全 文 ：·1026· 中草蔼ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月
黄芩苷
绿原酸
l
8 鳋草苷
^ 肌 ^l一．。．^
0 25 5 75 10 125 15 175
，／min
图2黄金菊含片的HPLC图谱
Fig·2HPLCChromatogramofHuangjinju
BuccalTablets
References：
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大孔吸附树脂分离纯化侧柏叶中槲皮苷的研究
杨庆胜，张京健，张龙海，贾春华，樊小勇
(河南仲景保健药业有限公司，河南郑州450001)
侧柏叶是柏科植物侧柏Platycladusorientalis
(L．)Franco的干燥嫩枝及叶，具有凉血止血、生发
乌发之功效，用于吐血衄血、咯血、便血、崩漏下血、
血热脱发、须发早白等症[1]。所含主要成分为黄酮类
化合物、鞣质和挥发油类等，其中镇咳祛痰和止血主
要有效成分为黄酮类化合物中的槲皮苷类[2’3]。
大孑L吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，具有
吸附快、解附快、吸附容量大、易于再生等特点，已广
泛应用于天然产物的分离和富集。侧柏叶中黄酮类
成分结构比较复杂，一般方法较难将它们分开，目前
侧柏叶总黄酮提取物常用的分析方法多为以芦丁为
对照品采用紫外分光光度法测定总黄酮[43，因芸香
苷(芦丁)与侧柏叶中槲皮苷的结构上有所不同，在
吸收波长上也有所差异，不能正确地反映出侧柏叶
总黄酮提取物的内在质量。本实验选用高效液相色
谱法，以槲皮苷为指标，对用大孑L树脂分离纯化侧柏
叶总黄酮进行测定，以确定大孔树脂分离纯化的工
艺条件。实验表明，该法准确、灵敏、快速简便，所选
指标槲皮苷能够准确地反映侧柏叶总黄酮提取物的
内在质量，所优选的工艺条件具有实际意义。
1仪器与试剂
美国Agilent1100型高效液相色谱仪，
HPl050／3D化学工作站；玻璃色谱柱(280mm×2
mm)；吸附树脂均购自南开大学化工厂；槲皮苷对
照品(中国药品生物制品检定所提供，批号111538—
200301)；色谱分析用甲醇为色谱纯，其他试剂均为
分析纯，水为重蒸馏水(自制)，侧柏叶药材购自河南
省药材公司，经鉴定符合《中国药典92005年版一部
侧柏叶项下规定。
2方法与结果
2．1树脂的预处理：各吸附树脂经筛选后，用乙醇
浸泡12h，倾倒掉上层乙醇，然后加入吸附柱中，待
树脂装好后，用乙醇3BV／h通过树脂层，至流出液
加水不呈白色浑浊为止，并用水以同样速度洗涤乙
醇，然后用2BV2％HCI溶液以2．6mL／min通过
树脂层，并浸泡4h后用水以同样速度洗至流出液
pH值呈中性，最后用2BV2％NaOH溶液以2．6
mL／min通过树脂层，并浸泡4h后，用水以同样速
度洗至流出液pH值呈中性，滤取，室温晾干，即得。
以95％乙醇湿法装柱，继续用乙醇在柱上流动清洗
至流出液乙醇一水(1：5)不呈白色为止，然后用蒸馏
水洗至无醇味，备用。
2．2 上柱液的制备：取侧柏叶药材粗粉，用10倍
70％乙醇提取2次，每次2h，药液滤过，合并，减压
浓缩(每毫升药液相当于生药1g)。
2．3槲皮苷的HPLC法测定[1]
2．3．t 色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅
烷键合硅胶为填充剂，以甲醇一0．01mol／L磷酸二
收稿日期：2005—10-25
作者简介：杨摩胜(1969一)，男!郑州人，主管中药师，执业药师，1993年毕业于河南中医学院中药系，一直主要从事中药的新产品开发，
发表科研论文10余篇。
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月·1027·
氢钾溶液一冰醋酸(40：60：1．5)为流动相；体积流
量：1．0mL／min；检测波长：254nm；柱温：室温；进
样量10弘L；理论板数按槲皮苷峰计算应不低于
2000。
2．3．2标准曲线的绘制：精密称取槲皮苷对照品
15．5mg，置25mL量瓶中，加乙醇溶解，并稀释至
