全 文 ：中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月·857·
DNA。PVP可与多酚结合形成复合物，可以有效避
免多酚类化合物介导的DNA降解“”]。另一方面，
多糖的去除也是提取中药材DNA的关键。一般在
材料粉碎之前，先不加细胞膜裂解液，因而DNA尚
未溶出，用一些缓冲液清洗，可除去一些多糖““。
本研究结果显示，只有改良的CTAB法的处理
B可以达到AFLP分析的要求。笔者根据上述多酚
及多糖的物理、化学特性对CTAB法作了如下改
进：提高CTAB的浓度(4×CTAB缓冲液)以尽可
能破碎细胞壁、细胞膜，使核酸与蛋白质完全解离，
并有利于CTABDNA复合物形成；对于含多酚类
较多的植物，增加cTAB提取缓冲液中}
mercaptoethanol(提高到4％)，以固体形式加入
VC，防止多酚类物质氧化，同时以固体形式加入
PVP使其与多酚类物质结合形成复合物。
通过对普通CTAB法改进以后，笔者从保存一
个月的泰山白花丹参成熟干叶片中提取到高质量的
DNA，DNA的电泳结果表明，DNA的纯度和产率
都比较理想。由于本实验是为了给后续研究利用
AFLP法分析丹参道地性奠定基础，因此采用
AFLP分析对分离的DNA质量作了进一步的评
价，即使用EcoRl／MseI消化DNA和随后的限制
酶切片段经T。DNA连接酶与接头连接及PCR扩
增，结果扩增出可重复的PCR产物(实验重复3
次)。结果表明，该技术可有效地从富含多酚和多糖
的药用植物组织中分离出高质量DNA。
使用此方法时应该注意：PVP和VC都以固体
形式加入最好，不能事先配成储存液，否则会与空气
中的氧发生作用而失去效果，且VC和PVP配合使
用。PVP与样本共研后，要用预冷的清洗液，并在冰
上放置一段时间，也是防止氧化的手段。加VC后溶
液的pH值会下降到pH4～5，这样的条件下，
CTAB的提取效果不佳，必须将提取液的pH值调
到接近中性pH6～6．5。
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RP—HPLC法测定健儿糖浆中67一羟基一爵床定B
于肖辉1，杨美华”，金钺2，陈建民2
(1．江西天施康中药股份有限公司，江西鹰潭335000f2．中国医学科学院
中国协和医科大学药用植物研究所，北京 100094)
健儿糖浆由萝蘼和爵床两味药材组成，具有消
疳化积、行气活血、消肿解毒的功效，用=P／bJL疳积。
制剂原标准中只有爵床药材的薄层色谱鉴别，无定
量测定项。为了更好地控制本品的质量，笔者参考文
牦萼品羿：孥誓甚=：‘l矗5)，男，江西余江人．高级工程师．主要从事新药研发，科研管理工作。，rel：(07。1)6215。。5
*通讯作者杨美华Tel；(010)62899730E—mail：yangmeihual5@hotmailcorn
万方数据
·858· 中革蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
献报道o“】，对制剂以及方中爵床和萝蓐两味药材
的化学成分进行了较为系统的分析，结果从制剂原
料中分离得到了爵床药材中所含有的一个新的木脂
素化合物，即6-羟基一爵床定B(另文报道)。本实验
采用高效液相色谱方法测定了制剂中60羟基一爵床
定B，结果显示，该方法准确、操作简便，可用于该制
剂的质量控制。
1仪器与试药
Waters⋯600泵系统，waters⋯996二极管阵
列紫外检测器，Empower数据处理软件。实验用水
为重蒸水，乙腈为色谱纯试剂(FisherScientific公
司)，其余试剂均为分析纯。
健儿糖浆以及阴性对照由江西天施康中药股份
有限公司提供，制剂规格为10mL／支。爵床药材购
于江西省医药公司，经北京大学药学院胨虎彪教授
鉴定为爵床科植物爵床dusticiaprocumbensL．的
干燥全草。
60羟基一爵床定B对照品为自制，采用《中国药
典)2005年版一部附录ⅥE(4)不加校正因子的主
成分自身对照法，测得其质量分数为98％以上，符
