全 文 ：毛细管电泳法定量分析贝母中几种生物碱
赵　霞 ,陆　阳 ,陈泽乃
(上海第二医科大学 化学教研室 ,上海　 250025)
摘　要: 目的　建立毛细管电泳法 ( CE)测定贝母中浙贝乙素、西贝素、西贝苷等生物碱的含量测定方法。 方法　
以毛细管区带电泳模式 ,用内标法分析了 9种贝母药材中上述生物碱的含量。结果　 3种生物碱分离完全 ,并有较
好的回收率和重现性。 结论　本法快速、简便、高效 ,为贝母的质量控制和评价提供了可靠依据。
关键词: 毛细管电泳 ;贝母 ;浙贝乙素 ;西贝素 ;西贝苷
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文献编号: 0253 2670( 2001) 02 0116 03
Quantitative analysis of several alkaloids inFrit illaria L. by capillary electrophoresis
ZHAO Xia, LU Yang , C HEN Ze-nai
　　 ( Depa rtment o f Chemistry , Shanghai Second Univ er sity o f Medica l Sciences, Shanghai 250025, China )
Abstract: Object　 To develop a method for the quanti tativ e analysis of peiminine, imperialine and im-
perialine-3β-D-g lucoside in Fritillaria L. by capilla ry elect ropho resis. Methods　 9 species o f bulbus Fritil-
laria L. w ere analysed wi th internal standa rd by the mode of capi llary zone elect ropho resis. Results　 The
3 alkaloids w ere separated completely wi th the method which showed good recovery and reproducibility.
Conclusion　 The method w as proved to be quick, simple, and efficient, and provided a reliable basis fo r
the quali ty cont rol and evalua tion of this plant medicine.
Key words: capil la ry elect rophoresis; Frit illaria L. ; peiminine; imperia line; imperialine-3β -D-gluco-
side
　　贝母来源于贝母属 Frit illaria L. 植物地下鳞
茎 ,为常用清热润肺、化痰止咳药。贝母生物碱是其
主要成分 ,其中浙贝乙素 ( peiminine)和西贝素 ( im-
perialine, sipeimine)属异甾生物碱。药理实验已证
明了浙贝乙素的镇咳镇静作用 [1 ]和降血压活性 [2 ] ;
西贝素除具有降压、解痉等药理作用外 [2 ] ,最近报道
其衍生物具抗胆碱活性 [3 ]。 目前测定贝母生药中单
体生物碱含量的方法仅限于薄层扫描法 [4, 5 ]和高效
液相色谱法 [6, 7 ]。我们在研究贝母中核苷含量分析 [ 8]
的基础上 ,首次运用近年来迅速发展的新型分析技
术—— 毛细管电泳法对贝母中的药效成分浙贝乙
素、西贝素和西贝苷 ( imperialine-3β -D-gluco side)进
行含量测定 ,与文献报道方法比较具有快速、简便、
高效的优点 ,为贝母的质量控制和评价提供了一种
新的可靠的分析方法。
1　仪器试剂和药品
Beckman P/ACE 5510型毛细管电泳仪 (配二
极管阵列检测器 ) , System Gold软件分析。对照品:
浙贝乙素和西贝苷分别由中国科学院上海药物所劳
爱娜教授和吉林中医中药研究院徐东铭教授赠送 ,
西贝素购自中国药品生物制品检定所 ,批号 0767-
9403。内标心得安由华北制药厂提供。贝母生药: 浙
贝母购自浙江鄞县药材公司 ,平贝母购自吉林长春
医药公司 ,安徽贝母购自安徽霍山县医药商店 ,甘肃
贝母购自四川成都德仁堂 ,暗紫贝母由华西医科大
学唐心曜教授提供 ,以上贝母均由唐心曜教授鉴定 ;
伊贝母购自吉林长春左家 ,由白求恩医科大学徐景
达教授鉴定 ;湖北贝母和宁国贝母由安徽医学科学
研究所李清华教授提供并鉴定 ;梭砂贝母由云南大
理医学院马晓匡教授提供并鉴定。甲醇为色谱纯 ,其
余溶剂均为分析纯 ,水为二次重蒸水。
2　实验方法和结果
