全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·1735·
A一融合子R
B一亲本菌株Zlo-2
C一亲本菌株Z10一3
A—fusantR
B—parentstrainZ10—2
C—parentstrainZ,o一3
图2隧酶同工酶酶谱
Fig．2Zymogramsofesteraseisozymes
菌株的遗传背景及双亲株的关系。从酶谱中发现，融合
株的同工酶谱中存在双亲株的特征性酶带并有新的酶
带产生，说明融合菌株同时具有来自双亲株的基因组，
而且融合过程中双亲株的基因发生重组，引起同工酶
基因间的抑制表达发生变化或有新酶基因的产生。
2．3 融合重组子分析：茯苓菌种采用灭活原生质体
融合技术可以获得理想的杂交新菌株。双亲灭活原
生质体融合的特点是可以省去遗传标记菌株的筛
选，还有利于排除双方亲本类型的再生菌株，便于选
择融合重组子[7]。原生质体灭活主要包括3种不同
的方式：热灭活、紫外线灭活以及化学灭活。热灭活
是目前采用最广泛的手段。但热灭活必须配合其他
灭活方式，温度对双亲菌株原生质体作用位点在不
同细胞中差异很小，灭活后致死损伤部位基本相同，
不能做到互补融合，而得不到融合子再生菌株。双亲
原生质体均用紫外线灭活处理。大剂量的UV处理
在不同位点上损伤DNA，因而有可能使融合子的某
些代谢途径受到干扰，最终影响生产中产量，但紫外
线灭活法的优点是可以刺激双亲菌株基因组间的交
换。因此，在试验过程中，Z。。一。选用原生质体热灭活，
z，∽选用原生质体紫外线灭活，融合后双亲原生质
体损伤部位得到互补，就很容易从再生平板上挑选
出融合子再生菌株。
利用该方法笔者已选出融合子再生菌株，并通
过形态学、亲和性、酯酶同工酶分析，确定该再生菌
株为双亲融合子；该菌株是否为优质高产菌株，还有
待于进一步生产中试验结果来证明。
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不同部位、不同产地南五味子中木脂素类成分的比较
徐丽华1‘2，梁春霞3，孙萌2，李桂凤3，余伯阳H
(1．中国药科大学中药学院，江苏南京210009；2．苏州大学药学院，江苏215007；
3。苏州市恩源医药科技有限公司，江苏苏州 215011)
南五味子为木兰科植物华中五味子Schisandra
sphenantheraRehd。etWils。的干燥成熟果实。性
味酸、甘、温，归肺、心、肾经，具有收敛固涩、益气生
津、补肾宁心的功效。用于久嗽虚喘、津伤口渴、短气
脉虚、心悸失眠等症[1]。南五味子主要分布于华中、
西南等地，其化学成分主要有挥发油、木脂素、三萜、
多糖、有机酸等[2“]。木脂素类成分是南五味子的主
要活性部位[6’7]，其中五味子甲素、乙素、酯甲、醇甲
具有降酶保肝活性，五味子乙素、醇甲具有安神作
用，本实验采用HPLC法检测了南五味子果肉、种
皮、种仁中五味子甲素、乙素、酯甲及醇甲的量，并用
紫外一可见分光光度法检测了总木脂素的量，同时检
测了5个不同产地南五味子中五味子甲素、乙素、酯
甲、醇甲及总木脂素的量。检测结果显示，检测部位
收稿日期：2006—01—13
作者简介：徐丽华(1968一)，中国药科大学博士研究生，苏州大学药学院讲师，主要从事中药和天然药物研究。
*通讯作者余伯阳 E—mail：boyangyu@yahoo．corn．an
万方数据
·1736· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
不同，所含成分的量不同。利用多项指标检测，可反
映不同产地南五味子内在质量。
1仪器与试药
日本岛津Lc～10ATvp高效液相色谱仪，
SPD～10Avp紫外可见检测器；N2000色谱工作站；
岛津UV～1240紫外可见分光光度计；Mettler
Toledo十万分之一电子天平。
五味子甲素、乙素、酯甲及醇甲对照品均购于中
国药品生物制品检定所，甲醇为色谱纯，水为超纯
水，南五味子药材购于安徽毫州药材市场。经南京中
医药大学吴启南教授鉴定为南五味子。’
2方法与结果
2．1南五味子中五味子甲素、乙素、酯甲及醇甲的
HPLC测定
2．1．1色谱条件及系统适用性：色谱柱：Nucleosil
C18(250mmx4．6mm，5弘m)；流动相：甲醇一水
(90：10)；体积流量：1．0mI。／min；柱温：25C；检
测波长：254nm。色谱图见图1。
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1一五味子醇甲 2一五味子酯甲 3-五昧子甲素
4一南五味子素5一五味子乙素
1一schizandrolA 2-wuweizisterA 3-schiandrinA
4-kadsurin5-schizandrin，B