合定量测定用对照品的要求。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：Agi／entZorbaxSB—C，s
(150mm×4．6mm，5”m)；流动相：乙腈一水(31：
69)；柱温：室温；体积流量：1mL／min；检测波长：
256llm。在此条件下样品中67-羟基爵床定B与其
他相关峰均能达到基线分离。见图1。
2．2对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减
压干燥至恒重的60羟基一爵床定B对照品适量，加
乙腈制成含6-羟基一爵床定B0．05mg／mL的溶
液，即得。
2．3供试品溶液的制备；精密量取本品10mL，置
分液漏斗中，用醋酸乙酯萃取3次，每次20mf。，合
并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并移
至2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取
续滤液，即得。
2．4线性关系考察：精密称取经五氧化二磷减压干
燥至恒重67羟基爵床定B对照品6．05mg，置】00
mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。分别
精密吸取对照品溶液2．0、4．0、6．0、8．0、10．0、
12．0、14．0止，注人液相色谱仪，测定峰面积。以6L
羟基爵床定B对照晶的进样鼍为横坐标，峰面积积
分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：
Y一6469193．0x一37678．14，r一0．9999。表明
僦_
0 5 10 15 20 25
1 6。‘羟基时床定B
卜∥hyafoxyJusticidinB
圉1 6‘一羟基一爵床定B对照品(A)、健儿糖浆(B)和
朗性对照(c)的HPLC图
Fig．1HPLCChromatogramsf6-hydroxy—justlcidln
Breferencesubstance(A)+Jian’erSyrup(B)t
andnegativesample(C)
6-羟基一爵床定B进样量在0．121～0．847pg与峰
面积具有良好的线性关系。
2．5精密度试验：取对照品溶液，重复进样6次，测
定，结果60羟基爵床定B峰面积的RSD为1．07％。
2．6稳定性试验：取供试品溶液分别于0、1、2、3、
5、7、9h测定，结果61_羟基一爵床定B峰面积的
RSD为0．98％。
2．7 重现性试验：精密称取同批样品(批号
030919)6份，制备供试品溶液，测定，结果6’一羟基
爵床定B的平均质量浓度为10．32>g／mL，RSD为
1．45％。
2．8回收率试验：采用加样回收试验法。精密量取
健儿糖浆(批号030919)6份，各约5．0ml。，分别精
密加入67一羟基一爵床定B对照品溶液0．05mL(质
量浓度为1．0516mg／mL)，混匀，制备供试品溶
液，测定，计算回收率。结果平均回收率为98．68％，
RSD为0．69％。
2．9样品测定：对3批健儿糖浆进行了67羟基爵
床定B的测定，结果见表l。
表1健儿糖浆中6-羟基一爵床定B的测定结果抽一3)
Table1 6r_Hydroxy—jasticidinBInJInn’erSyrup(n一3)
3讨论
3．1 对照品的确定：考虑到制剂的制备工艺，取健
c
《≤
万方数据
中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月·859·
儿糖浆原料浓缩药液约1．5kg，加醋酸乙酯萃取6
次，每次2000mL，合并醋酸乙酯萃取液，蒸干，拌
样40g，上硅胶柱，氯仿一甲醇梯度洗脱，牧集馏份。
采用高效液相制备的方法，从上述馏份中得到了60
羟基一爵床定B对照品，并对其结构进行了解析。通
过物理、化学、色谱及光谱数据，确定6-羟基一爵床
定B为一新木脂素化合物。采用《中国药典))2005年
版一部附录ⅥE(4)不加校正因子的主成分自身对
