全 文 :中草药ChineseTraditionata丽ndHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·1489·
度,摇匀,分别量取0.2、0.6、1.0mL,蒸干,分别精
密量取甲醇0.5mL充分溶解,配制成低、中、高3
个水平的对照品溶液(含五味子醇甲、五味子乙素分
别为10.24和7.96、30.72和23.88、51.20和
39.80,ug/mL),分别进样10p.L,测定峰面积并计算
平均值,作为对照组,同时用2.6项下制备的低、中、
高3个水平的对照品溶液分别进样10肛L,测定峰
面积,每个水平重复5次,作为样品组,将样品组峰
面积与对照组峰面积比较,得低、中、高3个水平五
味子醇甲、五味子乙素的绝对回收率分别为
68.11%、68.34%、68.25%和58.01%、55.51%、
54.68%。
2.8样品测定:取含药血清、含药血浆各5份,制备
含药血清、含药血浆供试品溶液,20扯L注入液相色,
谱仪,测定峰面积,计算五味子醇甲、五味子乙素的
质量浓度,结果见表1。
表1 血清和血浆中五味子醇甲和五味子乙素的测定(n一2)
Table1 DeterminationofschisandrinandschisandrinBinserumandplasma(n一2)
样 五味子醇甲 五味子乙索 样 五味子醇甲 五味子乙素
品 质量浓度/(pg·mL一1)RSD/% 质量浓度/(pg·mL一1)RSD/g品 质量浓度/(pg·mL一1)RSD/g质量浓度/(pg·ml。一1)RsI)/%
1 11.9986 6.9745 1 12.3275 11.99l4
2 1I.6821 8.9795 2 12.2389 13.7208
3 10.0977 6.98 8.1282 14.383 13.2683 4.49 12.8538 11.2l
4 10.8740 7.1635 4 13.0346 l3.9187
5 10.6635 6.2088 5 13.549 10.4694
3讨论
本实验结果表明,复方五仁醇胶囊主要入血成
分五味子醇甲、五味子乙素在血浆中的量均高于血
清,尤其是极性较小的五味子乙素在血浆中的量是
血清的1.68倍,这可能是由于在凝血形成过程中,
纤维蛋白及其网罗的血细胞可能吸附或结合一些中
药成分,特别是极性较小成分的缘故,所以采用含药
血浆进行该制剂药效研究似乎比含药血清更好;而
且理论上讲,血浆药理学也不违背“中药虽成分众
多,但只有那些被消化吸收进入血液的成分或其代
谢产物才有产生药效的可能”的观点。因此从药效成
分量的角度看,推测用含药血浆研究中药药理学可
能更为合理。
References:
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金银花的HPLC药效指纹图谱研究
梁生旺1,崔永霞2,王淑美2,吴明侠2‘
(1.广东药学院中药学院,广东广州 510024;2.河南中医学院,河南郑州450008)
摘 要:目的 找出金银花中与抗炎活性成正相关的化学成分,并以此建立金银花的药效指纹图谱。方法采用
HPLC法分析,获得金银花不同提取部位的指纹图谱,同时选择小鼠耳肿胀抗炎实验测定不同提取部位的药理活
性,以线性回归解释化学信息和药理活性的相关关系。结果 以甲醇提取部位的药理活性最强,故以此部位的
HPLC图谱来制定金银花的“药效谱”。结论采用该方法制定得到的金银花的药效指纹图谱更为科学、合理。
关键词:金银花;抗炎;药效指纹图谱;高效液相色谱
中图分类号:R286.02 文献标识码:B 文章编号:0253—2670(2006)10—1489—05
收稿日期:2005一12一06
作者简介:梁生旺,男,教授,从事中药质量控制研究。
Tel:(020)39352172 E—mail:swlian9371@163.corn
万方数据
·1490· .中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
PharmacodynamicfingerprintofFlosLonicereabyHPLC
LIANGSheng—wan91,CUIYong—xia2,WANGShu—mei2,WUMing—xia2
(1.CollegeofChineseMateriaMedica,GuangdongCollegeofPharmacy,Guangzhou510024,China;
2.HenanCollegeofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450008,China)
Abstract:ObjectiveLook ngforthechemicalcomponentswhichhavepositivecorrelationsw tha ti—
inflammatioryctivityofFlosLonicereatOs tuppharmacodynamic—fingerprint.MethodsTogainthefin—
gerprintsOfdifferentpar sbyHPLCandtOdetectthepharmacologicalactivitiesOfanti—inflammation.then
thecorrelationshipbetweenchemicalcomponentsandpharmacologicalactivitiesweredetectedbylinearre—
gression.ResultsPharmacologicalactivitiesofthemethanolextractedpartwerebestofall,SOthefinger—
printofthemethanolpartcouldrepresentthepharmacodynamic—fingerprintofFlosLonicerea.Conclusion
Thefingerprintestablishedbythiswayismorescientificandreasonable.
