全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·921·
时施N处理的还有部分植株正开花，认为可能是在
试验地块条件下，单施N导致了植株的贪青晚熟，
延长了营养生长期，从而生物产量增加。除施P外，
其余施肥处理可能加重了根腐病的发生，从而存苗
率下降。
另外，如果紫锥菊的栽培以培养园艺花卉或切
花为目的，建议合理施用P肥，以促进花芽分化及
花期提前。
综上所述，在紫锥菊的栽培过程中，合理配施肥
对紫锥菊主要有效成分菊苣酸的量影响不大，而能
显著提高其生物产量，从而增加单位亩产药材的菊
苣酸总量。因此，在生产上应结合地块条件及生产目
的，施以一定量的N、N+P或N+K以利于产量的
提高。另外，施用氯化钾较为经济，但在施用时要适
当降低用量，同时配施一定量的尿素。由于施肥后存
苗率降低，在选地时最好选用透气性较好的地块，施
肥后应加强管理，减少根腐病的发生。
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不同产地大青叶质量的化学模式识别研究
王文清，彭 静，万进，方建国+，汤 杰，刘云海
(华中科技大学同济医学院附属同济医院，湖北武汉430030)
摘要：目的建立大青叶药材质量评价的化学模式识别方法。方法采用RP—HPLC法定量分析国内10个不同
产地的大青叶样品中邻氨基苯甲酸、丁香酸、腺苷、靛玉红4种指标成分的量，用雷达图评价指标成分的平衡分布，
结合系统聚类分析法对其进行化学模式识别研究。结果根据雷达图显示结果通过系统聚类分析法将10个样品
按其质量等级划分为5类。结论该方法可用于大青叶药材的质量评价。 t
关键词：大青叶；HPLC；化学模式识别；雷达图；聚类分析
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)05—0921—05
ChemicalpatternrecognitionofqualityassessmentofFoliumIsatidisfromvarioushabitats
WANGWen—qing，PENGJing，WANJin，FANGJian—guo，TANGJie，LIUYun—hai
(TongjiHospitalAffiliatedtoTongjiMedicalCo lege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，
Wuhan430030，China)
收稿日期：2006—08—22
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39800193)
作者简介：方建国(1965一)，男，河南信阳人，副主任药师，博士，主要从事中药药理活性及其物质基础研究。
Tel：(027)83649095E—mail：fi93560@sina．cornFax：(027)83624090
万方数据
·922· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
Abstract：ObjectiveToestablishamethodofchemicalpatternrecognitiononthequalityassessment
ofFoliumIsatidis．MethodsThec ntentsofanthranilicacid，syringicacid，adenosine，andindirubini
FoliumIZatidis．SamplesfromtendiferentareasinChinaweredeterminatedbyRP—HPLCmethod．Based
ontheRP—HPLCmethod，thechemicaldatawereobtained．Usingtheradar—gramstoevaluatethebalance
distributionof hei dexconstituents．HierarchicalclusteringanalysiswaappliedtOthechemicalpattern
recognition．ResultsThetensamplesfromdifferenthabitatswereclassifiedintofivegradesaccordingto
theresultdisplayedfromtheradar—grambyhierarchicalclusteringanalyses．ConclusionThismethodis
feasibletOevaluatethequalityofFoliumIsatidis．
Keywords：FoliumIsatidis；HPLC；chemicalpatt rnrecognition；radar—gram；clusteranalysis
大青叶FoliurnIsatidis系十字花科植物菘蓝
IsatisindigoticaFort．的干燥叶，具有清热解毒、凉
血消斑之功效。《中国药典))2005年版一部收载了其
定量测定[1]。据文献报道[2]，大青叶中含有吲哚类生
物碱：靛蓝(indigotin)、靛玉红(indirubin)；喹唑酮
类生物碱：4(3H)喹唑酮[4(3H)-quina—