图1对照品混合溶液(A)和药材样品(B)HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfreferencemixture(A)
andcruddrugsample(B)
2．1．2对照品溶液制备：分别精密称取五味子甲
素、乙素、酯甲、醇甲对照品各5．0mg，置25mL量
瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成0．20mg／mL
对照品混合溶液。
2．1．3供试品溶液制备：精密称取南五味子药材粉
末(过60目筛)2．0g，置250mL烧瓶中，精密加入
100mL甲醇，称定质量，回流提取1h，放冷，再称定
质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液
为供试品溶液。
2．1．4线性关系考察：精密吸取五味子甲素、乙素、
酯甲及醇甲对照品混合溶液0．2mg／mL1．0、2．0、
4．0、8．0、16．0、20．0肛L，分别进样测定，记录色谱
图，测定峰面积；以进样量为横坐标，峰面积为纵坐
标，进行线性回归，五味子甲素、乙素、酯甲和醇甲的
回归方程分别为：Y一1435931X一134521，r一
0．999；Y一552352X+23887，r=0．9993；Y一
702875X～21825。r一0．9999：Y一1 49773X～
21802，r一0．9998。结果表明，五味子甲素、乙素、
酯甲、醇甲在0．2～4．0btg呈良好线性关系。
2．1．5精密度试验：精密吸取五味子甲素、乙素、酯
甲及醇甲对照品混合溶液5弘L，按2．1．1项色谱条
件进行分析，连续进样5次，计算各成分峰面积的
RSD分别为0．72％、1．12％、0．55％、1．05％。结果
表明精密度良好。
2．1．6重现性试验：取同一批样品5份按2．1．3项
方法制备供试品溶液，按2．1．1项色谱条件，分别精
密吸取5弘L进样，外标法计算出5份供试品中五味
子甲素、乙素、酯甲、醇甲的量，算出各成分RSD分
别为1．36％、1．73％、0．97％、1-28％。结果表明该
方法重现性良好。
2．1．7稳定性试验：取同一供试品溶液分别于0、
1、2、4、8h依上述色谱条件进样5弘L，测得峰面积，
计算各成分的RSD分别为1．63％、1．24％、
1．38％、1．55％。结果表明样品溶液在8h内稳定。
2．1．8回收率试验：取上述已测定量的同一批样品
6份，每份精密称定1，0g，分别依次加入五味子甲
素对照品4．0、4．0、4。8、4．8、5．6、5．6mg，五味子乙
素对照品1．0、1．0、1．5、1．5、2．0、2．0mg，五味子酯
甲对照品11．0、11．0、13．0、13．0、14．0、14．0mg，五
味子醇甲对照品0．5、0．5、1．0、1．0、1．5、1．5mg，制
备加样回收供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算
回收率，结果五味子甲素、乙素、酯甲、醇甲的平均回
收率分别为98。79％、97．65％、100．31％、98．52％；
RSD为1．73％、1．98％，1．16％、1．57％。
2．2 紫外可见分光光度法测定南五味子中总木脂素
2．2．1对照品溶液制备：精密称取五味子甲素4．0
mg，至100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，
制成含五味子甲素0．04mg／mL的对照品溶液。
2．2．2供试品溶液制备：精密称取南五味子药材粉
末(过60目筛)2．0g，置250mI。烧瓶中，精密加入
100mL甲醇，称定质量，回流提取1h，放冷，再称定
质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液
；3i％
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·1737·
0．5mL至10mI。量瓶中，加甲醇稀释至刻度即为
供试品溶液。
2．2．3线性关系考察：精密称取五味子甲素10
mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，
配制成含五味子甲素0．1mg／mL的对照品溶液，取
该液分别以甲醇稀释至0．04、0．03、0．02、0．01、
0．004mg／mL溶液，在280nm下测吸光度值，以对
照品质量浓度为横坐标、吸光度值为纵坐标，标准曲
线为：y=41．21932X一0．04652，，．一0．9992。结
果表明，五味子甲素对照品溶液在0．04～0．004
mg／mI。呈良好线性关系。
2．2．4精密度试验：按2．2．2项制备供试品溶液，
取供试品溶液在280nm下连续测定5次，以吸光度