Keywords:FlosLonicerea;anti-imflammation;pharmacodynamic—fingerprint;HPI。C
金银花是忍冬科植物忍冬Lonicerajaponica
Thunb.的干燥花蕾或带初开的花,具有清热解毒、
凉散风热之功效。化学成分研究表明金银花主要含
有机酸类、三萜类、黄酮类、挥发油类成分[1]。《中国
药典>>2005年版一部中金银花的质量控制仅局限于
绿原酸的薄层鉴别及定量测定,仍采用了对化学药
品质量控制的模式,不能全面地反映金银花的内在
质量。因金银花具有较强的抗炎作用,故本实验对其
不同提取部位进行抗炎实验研究,同时又制定出金
银花不同提取部位的指纹图谱,揭示了化学信息与
药理活性之间的关系[2],找出了与药效成正相关的
成分,并制定出能代表金银花有效性的指纹图谱。
l仪器与试药
日本岛津2010A高效液相色谱仪;PDA检测
器;Sartorius分析天平;KQ一100型超声波清洗器;
HH.S11—2型水浴锅。
金银花采自河南省封丘县金银花GAP基地的
10个自然村,经河南中医学院曹继华教授鉴定;绿
原酸对照品购自中国药品生物制品检定所(批号
110753—200212);乙腈为色谱纯,甲醇、冰醋酸等试
剂均为分析纯,双蒸水(自制)。
2方法与结果
2.1抗炎活性研究
2.1.1溶液的制备
水部位溶液的制备:取金银花粗粉适量,加水浸
泡30min,煎煮15min,滤过,浓缩,制成每毫升相
当于500mg药材的药液。
其余部位溶液的制备:取金银花粗粉,分别加各
提取溶剂(甲醇、乙醇、正丁醇、醋酸乙酯、氯仿)热回
流提取1h,滤过,蒸干:得到各单一溶剂提取部位,
用0.1%羧甲基纤维素钠溶液制成每毫升相当于
500mg药材的药液。
混合样品溶液的制备:将水、甲醇、正丁醇、醋酸
乙酯、氯仿部位以相当于药材的量1:1两两混合,
用0.1%羧甲基纤维素钠溶液制成每毫升相当于
500mg药材的药液,制得lO份?昆合样品溶液。
阳性对照溶液的制备:取阳性抗炎药物阿斯匹
林,研细,加蒸馏水及少量羧甲基纤维素钠配制成
6.25mg/mL的溶液。
2.1.2 小鼠耳肿胀抗炎实验:取昆明种雄性小鼠
180只,随机分成18组,即为16个提取部位的有效
剂量组(根据临床用量和动物有效剂量筛选结果确定
为187.5mg生药/只)、空白组(O.1%羧甲基纤维素
钠溶液)、阳性对照组(2.5rag/只)。各组连续以有效
剂量ig给药4d,于末次给药1h后,以二甲苯0.05
mL涂抹每只小鼠右耳两面,1.5h后,脱颈椎处死小
鼠,以直径9mm打孑L器,将小鼠双耳同部位等面积
切下,电子天平称定质量,左耳为对照,计算左右耳质
量差值为肿胀度,分别得出18组小鼠的肿胀度,结果
见表1,以甲醇提取部位的抗炎活性最强。
表1小鼠耳肿胀抗炎实验结果(上±s,疗=10)
Table1 Resultsofanti—inflammationof ice
earedema(J±s,n一10)
组别 肿胀度/mg 组另1 肿胀度/mg
水部位 5.20士0.22水一氯仿 7.01士0.28
甲醇部位 1.20士0.14甲醇一正丁醇 3.95士0.21
乙醇部位 3.05士0.16甲醇一醋酸乙醑4.23士0.19
正丁醇部位 6.36士0,28甲醇~氯仿4.55士0.23
醋酸乙酯部位 7.67士0.30正丁醇一醋酸乙酯 6.98士0.25
氯仿部位 7.79士0.29正丁醇一氯仿 7.30士0.28
水一甲醇 3.94士0.23醋酸乙酯一氯仿 7.73士0.36
水一正丁醇 6.43士0.24阿斯匹林 1.96土0.19
水一醋酸乙酯 6.90士0.28空白对照组 7.59士0.36
2.2各成分的HPLC分析‘¨]
2.2.1色谱条件:色谱柱:YWG5一C。。柱(250mm×
4.6mitt,5肛m);柱温:40。C;流动相:乙腈一0.05%