zolinedione]、色胺酮(tryptanthrin)；有机酸类：水杨
酸(salicylicac d)、邻氨基苯甲酸(anthranilicacid)、
丁香酸(syringicac d)、苯甲酸(benzoicacid)、棕榈
酸(palmiticac d)；苷类：靛红烷B(菘蓝苷)等多种
成分。由于我国大青叶资源分布广泛，产地的自然环
境差异大，为考察不同产地大青叶的质量情况，本实
验采用RP—HPLC法对来自于国内10个产地的大
青叶样品进行了质量分析，以邻氨基苯甲酸(an—
thranilicacid)、丁香酸(syringicacid)、靛玉红(in—
dirubin)和腺苷(adenosine)为指标成分获得了相关
数据，并根据雷达图分析结果以系统聚类分析对其
进行了化学模式识别研究，建立了大青叶质量的化
学模式识别方法。该方法的判定结果令人满意，可用
于大青叶的质量评价。
1仪器与材料
LC一20AD型高效液相色谱仪(日本岛津)，包
括LC--20AD泵，7725i定量阀，SPD--M20A型二
极管阵列检测器(190～800nm)；SCQ一250型超声
波提取仪(上海申波超声公司)；AUW220D型双量
程分析天平(日本岛津，感量：0．1mg／0．01mg)。
腺苷对照品(批号879—200001，供定量测定用，
购自中国药品生物制品检定所)；邻氨基苯甲酸对照
品(批号20020510，经面积归一化法测定其质量分
数为99．3％，购自湘中地质实验研究所)；丁香酸对
照品(批号$6881—5G，供定量测定用，购自德国Sig—
ma公司)；靛玉红对照品(批号110717—200204，供
定量测定用，购自中国药品生物制品检定所)。甲醇
为色谱纯，其余试剂均为分析纯。大青叶药材购自不
同产地，由华中科技大学同济医学院附属同济医院
方建国副教授鉴定其均为十字花科植物菘蓝，．锄一
digoticaFort．的干燥叶。
2方法与结果
2．1 大青叶中邻氨基苯甲醇和丁香酸的测定
2．1．1 色谱条件[3|：色谱柱为HypersilODS柱
(150mm×4．6mm，5弘m)；流动相：乙腈一水一磷酸
(18：82：0．3)；体积流量：0．8mL／min；检测波长：
272nm；柱温：30℃。
2．1．2线性关系考察：精密称取邻氨基苯甲酸对照
品和丁香酸对照品适量，分别加甲醇制成0．228和
0．0996mg／mL的对照品贮备溶液。精密量取上述
溶液0．5、1、1．5、2、2．5、3mL，分别置10mL量瓶
中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，注入液相色谱仪，测
定。以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标
准曲线，计算得回归方程为邻氨基苯甲酸：Y=
7515．1X一718．53，厂一0．9998；丁香酸：Y=
12742x一500．02，r一0．9997。结果表明邻氨基苯
甲酸在11．4～68．4Fg／mL，丁香酸在4．98～29．88
ttg／mL与峰面积线性关系良好。
2．1．3精密度试验：分别精密吸取45．6肛g／mL邻
氨基苯甲酸和19．92p．g／mL丁香酸对照品溶液10
肛L，连续重复进样5次，测得邻氨基苯甲酸和丁香
酸峰面积的RSD值分别为0．7％和0．5％。
2．1．4稳定性试验：取同一供试品溶液，精密吸取
10肛L，每隔2h按上述色谱条件进行测定，共5次，
结果邻氨基苯甲酸和丁香酸峰面积的RSD分别为
2．0％和1．9％，表明供试品溶液在8h内稳定。
2．1．5 重现性试验：取安徽阜阳样品粉末，按
“2．1．7”项下平行制备6份供试品溶液，结果邻氨基
苯甲酸和丁香酸峰量的RSD分别为2．1％和1．8％。
2．1．6回收率试验：精密称取安徽阜阳样品约1．3
g，分别按低、中、高3个水平精密加入邻氨基苯甲酸
0．1843mg／mL和丁香酸11．46p．g／mL的混合对
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·923·
照品贮备溶液8、10、12mL，按“2．1．7”项下方法操
作。测得邻氨基苯甲酸的平均回收率为100％，RSD
为2．3％(，z一9)；丁香酸的平均回收率为93．3％，
RSD为1．8％(咒一9)。
2．1．7样品测定[4]：精密称取不同产地的大青叶粗
粉2．5g，加10％氢氧化钠乙醇液50mL，浸泡过
夜；回流2h，滤过，残渣用上述溶剂洗涤2～3次，滤
过，合并滤液；置水浴上挥至无醇味，以石油醚提取
两次，每次20mL，弃去醚液，水液加稀盐酸调节pH
值至1～2，再用乙醚振摇提取两次，每次20mL，合
并乙醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，移至100mL量
瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，测定
并计算。结果见表1、图1。
^————————．．，．，、．。．——儿
10．o12．515．o17．5 10．o12．5l5．o 17．5 lO．o12．515．o17．5
t／rain
a一邻氨基苯甲酸b一丁香酸
a—anthranilicacidb-syringicacid
图1 邻氨基苯甲酸对照品(A)、丁香酸对照品(B)