2. 1　测定条件: 石英毛细管柱内径 75μm,有效长
度 50 cm,毛细管柱温 25℃ ;波长 200 nm;运行缓
·116· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 2期
收稿日期: 2000-03-16基金项目:上海市教委重点学科课题资助作者简介:赵　霞 ( 1966-) ,女。江苏常州人。讲师、硕士。 1985～ 1990年 ,上海医科大学药学院本科生 , 1995～ 1999年 ,上海第二医科大学硕士生 , 1990年至今 ,上海第二医科大学教师。 研究方向:药物化学的研究工作。
冲液为 50 mmo l /L磷酸盐缓冲液 ( p H= 2. 5) ,含
10%甲醇 ;压力进样时间 1 s;恒定电压 23 kV ,运行
电流约 80μA;柱清洗为每次进样前分别用水、缓冲
液各冲洗 3 min。
2. 2　对照品、内标溶液配制和标准曲线绘制:精密
称取浙贝乙素、西贝素和西贝苷对照品适量 ,用甲醇
分别配成浓度为 4. 0, 4. 3和 4. 3 mg /mL的对照品
贮备液备用。 另称取内标心得安适量 ,用甲醇制成
0. 14 mg /mL的内标溶液。测定时精密移取不同量
对照品贮备液 ,加等量心得安内标液 ,用甲醇定容 ,
得不同浓度标准系列溶液 ,按测定条件检测。以对照
品浓度 (X )为横坐标 ,对照品峰面积与内标峰面积
比值 ( Y ) 为纵坐标作回归曲线 ,得回归方程:
浙贝乙素　Y= 3. 681X - 0. 022 4, r= 0. 999 6,
线性范围: 0. 200～ 1. 20 mg /mL
西贝素　Y= 9. 365X+ 0. 012 7, r= 0. 999 1,线
性范围: 0. 215～ 1. 29 mg /mL
西贝苷　Y= 5. 960X - 0. 072 0, r= 0. 999 5,线
性范围: 0. 215～ 1. 29 mg /mL
2. 3　样品测定:参照文献生物碱的提取方法 [4, 5 ] ,精
密称取贝母粉 ( 40目 ) 5 g,加氨水 4 mL使湿润 ,过
夜 ,加入乙醚 -氯仿-乙醇 ( 25∶ 8∶ 2. 5) 38 mL,密
塞冷浸 24 h。准确吸取上清液 25. 00 mL,蒸干 ,加
入内标 ,甲醇定容至 1 mL,用 0. 45μm微孔滤膜滤
过 ,滤液稀释后进样测定 ,得样品电泳图谱。 图 1为
对照品和以浙贝母、平贝母为例的电泳图谱。 9种贝
母的全部分析结果见表 1。
2. 4　精密度试验:对同一浓度的对照品标准溶液 ,
a-对照品 ; b-浙贝母 ; c-平贝母 ; 1-心得安 ; 2-浙贝乙素 ; 3-西贝素 ; 4-西贝苷
图 1　贝母的电泳图
表 1　贝母样品中浙贝乙素 、西贝素、西贝苷含量测定结果 (% )
样品 浙贝乙素 西贝素 西贝苷
浙贝母 F. th unbergi i Miq 　　　 0. 023 1 　　　 0. 002 14 -
暗紫贝母 F. unibracteata Hsiao et K. C. Hsia 0. 020 6 0. 002 59 -
甘肃贝母 F. przewalski i M axim 0. 011 1 0. 001 73 -
湖北贝母 F. hupenensis Hsiao et K. C. Hsia 0. 106 0. 068 2 -
安徽贝母 F. anhuiensi s S. C. Ch en et S. F. Yin 0. 039 5 　　　　 - -
梭砂贝母 F. d elavayi Franch 　　　　 - 0. 001 60 -
宁国贝母 F. nin gguoensis S. C. Chen et S. F. Yin 0. 071 2 0. 119 -
伊贝母 F. pal lidi f lora Sch renk 　　　　 - 0. 053 6 0. 010 7
平贝母 F. ussuriensis Maxim 　　　　 - 0. 025 6 0. 044 9
重复进样 6次 ,测定浙贝乙素、西贝素、西贝苷峰面
积与内标峰面积比值 ,计算 RSD 分别为 0. 8% ,
1. 1% , 0. 9% (n= 6)。
2. 5　重复性试验: 按上述样品测定方法 ,分别测定
6份浙贝母中浙贝乙素、西贝素和平贝母中西贝苷
的含量 ,计算 RSD分别为 3. 18% , 2. 80% , 3. 10%
(n= 6)。
2. 6　加样回收试验:取已知含量的浙贝母和平贝
母 ,浙贝母中加入一定量浙贝乙素、西贝素对照品 ,
平贝母中加入一定量西贝苷对照品 ,按以上样品测
定方法分别测定浙贝乙素、西贝素、西贝苷的含量 ,
计算平均回收率 (n= 6) 分别为 95. 0% , RSD=
3. 52% ; 95. 7% , RSD = 3. 15% ; 94. 2% , RSD =
2. 65%。
3　讨论
3. 1　通过实验比较 ,中性和弱碱性缓冲液均不能将
