全 文 ：-600· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDr gs第37卷第4期2006年4月
柱的长度)为横坐标，一相对应的浸泡液pH值为纵
坐标作图，可求得各样品胶柱上pH梯度曲线。
表2 pH值测定结果
Table2 ResultofpHvalue
柱长，cm pH值 柱长／cm pH值
05 9．4 5．0 5 2
1．0 8．9 5 5 5．0
1．5 8．2 6．0 4 8
2．0 7．8 6 5 4．5
2．5 7 5 7．0 4 2
3 0 7．0 7，5 3 7
3．5 6 5 8．0 3．1
4．0 6 0 8．5 2 0
4．5 5．5
2．7半夏(A庐山、B蛇山、c钟祥)新鲜品自然干
燥l周，其中钟祥半夏按照炮制方法口1炮制成清半
夏(D)、姜半夏(E)。将上述5种样品按2．1制备样
品液，按电泳方法操作，结果见图2。
3讨论
3．1 由图1可见不同产地半夏具有相似的谱带，其
中江西庐山半夏因采集时间早，样品个头小，谱带较
弱；半夏的近缘植物谱带与半夏有明显的区别，可用
此鉴别半夏药材。
3．2 由图2可见干燥的半夏除具有原有的谱带外，
在主带附近新增了细小的条带，可能是干燥的过程
中蛋白质发生部分降解，估计放置时间越长降解越
多，但于半夏和新鲜半夏的谱带非常接近。半夏炮制
品中清半夏虽经过浸泡处理，但未经过高温处理，仍
然有微弱条带；姜半夏由于经过了高温处理，蛋白质
已变性，故无带。由该实验方法可方便、准确地鉴别
半夏药材，且不同产地半夏具有
相对稳定的谱带。
3．3 因胶柱经固定后其长度会
发生变化，故由pH一胶柱长度关
系曲线求被测样品(半夏)所含主
要蛋白质成分的等电点(PI)，所
用长度是经校正后的长度即：
胶柱长度一蛋白质迁移距
离×原胶柱长(固定前)／现胶柱
圈2不同产地长(固定后)
干燥品殛 根据样品各条谱带在各自
炮制品IEF胶柱上的位置(经校正后)，再
IEF图谱分别与各自的pH一长度关系曲
：培‘：1E78kc一线对比，可方便得出样品中主要
ofootei：indry蛋白质PI值。半夏(3种不同产地
andpr。。。。。。dP．的半夏具有相同的谱带，可认为
t口Ⅲ。”口fromdi一是半夏的特征谱带)8种主要蛋
fferenthabitats白质的PI值是：6．50，5．90，5．40，
5．30，5．18，5．03，4．82，4．60。
3．4 两性电解质的加入是为了在电泳支持物上产生
适宜平滑的pH梯度。本实验采用将样品液混入凝胶
液中的点样方法，既简化了操作，增大了加样量，又避
免了样品液在胶柱中所占的一段pH梯度，从而扩大
了电泳分离范围，提高分辨率并缩短电泳时间。
References：
[1]Hezx，ZhangSz．Electrophoresis(电泳)[M]．2”．
＆Ⅲng；SciencePress，2000，
[幻GongQF．Her／,Processing(中药炮制学)[M]．Beijing，
ChinaPressofTraditionalChineseMedal⋯2003．
HPLC—ELSD测定彭泽贝母中浙贝甲素和浙贝乙素
刘红宁1，颜冬梅1，朱卫丰1，饶毅2
(1．现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院，江西南昌 330004
2．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330006)
摘要；目的建立HPLC—ELSD测定彭泽贝母中浙贝甲素、浙贝乙素的分析方法。方法以C-e柱为色谱柱，蒸发
光闶射检测器，运用HPI．C法分离及分析彭泽贝母中的浙贝甲素和浙贝乙索。结果建立了HPLC—ELSD测定彭
泽贝母中浙贝甲素、浙贝乙素的分析方法：色谱柱：HypersilODS2(200raNl×4．6mm，5“m)，柱温30℃。流动相：
乙腈一0．03％二乙胺水(65：35)，体积流量1．0mL／min。检测器参数：漂移管温度83．5c，载气体积流量2．2mI。／
rain，进样量10I=L。结论运用HPI，C—ELSD能够同时测定彭泽贝母中斯J且甲衷、澌贝乙素的量。
关键词：浙贝甲索；浙贝乙素；HPLC—ELSD
中围分类号：R282．6 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)04—060003
鏊鐾是皙{留鉴莒募喜学基金资助项目“江西特产中药彭泽贝母的药效物质及其作用机理的研究。(项目编号；3。】60。母7)
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月·6 1·
Determinationofpeiminea dpeiminineinFmf盯riamonanthabulbbyHPLC—ELSD
LlUHongnin91，YANDong—meil，ZHUWeifeng‘，RAOYi2