和大青叶样品(c)的HPLC色谱图
Fig．1HPLCChromatogramsfanthranilicacid(A)，
syringicacid(B)，andFoliumIsatidis(C)
2．2大青叶中腺苷的测定
2．2．1 色谱条件口]：色谱柱为HypersilODS柱
(150mmx4．6mm，5um)；流动相：甲醇一水一冰醋
酸(O．5：96：3．5)；体积流量：0．8mL／min；检测波
长：257nm；柱温：40℃。
2．2．2线性关系考察：精密称取腺苷对照品适量，
加甲醇配制成0．03568mg／mL的对照品贮备溶
液，分别精密量取上述溶液0．5、1、1．5、2、2．5、3
mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，注
入液相色谱仪测定。以峰面积为纵坐标，质量浓度为
横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程为Y一
81939X一266．81，r一0．9997。结果表明腺苷在
8．92～53．52ug／mL与峰面积线性关系良好。
2．2．3精密度试验：分别精密吸取35．68ug／mL
的腺苷对照品溶液10弘L，连续重复进样5次，测得
腺苷峰面积的RSD为1．0％。
2．2．4稳定性试验：取同一供试品溶液，精密吸取
10弘L，每隔2h按上述色谱条件进行测定，共5次，
结果腺苷峰面积的RSD为1．4％，表明供试品溶液
在8h内稳定。
2．2．5 重现性试验：取安徽阜阳样品粉末，按
“2．2．7”项下平行制备6份供试品溶液，结果腺苷量
的RSD为1．0％。
2．2．6 回收率试验：精密称取安徽阜阳样品粉末约
lg，分别按低、中、高3个水平精密加入腺苷的量为
0．1826mg／mL的对照品贮备溶液8、10、12mL，按
照“2．2．7”项下方法操作。测得腺苷的平均回收率为
100．7％，RSD为1．2％(咒一9)。
2．2．7样品测定：精密称取不同产地的大青叶粉末
2．0g，精密称定，置锥形瓶中，精密加纯化水40
mL，密塞，称定质量，超声处理30min，放冷，再称
定质量，用纯化水补足减失的质量，摇匀，即得供试
品溶液，测定并计算。结果见表1、图2。
A
， ，．， 10 ， ，．， lU
t／min
a一腺苷
a—adenosine
图2对照品(A)和大青叶样品(B)的HPLC色谱图
Fig．2HPLCChromatogramsfreferencesubstance
(A)andFoliumIsatidis(B)
2．3大青叶中靛玉红的测定
2．3．1 色谱条件口]：色谱柱为HypersilODS柱
(150mm×4．6mm，5um)；流动相：甲醇一水(75：
25)；体积流量：0．8mL／min；检测波长：289nlTl；
室温。
2．3．2线性关系考察：精密称取靛玉红对照品适
量，加甲醇制成0．00984mg／mL对照品贮备溶液。
分别准确量取上述溶液0．5、1、1．5、2、2．5、3mL，置
lomL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，注入液相
色谱仪。以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标绘制
标准曲线，计算得回归方程为Y一12．593X一
1．4667，r一0．9996。结果表明，靛玉红在0．492～
2．952／,g／mL与峰面积线性关系良好。
2．3．3 精密度试验：分别精密吸取1．968ug／mL
的靛玉红对照品溶液10弘L，连续重复进样5次，测
得靛玉红峰面积的RSD为0．7％。
2．3．4稳定性试验：取同一供试品溶液，精密吸取
10弘L，每隔2h按上述色谱条件进行测定，共5次，
结果靛玉红峰面积的RSD为1．1％，表明供试品溶
液在8h内稳定。
万方数据
·924· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
2．3．5 重现性试验：取安徽阜阳样品粉末，按
“2．3．7”项下平行制备6份供试品溶液，结果靛玉红
量的RSD为1．3％。
2．3．6 回收率试验：精密称取安徽阜阳样品约
0．13g，分别按低、中、高3个水平精密加入靛玉红
量为4．85btg／mL的对照品贮备溶液8、10、12mL，
按照“2．3．7”项下方法操作。测得靛玉红的平均回收
率为101．3％；RSD为1．4％(规一9)。
2．3．7样品测定：精密称取不同产地的大青叶细粉
0．25g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷浸
泡5h，加热回流提取至提取液无色。回收溶剂至
干，残渣加甲醇使溶解，并转移至100mL量瓶中，
加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液，测定并
计算。结果见表1、图3。
2．4大青叶药材质量评价的综合考察
么么
10．0 12．5 15．0 17．510．0 125 15．0 175
t／min
a一靛玉红
a—indirubin
图3对照品(A)和大青叶样品(B)的HPLC色谱圈
Fig．3HPLCChromatogramsfreferenceubstance