样品峰分离 ,采用酸性的磷酸缓冲液消除了电渗流 ,
能将样品峰基本分开。加入一定量的有机溶剂作为
改性剂 ,不但可降低电渗流、减小离子迁移速率、提
高分离度和选择性 ,还能对疏水溶质起到增溶作用。
我们在缓冲液中加入 10% 甲醇 ,不但使结构极其
类似的浙贝乙素和西贝素完全分离 ,而且所有贝母
样品中的峰均与内标峰完全分开。
3. 2　在暗紫贝母和甘肃贝母中测到一定量的浙贝
·117·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 2期
乙素 ,宁国贝母中测到相对多量的西贝素 ,以前均未
见文献报道 ,有待进一步研究确证。西贝苷目前仅在
平贝母和伊贝母中发现 [9, 10 ] ,本实验结果与之相符。
从本研究结果来看 ,湖北贝母和宁国贝母中药效成
分含量相对较高 ,提示有进一步开发应用的价值。
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RP-HPLC法测定大豆提取物中
大豆苷元、染料木素、大豆苷、染料木苷的含量
张　立
(西安天诚医药生物工程有限公司 ,陕西 西安　 710075)
摘　要: 目的　建立 RP-HPLC法分离检测大豆提取物中大豆苷元、染料木素、大豆苷、染料木苷 4成分含量的方
法。方法　用 Zo rbax SB-C18色谱柱 ,以甲醇-乙腈 -0. 1% 磷酸 ( 30∶ 8∶ 62)和甲醇 -乙腈 -0. 1% 磷酸 ( 16∶ 24∶ 60)
为流动相分别测定大豆苷元、染料木素和大豆苷、染料木苷 ,检测波长为 254 nm。结果　大豆苷元、染料木素、大豆
苷、染料木苷 4成分的平均回收率分别为 98. 7% , 99. 5% , 98. 4% , 98. 6% ; R SD分别为 1. 4% , 0. 9% , 0. 9% , 1. 7%
(n= 4)。 结论　方法简便、准确、重复性好。
关键词: 大豆苷元 ;染料木素 ;大豆苷 ;染料木苷 ; RP-HPLC
中图分类号: R927. 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 02-0118 03
RP-HPLC determination of daidzein, genistein, daidzin and
genistin in soybean extract
ZHAN G Li
　　 ( Xi′an Tiancheng Drug & Bio-engineering Co. , Ltd. , Xi′an Shanxi 710075, China)
Abstract: Object　 A method fo r the determination of daidzein, g enistein, daidzin and genistin in soy-
bean ex t ract by RP-HPLC was established. Methods　 Zo rbax SB-C18 column ( 4. 6× 15 mm, 5μm) w as
used. Daidzein and genistein w ere sepa ra ted wi th mobi le phaseⅠ ∶ methanol-acetoni t ri le-0. 1% phospho-
ric acid so lution ( 30∶ 8∶ 62) . Daidzin and genistin w ere separated w ith mobile phaseⅡ∶ methano l-ace-
toni t rie-0. 1% phospho ric acid so lution ( 16∶ 24∶ 60) . The UV detection w aveleng th w as 254 nm. Results
　 The average recoveries of daidzein, genistein, daidzin and genistin w ere 98. 7% , 99. 5% , 98. 4% ,
98. 6% and the precision ( RSD ) were 1. 4% , 0. 9% , 0. 9% , 1. 7% ( n= 4) respectively. Conclusion: 　
The method was accurate, rapid and with good reproducibi li ty.
Key words: daidzein; g enistein; daidzin; genistin; RP-HPLC
　　异黄酮类成分是植物药提取领域公认的一类重 要物质 ,具有广泛的药理作用 [1 ]。此类成分在植物界
·118· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 2期
收稿日期: 2000-06-23