冰醋酸,采用线性梯度洗脱程序:0~60min、乙腈
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·1491·
1%~30%,0.05%冰醋酸99%~70%;体积流量:
0.9mL/min;运行时间:60min。
2.2.2供试品溶液的制备
水部位供试品溶液的制备:取金银花粉末
0.5g,精密称定,置锥形瓶中,精密加水50mL,称
定质量,浸泡30min后煎煮15min放冷,再称定质
量,用水补足减失的质量,摇匀,滤过,精密量取续滤
液5mL,水浴蒸干,用甲醇定容至5mL,0.45肛m
滤膜滤过,即得。
其余部位供试品溶液的制备:取金银花粉末
0.5g,精密称定,分别精密加入甲醇、乙醇、正丁醇、
氯仿、醋酸乙酯各50mI。,称定质量,水浴回流提取
1 h,取出,放冷,再称定质量,补足减失的质量,摇
匀,滤过,精密量取续滤液5ml。,水浴蒸干,用甲醇
定容至5mL,0.45肛m滤膜滤过,即得单一溶剂供
试品溶液。将上述提取液分别精密量取2.5mL两
两混合(乙醇部位除外),于水浴蒸干,加甲醇定容至
5mL,0.45弘m滤膜滤过,即得各混合溶剂供试品
溶液。
2.2.3参照物溶液的制备:因为绿原酸为金银花中
的重要活性成分,故选择绿原酸作为制定金银花指
纹图谱附参照物。精密称取绿原酸对照品适量,加甲
醇配制成46.0gg/mL对照品溶液。
2.2.4方法学考察
稳定性试验:取同一份供试品溶液(甲醇提取部
位),分别在0、2、4、8、12、16、20、24h检测。结果表
明,峰面积占总峰面积2%以上峰,其色谱峰的相对
保留时间和峰面积的比值基本没有明显变化
(RSD<30.4),溶液基本稳定。
精密度试验:取同一供试品溶液(甲醇提取部
位),连续进样5次,考察色谱峰的相对保留时间、峰
面积比值的一致性,结果表明,峰面积占总峰面积
2%以上的峰,其色谱峰的相对保留时间和峰面积的
比值RSD<3%,符合指纹图谱的技术要求。
重现性试验:取金银花甲醇提取液5份,依法测
定,结果表明峰面积占总峰面积2%以上的峰,其色
谱峰的相对保留时间和峰面积的比值RSD<3%,
符合指纹图谱的技术要求。
2.2.5HPLC测定:精密吸取供试品溶液和对照品
溶液各10弘L,分别注入液相色谱仪,按照上述色谱
条件进行检测,记录60min的色谱峰,即得。以绿原
酸色谱峰(s峰)的保留时间及峰面积为1,计算各共
有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的比值。并
按照“中药注射剂指纹图谱研究的技术要求”制备
10批样品不同提取部位的供试品溶液,分别建立不
同提取部位的指纹图谱。
2.2.6相对保留值指纹图谱的建立
相对保留值a的计算:选择出峰时间居中,峰面
积较大,各样品均存在的绿原酸的色谱峰为参照峰,
其a值为1,求出样品中所有峰的相对保留值a(a一
£ni’/tn。7,£ni7为各组分的调整保留时间,£R。7为绿原酸
的调整保留时间)。
a值窗口的设定:由于保留时间受各种实验因
素的影响,每~次实验数据不可能完全一致,故对每
个峰位的a值设定窗口为1%,也就是每个峰位a
值取可信限在±1%的范围内。
指纹谱的建立:按a值大小次序排列,在每个a
项下标出该组分的相对面积比值(RA)。Rn是以金
银花色谱峰的总面积为分母,样品中各色谱峰面积
为分子,计算得到各色谱峰的相对面积值。通过Rn
的比较,就可以清楚地了解各种样品中该组分的量
的多少。这样,由a值和Rs值组成样品的HPLC相
对保留值指纹谱。R。为各峰与参照物的峰面积比
值,以衡量样品中各成分比例稳定情况,以评价样品
中成分的稳定性。即R。=?峰的面积值/s参照物峰
面积值×100%。
根据样品的HPLC图谱,计算相对保留时间a
和相对峰面积比值R。。凡是a值相同或相近(误
差