(A)andFoliumlsatidis(B)
表1不同产地大青叶中4种指标性成分的测定强一3)
Table1 Determinationoffouri dexconstituentsinFoliumIsatidisfromvarioushabitats(捍一3)
序号 产 地 邻氨基苯甲酸／％ 丁香酸／％ 腺苷／％ 靛玉红／％ 质量等级 各指标累加之和／％
2．4．1中药材作为中药提取物和复方制剂的原料，
其质量稳定性十分重要，单纯以某一有效成分或指
标成分的量为质量评价的依据是不全面的，本研究
采用雷达图直观地体现多种内在质量指标的平衡分
布，通过坐标点反映量的差异，通过图形形状反映各
指标成分的均衡度，从而反映各产地药材的综合质
量[6]。以10个主产地大青叶药材的邻氨基苯甲酸、
丁香酸、腺苷和靛玉红的量做雷达图，结果见图4。
2．4．2聚类分析结果[7]：在进行系统聚类分析之
前，为消除由于数据变换的幅度和范围以及数据分
布的非正态性对聚类结果的影响，本实验对所得分
析数据采用极差法进行标准化处理。原始数据经标
准化变换后，采用欧氏距离平方法(squaredEu—
clideandistance)计算样品间相似性程度，选用中间
距离法(Medianclustering)进行聚类，系统聚类分
析结果见图5及表2。
2．4．3各种分析结果比较：根据各指标累加之和评
价各产地大青叶质量的优劣，结果见表1，从大到小
排序为5、4、9、7、6、10、1、3、8、2。可见各指标累加的
结果与聚类分析有一定的相似性，但是在评价良和
中两个等级时有差异，表明各指标之间的均衡度对
药材质量也有一定影响。
3讨论
3．1 由10个产地的大青叶药材样品中邻氨基苯甲
酸、丁香酸、腺苷和靛玉红等4种指标成分的量分析
表明：HPLC法定量分析结果快速、准确、可靠。
3．2《中国药典>>2005年版中只规定了大青叶药材
中靛玉红量的测定，若设定大青叶各指标成分质量
分数合格范围为平均质量分数的±50％，利用雷达
图分析，坐标中单位1为指标成分量的平均质量分
数，可以清楚看到各产地药材指标性成分的量合格
情况。靛玉红的平均质量分数为0．0234oA，《中国药
典))2005年版规定的0．020％恰好处于平均质量分
数的±50％，说明该分析方法可行。大青叶药材中各
指标成分的量分布具有一致性，对今后大青叶药材
的GAP研究提供了一定的指导意义。
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0．134％
3
1一邻氨基苯甲酸2一丁香酸3一腺苷 4一靛玉红
1-anthranilicc d2-syringicacid3-indirubin4-adenosine
图4不同产地大青叶的雷达图
Fig．4Radar—gramsofFoliumIsatidisfromvarioushabitats
图5不同产地大青叶的聚类分析树状图
Fig．5DendrogramofFoliumIsatidis
fromvarioushabitats
表2聚类分析结果
Table2 Resultofhierarchicalclusteranalyses
聚类 样品序号 质量等级 聚类 样品序号 质量等级
1 5 优 4 1、6、8 中
2 4、7、9 优良 5 2 差
3 3、10 良
3．3近年来，在有关中药有效物质基础明确的前提
下，模式识别技术业已成为评价中药材品质的一种
卓有成效的方法。中药质量的模式识别，既体现了中
药成分复杂，多成分、多靶点综和作用的机制，又具
有较强的科学性和实践性，被广泛用于区分中药材
的质量等级[8]。本实验采用雷达图结合系统聚类分
析法，以大青叶药材样品中邻氨基苯甲酸、丁香酸、
腺苷和靛玉红4种有效成分为指标，对10个产地的
大青叶药材进行了化学模式识别研究，将大青叶药
：’安徽阜辟
j／沁．140
59
‘j弋j
j、‘．．j，’
371弋，／0-0083，o．176％
4
0．
3
：
．甘肃陇摩
j／
k
0．11329
。＼j
毯。汰知盎，：
0．109％
3
材按质量级划分为优、优良、良、中、差5类，结果显
示大多数产地的大青叶质量尚可。可见综合各项指
标成分对药材质量的影响比传统的各指标累加法更
加全面。本研究以大青叶药材中主要有效成分的量
为评价依据较单纯以靛玉红的量评价更为科学，若
今后能够结合其主要药理活性指标综合分析，则其
质量的模式识别研究将更加系统、可靠，值得进一步
推广。
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万方数据
不同产地大青叶质量的化学模式识别研究
作者： 王文清， 彭静， 万进， 方建国， 汤杰， 刘云海， WANG Wen-qing， PENG Jing， WAN
Jin， FANG Jian-guo， TANG Jie， LIU Yun-hai
作者单位： 华中科技大学同济医学院附属同济医院,湖北,武汉,430030
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
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被引用次数： 9次

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