刻度，摇匀，得0．62mg／mL槲皮苷对照品储备液，
备用。分别精密量取储备液1．0、2．0、3．0、4．0、5．0
mL，置于25mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，作为
对照品溶液。分别精密量取对照品溶液10pL，按上
述HPLC条件，进样分析。以进样量(X)与峰面积积
分值(y)绘制标准曲线。回归方程Y一3．21×10_7
X+0．00616，r一0．9998，表明槲皮苷在0．248～
1．240pg时，进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2．3．3供试品溶液的制备及测定：先把液体样品定
容至适当体积，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液
1mL，置于50mL量瓶中，加95％乙醇至刻度，摇
匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液10弘L，
按上述HPLC条件，进样分析。色谱图见图1。
，／mln
*一槲皮苷
*一quercetin
图1 槲皮苷对照品(A)和洗脱样品(B)的HPLC圈
Fig．1HPLCChromatogramsfquercetinreferences
substance(A)anddesorptionsample(B)
2．4树脂型号的筛选：取50mL药液，加至已处理
好的4种型号的大孑L吸树脂上，药液反复吸附，水
洗，再用300mL70％乙醇洗脱。分别收集吸收后的
药液、水洗液、醇洗液，定容，得各样品。检测槲皮苷，
按下式计算各树脂的吸附量和洗脱率。结果见表1。
表1 4种树脂对槲皮苷的吸附和洗脱性能
Table1 Adsorptionandesorptionproperties
offouresinsonquercetin
。吸附量一(C--Ce)×VA／w
洗脱率一cD×VD／[(C--Ce)×VA]×100％
式中C为吸附液起始质量浓度，Ce为吸附平衡质量浓
度，‰为吸附液体积，Ⅳ为树脂质量，Co为洗脱液质量浓
度，yo为洗脱液体积
可以看出，以AB一8树脂的吸附量较大、洗脱率
较高，故选择AB一8树脂来分离和纯化侧柏叶中的
槲皮苷。
2．5洗脱剂及洗脱条件的条件
2．5．1洗脱体系的确定：最常用的洗脱剂是水、甲
醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯以及它们的混合液等。试验
结果(表2)显示，采用甲醇一水、乙醇一水、丙酮体系对
槲皮苷均有较好的洗脱效果。考虑到甲醇的毒性，丙
酮的易挥发性等因素，以及实际工作中的安全、成本
等问题，确定以乙醇一水体系作为洗脱剂。先以大量
水洗脱除去无机盐、蛋白质、多糖等杂质，再以不同
体积分数的乙醇一水进行洗脱。
表2洗脱剂体系对动态吸附性能的影响
Table2 Effectsofehentsystemondynamical
adsorptionproperty
洗脱体系 洗脱率／％ 洗脱体系 洗脱率／％
水 1．6 醋酸乙酯 61．8
甲醇42．1 70％甲醇 91．4
乙醇 63．8 70％乙醇 91．8
丙酮89．5
2．5．2洗脱剂体积分数对树脂动态洗脱性能的影
响：对已经吸附样品的树脂用一系列不同体积分数
的乙醇一水进行洗脱，测洗脱液浓度，计算洗脱率，结
果见表3。可见，10％、30％乙醇洗脱率较低，而且洗
脱剂用量较大；50％乙醇洗脱，洗脱率不高；60％～
90％乙醇的洗脱率较高，且洗脱剂用量少，起到了浓
缩的效果。考虑到随着洗脱剂体积分数的增加，洗脱
液洗下脂溶性杂质也会增多，故选择70％乙醇作为
洗脱剂。
表3洗脱剂浓度对动态吸附性能的影响
Table3 Effectsofeluentconcentrationon
dynamicaleIntionpeoperty
洗脱剂体 洗脱体 洗脱 洗脱剂体 洗脱体 洗脱
积分数／％ 积／BV 率／％ 积分数／％ 积／BV 率／％
10％乙醇 12 31．6 70％乙醇 6 91．8
30％乙醇 10 42．1 80％乙醇 5 92．4
50％乙醇 9 63．8 90％乙醇 5 93．1
60％乙醇8 81．5