照法，测得其质量分数为98％以上，符合要求。
3．2测定波长的选择：将60羟基一爵床定B对照品
溶液注入液相色谱仪，采用Waters“996二极管阵
列紫外检测器对6-羟基一爵床定B色谱峰进行紫外
扫描，结果分别在256．0D．m及305．7nm波长处有
最大吸收，但256．0nm波长处的响应值比305．7
nm波长处的响应值大．故选择检测波长为256am，
结果灵敏准确。
3．3流动相的选择：采用乙腈一水为流动相，当其比
例达3l：69时，60羟基爵床定B对照品的保留时
间约为19min左右，且在此条件下样品中60羟基
爵床定B与其他相关峰均能达到基线分离，阴性对
照无于扰。
3．4提取萃取次数的选择：根据制剂以及6’一羟基一
爵床定B对照品的提取方法，对制剂醋酸乙酯提取
的萃取次数进行了考察，结果萃取次数为2、3、4、5
时，6-羟基爵床定B的质量浓度分别为lo．41、
10．58、10．54、10．55gg／mL。表明醋酸乙酯萃取提
取3次，基本将60羟基一爵床定B提取完全。为r节
省溶剂和时间，故将萃取次数定为3次。
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HPLC法测定红花七厘散中血竭素高氯酸盐
王杰，吴贵华，吕曙华
(天津市药品检验所，天津300070)
红花七厘散为天津中新药业集团股份有限公司
天津宏仁堂制药厂生产的中药成方制剂，其处方以
乳香、血竭、当归、三七等11味中药材组成，具有散
瘀、活血、消肿、止痛作用，用于跌打损伤、血瘀疼痛、
外伤出血。质量标准已收入《国家食品药品监督管理
局国家中成药标准汇编骨伤科分册》。处方中血竭具
有祛瘀定痛、止血生肌作用，与成品的功效相吻合。
因此，在原标准和相关文献报道一””基础上，本实验
采用高效液相色谱法以血竭素高氯酸盐为定量指标
进行了测定，为该制剂的质量控制提供了保证。
1仪器与试药
日本岛津Lc一2010A高效液相色谱仪。血竭
素高氯酸盐对照品购自中国药品生物制品检定所
(批号081l一9302)。红花七厘散由中新药业集团股
份有限公司天津宏仁堂制药厂提供。乙腈为色谱纯，
甲醇、磷酸二氢钠、磷酸为分析纯，水为纯化水。
2方法与结果
收稿日期：gOES1205
2．1 色谱条件：色谱柱：PhenomenexC．s柱(250
mHl×4．6mill，5m)；流动相：乙腈0．05moi／L磷
酸二氢钠(35：65)；柱温：40℃；体积流量：1mI，／
min；检测波长：440nrn。理论板数按血竭素高氯酸
盐峰计不低于5000。色谱图见图1。
2．2溶液的制备
2．2．1对照品溶液的制备：取血竭索高氯酸盐对照
品适量，精密称定，加7％磷酸甲醇制成18／一g／mL
的溶液，摇匀，即得。
2．2．2供试品溶液的制备：取装量差异项下的本
品，研细，取0．3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密
加入7％磷酸甲醇25mL，称定质量，超声处理(功
率250W，频率33kHz)20min，放冷，再称定质量，
用7％磷酸甲酵补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜
(o．45nm)滤过，取续滤液，即得。
2．2．3阴性样品溶液的制备：按处方配比取除血竭
的各药，制成阴性对照，按供试品溶液制备方法处理。
万方数据
RP-HPLC法测定健儿糖浆中6-羟基-爵床定B
作者： 于肖辉， 杨美华， 金钺， 陈建民
作者单位： 于肖辉(江西天施康中药股份有限公司,江西,鹰潭,335000)， 杨美华,金钺,陈建民(中国医
学科学院中国协和医科大学药用植物研究所,北京,100094)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(6)

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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200606022.aspx