值计算RSD为1．04％。结果表明精密度良好。
2．2．5重现性试验：取同一批样品5份，按2．2．2
项制备供试品溶液，在280nm下测定吸光值，以吸
光度值计算RSD为1．74％。结果表明重现性良好。
2．2．6稳定性试验：取同一供试品溶液分别于0、
mL五味子甲素对照品混合溶液为对照，计算木脂
素的量，并计算RSD为1．45％。结果表明供试品溶
液在8h内稳定。
2．2．7回收率试验：取已测定量的同一批样品1．0g
各6份，精密称定，分别依次加入五味子甲素对照品
4．0 4．0、4．8、5．6、5．6mg，按2．2．2项制备加样回
收供试品溶液，在280am处测定吸光度值，计算回收
率。结果平均回收率为97．79％，RSD为1．78％。
2．3样品测定
2．3．1南五味子不同部位五味子甲素、乙素、酯甲、醇
甲及总木脂素的测定：精密称取南五味子果肉、种皮、
种仁粉末(过60目筛)各2．0g，分别依供试品溶液的
制备处理，照上述条件测定南五味子不同部位五味子
甲素、乙素、酯甲、醇甲及总木脂素的量，结果见表1。
2．3．2不同产地南五味子中五味子甲素、乙素、酯
甲、醇甲及总木脂素的测定：分别精密称取5个产地
的南五味子及吉林产北五味子粉末(过60目筛)2．0
g，制备供试品溶液，分别依上述条件测定五味子甲
1、2、4、8h在280am处测定吸光度值，以0．04rag／ 素、乙素、酯甲、醇甲及总木脂素的量，结果见表2。
表1南五味子不同部位中五昧子甲素、乙素、酯甲、醇甲及总木脂素测定结果(疗=3)
Table1 DeterminationofschiandrinA，schiandrinB，WuweiziesterA，schizandrolA，andtotallignans
indifferentpar sofFructusSchisandraeSphenantherae(n一3)
表2不同产地南五味子中五昧子甲素、乙素、酯甲、醇甲及总木脂素的测定结果(一一3)
Table1 DeteminationofschiandrinA，schiandrinB，WuweiziesterA，schizandrolA，andtotallignans
inFructusSchisandrae印henantheraefromdifferenthabitats(n一3)
品种 产地 北纬度 五味酯喇 五味子甲素／％五味予乙素／％五味子醇甲／％ 成篮％ ㈣蝴
3讨论
由实验结果可看出，南五味子不同部位中五味子
甲素、乙素、酯甲、醇甲及总木脂素的量差异很大，种仁
中所测木脂素类成分及总木脂素的量都远高于果肉和
种皮中的量，特别是五味子醇甲在果肉中未检测到，说
明南五味子中木脂素类活性成分主要集中于种仁中。
传统五味子入药均捣碎入煎，除有利于有效成分煎出
外，可能五味子的果肉、种皮、种仁中木脂素成分的量
也不尽相同。本实验验证了五味子传统用法的科学性，
为五味子捣碎人煎提供了合理依据。
由5个产地南五味子和北五味子样品的测定结
果可看出，5个产地的南五味子中总木脂素的量相
近，但5个产地的南五味子中木脂素类成分组成有
差异，其中河南、陕西产南五味子中五味子甲素、酯
甲的量稍高，而五味子乙素、醇甲的量却稍低，这个
差异也正是南北五味子的差异；在地域上，安徽、河
检踮约他趵弘未豇豇豇豇乱
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3国州丘康阳安毫沈安信林北徽南西南吉河安河陕河
子子味味五五北南
万方数据
·1738· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
北两个产地纬度比陕西、河南两个产地高，由此推测
南北的气候差异可能与南五味子木脂素类成分的量
有关，关于这个差异形成的实际原因和5个产地的
南五味子其他成分差异还有待进一步研究。
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RP—HPLC法测定藏药龙胆花的两种原植物
白花龙胆和蓝玉簪龙胆中龙胆苦苷
刘 圆，孟庆艳，彭镰心，刘 超，尚远宏
(西南民族大学少数民族药物研究所，四川成都610041)
龙胆花为藏医常用品种，分为白花龙胆和杂花龙
胆，在临床上为多品种入药，具有清湿热、泻肝胆实
火、镇咳、利喉、健胃功能，主治感冒发烧、目赤咽痛、
肺热咳嗽、胃热、脑痧、尿道热、阴痒及阴部湿疹、天花
等。白花龙胆为龙胆科植物高山龙胆Gentiana
purdomiiMarq．的花，收载于《四部医典》。《蓝琉璃》
云：“邦见按花色不同可分为白色、蓝色和杂色三类，
白色为上品。”西藏稀有上品白花龙胆，主要以杂花龙
胆入药，就其品种而言为蓝玉簪龙胆或云雾龙胆[1]。
杂花龙胆为龙胆科植物蓝玉簪龙胆G．
veitchiorumHemsl．和云雾龙胆G．nubigena
