，结果准
确可靠，可为二仙汤质量控制标准的制定提供参考。
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】9(4)1365—366．
羊栖菜多糖酶法提取工艺研究
张华芳，金京顺，周来温，沈澄
(绍兴文理学院医学院，浙江绍兴312000)
羊栖菜Sargassumfusiforme(Harv．)Setchell
习称小叶海藻，其干燥藻体全体入药，称为海藻，具
有消痰软坚、利水消肿的功效。现代药理研究表明，
羊栖菜有增强免疫功能、降胆固醇、抗肿瘤等作
收稿日期：2005—04—17
基金项目：浙江省教育厅项目(20031130)
作者简介：张华芳(1976一)，女，浙江绍兴人，讲师，硕士，主要从事天然药物的研究和开发工作。E—mail：huafang—zhang@hotmail．com
万方数据
二仙汤中总黄酮和淫羊藿苷的测定
作者： 年华， 张巧艳， 郑汉臣， 秦路平
作者单位： 第二军医大学药学院,上海,200433
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(2)
被引用次数： 4次

参考文献(3条)
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