(1．KeyLaboratoryofModernPharmaceuticalScienee，JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine．
Nanchang330004，China，2．NationalPharmaceuticalEngineerCenterofManufactureTechnology
forChineseMateriaMedicaSolidPreparation，Nanchang330006，China)
Keywords：peimine；Peiminine；HPLC—ELSD
彭泽贝母为百合科贝母属(FritillariaI。．)植
物，主产于江西省彭泽、湖口、都昌、九江、瑞昌、修水
等县，是贝母属植物在江西的新分布。其原植物经中
国科学院植物研究所陈心启研究员鉴定为百合科植
物天目贝母F．monanthaMigo。临床上用其干燥鳞
茎人药，具有清热润肺、化痰止咳的功效，用于治疗
痰热咳嗽、痰多胸闽、气管炎和慢性支气管炎等常见
呼吸道疾病。初步药理研究结果表明，彭泽贝母生物
碱部分具有平喘止咳之药效。张治针等“1利用酸性
染料比色法、薄层扫描法分别钡I定了彭泽贝母中的
总生物碱和浙贝甲素、浙贝乙索。2005年版《中国药
典》在浙贝母质量控制中，采用HPLC—ELSD法同时
测定浙贝甲素、浙贝乙素口]。本实验建立了HPLC—
ELSD法测定彭泽贝母中浙贝甲素、浙贝乙素，为建
立彭泽贝母的药材质量标准提供了实验依据。
l仪器与试药
Agilent1100型高效液相色谱仪：G1311A系列
四元梯度泵，G1322A脱气机，G1313A自动进样器；
ELSD检测器；Alhech2000(美国Alltech)；色谱
柱：HypersilODS2(200mm×4．6mitt，5btm，依利
特)；Mz一20型万能粉碎机(北京环亚天元机械技
术有限公司)；浙贝甲素、浙贝乙素对照品(购于中国
药品生物制品检定所，批号：110750—200305、
11075]一200303)；甲醇(色谱纯，江苏汉邦有限公
司)；乙腈(色谱纯，山东禹王实业有限公司禹城化工
厂)}二乙胺(分析纯，上海亭新化工试剂厂)}甲醇
(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；氯仿(分析
纯，山东禹王实业有限公司禹城化工厂)；氨水(分析
纯，广东汕头市西陇化工厂)；超纯水(Milipore滤
过)；彭泽贝母(采于江西省彭泽县天红乡武山村，为
四年生样品，经江西中医学院范崔生教授鉴定为百
合科贝母属植物天目贝母F．monanthaMigo。
2方法与结果
2．1 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充
剂，色谱柱：HypersilODS2(200mm×4．6mFFI，5
”m，依利特)，柱温30‘C。流动相：乙腈～0．03％二乙
胺水(65：35)，体积流量：1mI，／min。蒸发光散射检
测器检测，检测器参数：漂移管温度83．5℃，载气流
量2．2mL／min。进样量10pL。理论塔板数按浙贝
甲素计算不低于2000。
2．2对照品溶液的制备：精密称取浙贝甲素、浙贝乙素
对照品适量，分别置棕色量瓶中，加甲醇定容至5m1．，
得0．328mg／mL浙贝甲素和0．219mg／mL的浙贝
乙素对照品溶液。各取2mL加甲醇定容至5mL，得
含浙贝甲素0．1312mg／mI，、浙贝乙素0．0876mg／
mL的混合对照品溶液(10℃以下保存)。
2．3供试品溶液的制备：取60℃真空干燥彭泽贝
母鳞茎粉碎，过四号筛，精密称取(1±0．0005)g样
品，加2mL氨水浸润1h，精密加入氯仿一甲醇(4：
I)溶液20mI。，超声提取45rain，滤过，滤渣用甲醇
少量多次洗涤，至洗涤液无颜色，用蒸发皿置于60
℃水浴上蒸干，加少量甲醇超声溶解，定容至5mL。
0．45,um滤膜滤过，备用。
2．4检测限及定量限的测定：分别取浙贝甲素、浙
贝乙素对照品溶液，用安捷伦自动进样阀控制，逐渐
减小进样体积。取信噪比为3的进样量为检测限，结
果浙贝甲素为0．4592pg，浙贝乙素为0．4599,ug。
取信噪比为10的进样量为定量限，结果浙贝甲素为
1．0824}幅，浙贝乙素为1．0074 ug。
2．5标准曲线的绘制：取浙贝甲素、浙贝乙素对照
品混合溶液50止(最大进样量10091．)、40、20、18、
15(乙素)、10、8止(甲素)，注入高效液相色谱仪中，
以进样量自然对数为横坐标，色谱峰面积自然对数
为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理，得回归方程：
Y_一1．4249X+0．8916(r=0．9994)，Y‘=
1．328x+1．3933(r：0．9997)。浙贝甲素在