无相应峰的样品,其R。值计为0,得到16个部位的
相对保留值指纹图谱。
2.3药量实验结果及指纹图谱相关性研究
2.3.1波长选择的原则:波长的选择应该使药理效
果好的部位有最佳的分离度和灵敏度,而且在此波
长下还要求与药理效果成正相关的峰最多,总峰面
积最大,使有效峰的峰面积占总峰面积的比例最大,
这样才能将金银花有效性的信息最大限度地反映在
指纹图谱上。
2.3.2方法:将小鼠耳肿胀的药理实验结果(表1)
与金银花各提取部位的HPLC图谱Rs数据,分别
进行逐步回归分析。其中与327nm波长处的HPLC
图谱Rs数据所建立的回归方程中有9个变量(色谱
峰以x表示)作用显著被保留,其中x。、x:、x。、x。、
x。、x。、x。。与抗炎活性成正相关,其中色谱峰X。为
绿原酸,X。和x,。与抗炎活性成负相关,回归方程为
Y一一0.935Xl一30.595X2+1.592X3—0.255X4—
16.98X。一3.127X。一’6.919X9—0.909X1。+
万方数据
·1492· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
2.437Xl,(y:药效指标,x:色谱峰);在与243ri.m
波长处的HPLC图谱Rs数据所建立的回归方程中
有12个变量作用显著被保留,其中色谱峰x,、X。、
X,-、X。z、X,¨X.。、X,。与抗炎活性成正相关,其中色
谱峰X,是绿原酸,x。、X。、X。。、x。。与抗炎活性成负
相关,回归方程为Y一2.245X2—0.155x,+1.512
X8—6.091X9+0.367X10一1.514X】】一3.900
X1z一0.878X13—1.440X】4+7.874X】5—2.346
x,。(y:药效指标,X:色谱峰)。
2.4 结果:在327nm波长和243DE波长处分别
得到7个抗炎活性成正相关的峰,由不同波长下不
同提取部位的指纹图谱数据可知,甲醇部位HPLC
图谱含有与抗炎活性呈正相关的峰最多,而且峰面
积之和最大,分离度较好。其中327nm波长处的甲
醇部位HPLC图谱中含有6个与药效成正相关的
色谱峰,分别是zl、z3、z4、z6、z7、z8,由10批样品指
纹图谱可得有效峰的峰面积和的均值为
14908110,占色谱图总峰面积的均值为94.12%,
而243nlTl波长处的甲醇部位HPLC图谱中含有7
个与药效成正相关的色谱峰,为甲醇部位指纹图谱
色谱峰z4、z5、z7、z8、z9、zlo、z12,10批样品指纹图谱
中有效峰的峰面积和均值为10677994,占色谱图
总峰面积的均值为77.58%,与药效成负相关的色
谱峰为甲醇部位指纹图谱色谱峰z。、z。、X,、z。。。根
据波长选择原则,故选用327nm波长处的甲醇提
取部位的指纹图谱来建立金银花的“药效指纹图
谱”,见图1。10批样品的叠加图谱见图2。以甲醇部
位有效峰的相对峰面积比值来建立金银花的相对保
留值“药效指纹图谱”见表2。
o lO 20 30 40 50 60
t|min
图l金银花药效指纹图谱
Fig.1Pharmacodynamic—fingerprintofFlosLonicerea
3讨论 ’ t
3.1 检测波长的选择:利用二极管阵列检测器
(PDA),每5rim波长采集一组数据,经比较在波长
为243nm处,绿原酸也有较强的吸收且总峰面积
最大、各峰分离效果较好,但与药效呈正相关的峰占
总峰面积的比例较小;在波长为327ilm时,绿原酸
有最大吸收,所得到的与药效成正相关的峰总峰面
积较大,分离度较好,故本实验选取327rim作为检
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、。,L.n.一儿Jk
0 10 20 30 40 50 6U
l|min
图2 lO批甲醇帮l位韵HPLC指纹仪圈叠加图(A=327rim)