2．6最佳脱附条件下的洗脱曲线：在常温下，用70％
乙醇做洗脱剂，以3---5mL／min的洗脱速率对已吸附
了样品的树脂进行洗脱，得到洗脱曲线，见图2。
2．7工艺验证及样品纯度的测定：取50mL药液，
加至已处理好的AB一8型号的大孔吸附树脂上，药
液反复吸附，水洗，再用330mL70％乙醇洗脱，收
集洗脱液，浓缩，除去溶剂，减压干燥，得槲皮苷初产
熹
万方数据
·1028· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月
，
一
矗
g
鼍
垃
划
毫
图2槲皮哥洗脱曲线
Fig．2Desorptioncurveofquercetin
品，经HPLC测定分析，考察AB一8型号树脂的吸附
量，洗脱率以及样品中槲皮苷的质量分数。结果AB一
8树脂的吸附量为26．8mg／g，洗脱率为91．6％，槲
皮苷的质量分数为321．8mg／g。对上柱液也进行浓
缩干燥处理，粗提物中槲皮苷的收率为1．82％。
3讨论
一般说来，树脂吸附性能的优劣是有其化学和
物理结构决定的，树脂的极性(功能基)和空间结构
(孔径、比表面积、及孑L容)是影响其吸附性能的重要
因素。研究结果显示：极性的HPD一600大孔吸附树
脂和弱极性的AB一8型大孔吸附树脂对侧柏叶提取
液中槲皮苷的吸附量均较大，可能与槲皮苷具有较
强的极性有关。另一方面，在某些情况下吸附作用力
强，解析起来也会困难一些，如HPD一600型大孑L吸
附树脂的吸附量大，但解析率较低。
实验表明，AB一8型大孑L吸附树脂对槲皮苷有较
大静态吸附量，也容易解吸附，表现出较好的综合分
离纯化能力；同时，其动态吸附、脱附性能也较好。吸
附量达26．8mg／g；6．5倍床体积的70％乙醇可将
吸附在树脂上的样品洗脱下来，解吸率达91．6％。
因此，本方法可以用来分离纯化侧柏叶中槲皮苷。
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RP—HPLC法测定金屏风胶囊中菊苣酸
邵国良，邵建峰
(正大青春宝药业有限公司，浙江杭州 310023)
紫锥菊EchinaceapurpureaL．为紫菀科的全
草，连续数年入选美国最畅销植物药行列[1]。近几年
我国已从北美和欧洲引进了该药材。我公司为了市
场需要已研制成含紫锥菊的制剂一金屏风胶囊。金屏
风胶囊系由紫锥菊、黄芪等药味组成的复方制剂，具
有提高机体免疫的功能，对病毒性感冒有很好的预
防作用，菊苣酸是主要生理活性成分，故选用菊苣酸
作为质量控制指标。菊苣酸的测定主要采用高效液
相色谱法[2~5]。本实验采用乙腈一0．1％磷酸溶液为
流动相与C。。反相柱，选择紫外检测器，准确、快速地
定量分析了金屏风胶囊中菊苣酸，结果可靠。
l仪器和试剂
Agilent1100型系列高效液相色谱仪，包括柱
温箱、自动进样系统、紫外检测器，岛津UV一
2401PC紫外可见分光光度计。乙腈为色谱纯，磷酸
收稿日期：2005—09—20
为分析纯，水为重蒸馏水。菊苣酸对照品(自制，经浙
江省药品检验所鉴定结构，质量分数≥96％)，金屏
风胶囊(本公司产品，规格为0．5g／粒)。
2方法与结果
2．1对照品溶液的制备：精密称取菊苣酸对照品，
加适量70％甲醇制成20．8弘g／mL的对照品溶液。
2．2供试品溶液的制备：取金屏风胶囊的内容物
0．4g，精密称定，置50mL棕色量瓶，加适量70％
甲醇超声溶解，流水冷却至室温后，70％甲醇定容至
刻度，摇匀，滤过，过0．45弘m滤膜，即得。
2．3测定波长的确定：取菊苣酸对照品溶液(20．8
弘g／mL)，在200～450nm波长扫描，结果在330nm
处有最大吸收，故选择330nm作为菊苣酸的检测
波长。
2．4流动相的选择：比较了甲醇一水体系和乙腈一水
万方数据
大孔吸附树脂分离纯化侧柏叶中槲皮苷的研究
作者： 杨庆胜， 张京健， 张龙海， 贾春华， 樊小勇
作者单位： 河南仲景保健药业有限公司,河南,郑州,450001
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(7)
被引用次数： 1次

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