6．560～1．049mg，浙贝乙素在4．38～0．876mg进
样量自然对数与峰面积自然对数成良好线性关系。
色谱图见图1。
2．6精密度试验：取供试品溶液连续进样6次，进
样量lopI，，结果RSD}=1．3％，RSDE=1．4％，表
明该方法精密度良好。
2．7重现性试验：同批样品，照供试品制备方法制
备5份，各进10／tI。，进样检测，结果RSD￥一1．9％，
RSDL一2．5％，表明该方法重现性良好。
万方数据
中草鸯ChineseTraditionalandHerhDrugs第37卷第4期2006年4月
0
0 5 10 lS
t／mlR
固1新贝甲素和新贝乙素(A)和样品(B)HPLC圈谱
Fig·1HPLCChromatogramsfimmeand
peiminine(A)，andsampie(B)
2．8稳定性试验：取供试品溶液于0、2、3、6、7、19
h测定，结果表明供试品溶液在19h内稳定。
RSD,=2．7％，RSDE一2．4％。
2．9加样回收试验：取已测得质量分数的彭泽贝母样
品0．2～0．3g，精密称定，分别加入一定量的浙贝甲
素、浙贝乙素对照品溶液，同供试品溶液的制备项下操
作，制备供试溶液并测定，计算回收率，得浙贝甲素平
均回收率为104．04％，RSD为4．04％(月一5)，浙贝
乙素平均回收率为96．9％，RSD为2．06％“一5)。
2．10样品测定：按供试品溶液项下制备样品溶液，
取10止进样，测定浙贝素和浙贝乙素的质量分数，
结果见表1。
3讨论
3。l测定结果表明彭泽贝母中浙贝甲素和浙贝乙
素的量均高于2005年版《中国药典》中浙贝母项下
量的要求。
3．2在分析方法的确定研究中发现：流动相是否调
整pH值对样品色谱行为影响很大。研究结果表明，
表1彭泽贝母中浙贝甲素和浙贝乙●的舅定结果(n=3)
Table1 Determinationofpelmlnea dpeiminine
“F．monantha妇一3)
在流动相中加入0．03％二乙胺，使峰形明显改善，
浙贝甲素、浙贝乙素保留时间合理，分离度达到要求
(R≥1．5)。
3．3本试验首次建立了HPLC—ELSD方法同时测
定了彭泽贝母中浙贝甲素、浙贝乙索，较之应用薄层
扫描法稳定可靠、重现好、检测灵敏度更理想。
3．4实验中采用了ODS柱进行分析。ODS桂为十
八烷基试剂与硅胶表面的硅醇基键合而成的。其pH
值适用范围在2～8，适合分离弱极性、偏酸性物质。
ODS柱的分离机制为吸附与解吸附，要求化合物以
分子形式参与吸附与解吸附的过程。因彭泽贝母中
所含化合物偏碱性，在实验条件下部分以离子形式
存在，极性偏大，不适合ODS柱分离的要求。此种情
况下，通常通过调节流动相pH值抑制样品组分的
解离，增加在固定相中的溶解度，增加中性分子在流
动相中存在的几率，调整分离时间，从而达到合理分
离的目的。综合色谱柱对pH的要求及彭泽贝母中
化学物质的性质，选用二乙胺调节流动相pH。
3．5文献中贝母类生物碱的HPLC—ELSD分析也
有采用三乙胺作为碱性改良剂的，由于二乙胺较三
乙胺更容易在气化室气化，减少了流动相在气化室
的残留，防止了检测器带来噪音。因此在实验中选择
了二乙胺作为碱性改良荆。
References：
[1]ZhangzZ，FanCS．StudiesoNqualityassayotFt4tillaria
删珊kMigo[J]．ChinTraditHerbD兀fgj(中草药)，
1992，23(1)：23—25．
[2]ChP(中国药典)IS]．Vol1，2005．
欢迎订阅《中草药》杂志2001年增刊
2001年第32卷增刊为“第三届中中药新药研究与开发信息交流套”会议论文集，特邀了中国工程
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万方数据
HPLC-ELSD测定彭泽贝母中浙贝甲素和浙贝乙素
作者： 刘红宁， 颜冬梅， 朱卫丰， 饶毅， LIU Hong-ning， YAN Dong-mei， ZHU Wei-feng，
RAO Yi
作者单位： 刘红宁,颜冬梅,朱卫丰,LIU Hong-ning,YAN Dong-mei,ZHU Wei-feng(现代中药制剂教育部
重点实验室,江西中医学院,江西,南昌,330004)， 饶毅,RAO Yi(中药固体制剂制造技术国家
工程研究中心,江西,南昌,330006)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(4)
被引用次数： 11次

参考文献(2条)
1.Zhang Z Z;Fan C S Studies on quality assay of Fritillariamonantha Migo 1992(01)
2.中国药典(一部) 2005

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