Fig.2HPLCFingerprintofmethanol·extractedpa t
oftenbatchesofsamples(A=327nm)
测波长。本研究采用PDA检测,没有紫外吸收的则
没有信号,有待进一步研究。
表2金银花保留值药效指纹图谱
Table2 Pharmacodynamic-fingerprintofrelative
peakareaofFlosLonicerea
不同a值的Rs样品——
0.558 1.000 1.204 2.19l 2.290
3.2流动相的选择:由于金银花成分复杂,单一流
动相无法达到很好的分离效果,而采用梯度洗脱可
以在整个分析时间段(60min)内,各色谱峰达到很
好的分离效果且相对保留时间稳定。考察了不同组
成、不同比例以及不同洗脱梯度的流动相的分离效
果,结果表明本实验所采用的流动相分离效果较好。
3.3药效指标的选择:应根据金银花的功能主治设
计较全面、合理的药效指标。本研究仅选择抗炎试验
为指标不能全面地反映金银花的质量,所得到的结
果有一定的局限性,甲。醇部位指纹图谱中与抗炎活
性成负相关的色谱峰为X:、znz。,在制定甲醇部位
指纹图谱的相对保留值指纹图谱时,将这3个色谱
峰排除在外,但是并不能完全排除这3个峰对金银
花药效的贡献作用,有待进一步研究。
3.4多元线性回归结果分析:笔者采用多元线性回
归法提取出7个与抗炎活性成正相关的有效特征
峰,其中甲醇部位的3号峰为绿原酸,这与传统认为
绿原酸是金银花的有效成分相一致,但从结果可以
弛押∞拍n勰∞撕∞弘i{}l
0
O
O
O
0
0
0
O
O
0
∞m如如∞加m
M加¨
万方数据
中草药 ChineseTraditional’andHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·1493·
看出,金银花中还有其他成分亦有显著的抗炎活性,
有待进一步研究。
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石菖蒲双层片的研制
林 青1,周莉玲1,刘燕华1,唐洪梅2
(1.广州中医药大学中药学院,广东广州 510405;2.广州中医药大学第一附属医院药剂科,广东广州510405)
摘 要:目的 制备石菖蒲双层片。方法 以缓释层的释放性能为指标,采用拟水平均匀设计优选石菖蒲双层片缓
释层的处方,以超滤法浓缩石菖蒲水煎液制备速释层,体外释放度试验研究了缓释层的释药机制及影响因素。结果
所制双层片缓释层的体外释放符合零级动力学过程,速释层能在10min内崩解。结论石菖蒲双层片缓释层体外
释放证明有明显的缓释作用,速释层崩解迅速,双、层片处方设计合理,工艺简单、可靠。
关键词:石菖蒲;石菖蒲双层片;释放度
中图分类号:R283.3;R286.02文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)10—1493-。04
PreparationofShichangpuDoubleLayerTablets
LINQin91,ZHOULi—lin91,LIUYan—hual,TANGHong—mei2
(1.CollegeofPharmacy,GuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510405,China;2.Department
ofPharmacy.FirstAffiliatedHospitalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510405,China)
Abstract:ObjectiveToprepareShichangpuDoubleLayerTablets.MethodsThereleaseofthe
