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HPLC 法测定三七及其制剂中三七素
付春梅, 朱　静, 刘三康, 李章万Ξ
(四川大学华西药学院, 四川 成都　610041)
　　三七为五加科植物三七 P anax notog inseng
(Bu rk. ) F1H 1 Chen 的干燥根, 其中所含三七素
(dencich ine, Β2草酰基2L 2Α, Β2二氨基丙酸) 具有止
血作用[1, 2 ] , 因此三七在祖国传统医药中广泛用于跌
打损伤的治疗。研究进一步证明三七素具有止血、增
加血小板数的药理活性[3 ]。目前, 三七素的测定主要
采用的是氨基酸自动分析仪[4, 5 ] , 该法具有分析结果
准确的优点, 但仪器价格昂贵, 且不能应用于其他成
分的分析。也有将三七素进行荧光衍生化后, 采用薄
层扫描的方法测定[6 ] , 但衍生化产物不稳定, 扫描定
量中引起误差的因素较多, 准确度不高。本实验采用
离子对反相液相色谱法对三七素进行分离测定, 灵
敏、快速、准确, 可用于三七药材及其复方制剂中三
七素的测定。
1　仪器与试药
　　日本岛津L C—10A 高效液相色谱仪, SPD—
10AV P 紫外检测器, CTO —6A 柱温箱, SEPU 3000
色谱工作站 (杭州普惠科学仪器有限公司)。三七素
对照品 (四川大学华西药学院药化教研室提供, 质量
分数大于 99% ) , 三七药材 (产地: 云南文山) 经四川
大学华西药学院生药教研室张浩教授鉴定为五加科
植物三七的干燥根, 三七制剂为市售; 实验用水为超
纯水, 甲醇为色谱纯, 其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
211　色谱条件: 迪马D iamon silTM C 18色谱柱 (200
mm ×416 mm , 5 Λm ) , 自填国产 CYW C 18保护柱
(10 mm ×415 mm , 5 Λm ) , 流动相为含 315 mmo lö
L 磷酸二氢钠的甲醇20103% 四丁基氢氧化胺 (20∶
80, 磷酸调pH 为 318) , 体积流量为 1 mL öm in, 柱温
40 ℃, 检测波长为 220 nm , 进样量为 20 ΛL。
212　对照品溶液的制备: 取三七素对照品约 5 m g,
精密称定, 用流动相溶解制成 011 m gömL 溶液作为
对照品溶液。
213　供试品溶液的制备: 取粉碎的三七根粉 1 g, 精
密称定, 置 50 mL 烧瓶中, 加硼砂缓冲液 (pH 9118)
25 mL , 水浴回流 1 h, 提取液转移至 50 mL 量瓶中,
残渣加硼砂缓冲液 15 mL 回流提取 015 h, 提取液
转移至 50 mL 量瓶中, 残渣用硼砂缓冲液洗涤, 合
并提取液与洗涤液, 用硼砂缓冲液定容至 50100
mL , 混匀, 滤过, 即得。
214　线性及范围: 配制不同质量浓度对照品溶液,
注入液相色谱仪测定。以三七素峰面积对进样量进
行线性回归, 回归方程为 Y = - 2112×104+ 6198×
105 X , r= 01999 7, 线性范围为 01202～ 4104 Λg。
215　精密度试验: 同一供试品溶液重复进样 5 次,
三七素峰面积积分值的R SD 为 0185%。
216　重现性试验: 同一批样品平行测定 5 份, 测得
其平均质量分数为 5161 m gög, R SD 为 111%。
217　稳定性试验: 在 4 个不同日期测定同一批供试
品, R SD 为 115%。
218　加样回收率试验: 精密称取三七粉末 (含三七
素 5161 m gög) 适量 (014、015、016 g) , 分别加入三
七素对照品 (212、218、314 m g) , 按供试品溶液制备
方法制成高、中、低 3 种质量浓度溶液各 3 份, 测定。
结果平均加样回收率为 9818% , R SD 为 117%。
　　按制剂处方配制空白样品 (不含三七) , 按供试
品溶液的制备方法制备空白溶液并测定, 结果 3 种
制剂空白均不干扰三七素测定。冠心丹参片、复方三
七胶囊、复方丹参片的高、中、低 3 种质量浓度空白
加样平均回收率分别为 9812% (R SD 为 211% , n=
·86· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2005203223
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (30271535)
作者简介: 付春梅 (1971—) , 女, 讲师, 硕士, 主要从事药物分析教学及科研工作。T el: (028) 85503272　Fax: (028) 85501634
E2m ail: lizhangw anlab@ 1631com3 通讯作者　李章万　E2m ail: lizhangw anlab@ 1631com
9)、9716% (R SD 为 115% , n= 9)、9911% (R SD 为
214% , n= 9)。
219　样品测定: 对不同规格和部位的三七 (产地: 云
南) 及市售含三七的复方制剂进行测定, 结果见图 1
和表 1。
3 2三七素3 2dencich ine
图 1　三七素对照品 (A )、三七 (B)、冠心丹参片 (C)、复
方三七胶囊 (D )和复方丹参片 (E)的 HPLC 图
F ig11　HPLC Chromatogram s of denc ich ine (A) , 　　
P. notog inseng (B) , Guanx in Dan shen
Tablets (C) , Compound Sanch i Capsule (D ) ,
and Compound Dan shen Tablet (E)
3　讨论
311　色谱条件的选择: 曾采用OD S 及CN 基填料,
用多种缓冲溶液作为流动相, 以及采用十二烷基硫
酸钠作为离子对试剂, 结果均不理想。采用四丁基氢
氧化氨作为离子对试剂, 结果本实验选定的流动相
表 1　不同制剂中三七素的测定结果 (n= 3)
Table 1　D eterm ination of denc ich ine in d ifferen t
preparation s (n= 3)
　　　样　品 三七素ö(m g·g- 1)
20 头三七 5182
30 头三七 5177
40 头三七 5170
60 头三七 5165
80 头三七 5161
三七剪口 6109
冠心丹参片 (批号: 030912) 2105
复方三七胶囊 (批号: 040207) 1181
复方丹参片 (批号: 031120) 0160
使三七素在OD S 柱上保留适中, 峰形对称。磷酸二
氢钠浓度、流动相pH 值均影响峰形和分离度。三七
素在流动相中为末端吸收, 兼顾灵敏度及仪器噪声,
选择在 220 nm 波长处测定。
312　提取条件的选择: 根据三七素的溶解行为, 分
别采用水、50% 乙醇、甲醇、015% 氨水、硼砂缓冲液
(pH 9118) 为提取剂对三七根粉 (60 目) 进行提取。
结果提取率依次为硼砂缓冲液> 水> 015% 氨水>
50% 乙醇> 甲醇, 因此选用硼砂缓冲液 (pH 9118)
作为提取溶剂。以硼砂缓冲液为溶剂, 超声提取、冷
浸提取和回流提取 3 种提取方式下, 回流提取的效
率最高。回流提取时间的考察结果表明提取 115 h 的
提取率最高, 继续延长回流时间, 三七素降低。可能是
加热时间过长, 三七素发生脱羧反应而减少。实验中
对样品分 2 次回流提取, 第 1 次提取 1 h, 第 2 次提取
015 h 的方式来进行, 可获得较高的提取效率。
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