Edgew．的花。龙胆科植物主要含有的裂环烯醚萜苷
类化学成分龙胆苦苷(gentiopicroside)、当药苷
(sweroside)、当药苦苷(swertiamarin)，是龙胆科的
苦味成分和活性成分乜]。藏医认为白花龙胆为上品，
本实验拟对藏药龙胆花的两种原植物白花龙胆和蓝
玉簪龙胆中龙胆苦苷的量进行比较，为龙胆花多品种
人药提供更科学的依据。
1仪器与材料
Waters2695／2690分离系统，2996(2487)检测
器，Empower色谱管理系统。甲醇为色谱纯，水为重
蒸馏水，其他试剂为分析纯。龙胆苦苷对照品由中国
药品生物制品检定所提供(110770—200308，定量测
定用)。白花龙胆和蓝玉簪龙胆均购于西藏拉萨市药
材市场，现二者分别作为三味龙胆胶囊和十味龙胆
花胶囊的原料药之一使用，经笔者鉴定白花龙胆为
龙胆科植物高山龙胆G．purdomiiMarq．的花，蓝
玉簪龙胆为龙胆科植物蓝玉簪龙胆G．veitchiorurn
Hemsl．的花。
2方法与结果
2．1色谱条件：用KromasilC18色谱柱(250mm×
4．6mm，5牲m)；甲醇一3oA磷酸(30：70)为流动相；
检测波长为274nm；柱温：30℃，体积流量：1mL／
min。在此色谱条件下，龙胆苦苷与样品中的其他组
分峰达到基线分离，峰形较好。按龙胆苦苷峰计算，色
谱柱的理论塔板数不低于3000。其色谱图见图1。
2．2 对照品溶液的制备：精密称取龙胆苦苷对照品适
量，加甲醇溶解制成0．1020mg／mL的溶液，即得。
2．3供试品溶液的制备：精密量取白花龙胆和蓝玉
簪龙胆粉末(60目)各约0．3g，于25mL量瓶中，加
甲醇15mL，超声45min，放冷，定容至刻度，滤过，
取续滤液，用0．45,um的微孔滤膜滤过，即得。
2．4标准曲线的制备：分别按2．1项色谱条件，精
密进样龙胆苦苷对照品溶液1、2、3、4、5弘L，测定峰
面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行线
性回归，得回归方程为y一219597X一91280，，J一
0．999。龙胆苦苷在0．102o～0．5100btg进样量
与峰面积线性关系良好。
收稿日期：2006—03—21
基金项目：四川省科技厅应用基础项目(2006)；四川省教育厅项目(2005)；四川省青年基金项目(2007)
作者简介：刘圆(1968～)，女，重庆忠县人，西南民族大学教务处副教授，博士学位，主要从事少数民族药物的研究和教学工作，现在四
川大学华西药学院药学博士后流动站工作。Tel：(028)8552226313808091609E—mail：yuanliu321@126．eom
万方数据
不同部位、不同产地南五味子中木脂素类成分的比较
作者： 徐丽华， 梁春霞， 孙萌， 李桂凤， 余伯阳
作者单位： 徐丽华(中国药科大学中药学院,江苏,南京,210009;苏州大学药学院,江苏,215007)， 梁春
霞,李桂凤(苏州市思源医药科技有限公司,江苏,苏州,215011)， 孙萌(苏州大学药学院,江
苏,215007)， 余伯阳(中国药科大学中药学院,江苏,南京,210009)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 3次

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6. 谢碧霞.王森.邓白罗.钟秋平.孙昌波.XIE Bi-xia.WANG Sen.DENG Bai-luo.ZHONG Qiu-ping.SUN Chang-bo 华
中五味子果实性状的个体变异规律[期刊论文]-中南林学院学报2006,26(6)
7. 陈业高.秦国伟.谢毓元.CHEN Ye-gao.QIN Guo-Wei.XIE Yu-Yuan 五味子科植物中联苯环辛二烯木脂素的碳谱特
征[期刊论文]-化学研究2001,12(1)
8. 陈业高.秦国伟.谢毓元 五味子科植物木脂素成分的化学[期刊论文]-化学世界2001,42(7)
9. 陈业高.张燕 五味子科植物木脂素成分的波谱特征[期刊论文]-云南师范大学学报(自然科学版)2000,20(5)
10. 蒋司嘉 五味子和华中五味子的木脂素类化学成分研究[学位论文]2003

引证文献(3条)
1.梁文丽.可成友.边蔷.于亮.吴晓芳 影响五味子品质的因素研究概述[期刊论文]-辽宁农业科学 2009(6)
2.何颖.邹爱英 影响南五味子质量的主要因素探讨[期刊论文]-天津药学 2013(3)
3.李林燕.柳燕.李伟 HPLC法测定南五味子软胶囊中五味子酯甲和五味子甲素的含量[期刊论文]-安徽医药 2011(2)


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