sustained——releaselayer(SRL)wasusedastheresponseparametersanduniformdesignwithalterablelev—-
elswasusedtooptimizeth recipeofSRLofShichangpuDoubleLayperTablets.Fast—releaselayer
(FRL)wasmadefromwaterxtractionbyultra—filtration.ResultsThedi solutionkineticsofSRLcould
followzero—orderequationandFRLshowedgoodprosperitiesforfastreleasein10min.ConclusionThe
invitroeleaseofSRLofShichangpuDoubleLayerTabletste tifiesthesignificantsustainedreleasection
andFRLdisintigratesrapidly.Thepreparationtech ologyofShichangpuDoubleLayerTabletisreliable
andsimple.
Keywords:AcorustatarinowiiScllott;ShichangpuDoubleLayerTablets;releaserate
临床常用醒脑开窍中药石菖蒲入药历史悠久,
因其具有显著的脑保护作用,有望开发成治疗脑血
管系统疾病的新药。研究发现石菖蒲挥发油与临床
所用的水煎液部位(即汤剂)均是镇静、催眠、抗惊厥
的有效部位[1]。由于石菖蒲挥发油小剂量即有显著
的生理活性,主成分细辛醚类在体内吸收和代谢迅
速[z’3],临床使用需多次给药,血药浓度起伏范围很
大,可能产生不良反应甚至中毒。制备成缓释制剂是
克服此缺点的有效手段。为了既沿用传统汤剂的优
势又具有新型制剂的确切释放效果,提高用药安全,
减少服药次数,本实验将石菖蒲挥发油与水煎液部
位同步应用,开发为双层片(doublelayertablets,
DLT),其中石菖蒲挥发油部位为缓释层(sustained—
releaselayer,SRL),水煎液部位为速释层(fast—re—
leaselayer,FRL)。
1材料与仪器
石菖蒲挥发油一B—CD包合物(自制,包合及未包
合挥发油总质量分数为20%,含水量为9.77%,其
收稿El期:2005一12—24
作者简介:林青(1973一),女,福建仙游人,制药工程师,博士,2003年毕业于广州中医药大学,主要从事中药药剂及质量标准研究,现
承担3项广东省、广州市科技攻关项目,2002年参与课题获科技进步三等奖。
Tel:(020)87200925E—mail:linqinglore@sohu.com
万方数据
金银花的HPLC药效指纹图谱研究
作者: 梁生旺, 崔永霞, 王淑美, 吴明侠, LIANG Sheng-wang, CUI Yong-xia, WANG Shu-
mei, WU Ming-xia
作者单位: 梁生旺,LIANG Sheng-wang(广东药学院中药学院,广东,广州,510024), 崔永霞,王淑美,吴
明侠,CUI Yong-xia,WANG Shu-mei,WU Ming-xia(河南中医学院,河南,郑州,450008)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2006,37(10)
被引用次数: 15次
参考文献(4条)
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本文读者也读过(8条)
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