全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·525·
筛选了适宜的流动相甲醇一水一冰醋酸(36．4：
63：0．6)，在此条件下，阿魏酸与血浆中蛋白质杂
峰、内源性物质、当归提取物的其他成分以及这些成
分的体内代谢物和结合性成分均能很好的分离，峰
形良好，且阿魏酸保留时间适宜(约10min)，最低
检测质量浓度1．49ng／pL，精密度好。
本检测方法的建立为活血温里复方中活血药主
要有效成分阿魏酸血药浓度和生物利用度的研究提
供了可靠的检测方法。
References：
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从枳壳中分离纯化新橙皮苷对照品
许永兴，瞿海斌，程翼宇+
(浙江大学中药科学与工程学系，浙江杭州 310027)
摘要：目的从枳壳提取物中分离纯化高纯度新橙皮苷。方法枳壳提取物经大孔树脂处理后，用正丁醇萃取分
离、浓缩，将浓缩物重结晶3次。正丁醇萃取物的浓缩是关键。结果优化的枳壳提取物中分离新橙皮苷的工艺使
新橙皮苷的纯化得率达48．6％，纯度达98．7％。结论该方法简单易行，为制备高纯度的新橙皮苷提供了一种经
济的、可行的方法。
关键词：枳壳；新橙皮苷；分离；纯化
中图分类号：R284．2；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)04—0525—03
Isolationandpurificationofne hesperidinreferencesubstancefromFructusA rantii
XUYong—xing，QUHai—bin，CHENGYi—yu
(DepartmentofChineseMedicineScienceandEngineering，ZhejiangUniversity，Hangzhou310072，China)
Abstract：ObjectiveToisolatendpurifyhigh—purityneohesperidinf omFructusA rantiiextract．
MethodsFructusA rantiiextractwastreatedbymacroporousresina dextractedby卵一butanol，then
concentratedandsomesolidwasprecipitated．Aftercrystallizingtheprecipitatethreimes，neohesperidin
wasobtained．Theconcentrationof孢一butan01extractwasoptimized。whichwasofgreatimportanceinthe
wholepreparation．ResultsTheyie dofneohesperidinwas48．6％andpurityofneohesperidinwasupto
98．7％inFructusA rantiiextract．ConclusionHigh—purityneohesperidincouldbepreparedfeasiblyand
economicallybyproposedmethod．
Keywords：FructusAurantii；neohesperidin；isolation；purification
新橙皮苷属于黄酮体化合物中的二氢黄酮类，
通常在酸橙、枳实、枳壳、陈皮中含量较高。新橙皮苷
经氢化处理后形成新橙皮苷二氢查耳酮，是一种特
殊的甜味剂，其甜度是蔗糖的1000倍。而且新橙皮
苷具有较好的耐热性和耐酸性，在食品的杀菌和加
工过程中很稳定，可广泛应用于热处理的食品。目
前，新橙皮苷在欧美一些国家已开始应用，但由于生
产成本较高，使用受到限制。另外，也有报道新橙皮
苷二氢查耳酮是一种前景广阔的新型药用赋型剂。
新橙皮苷多从柑橘类植物中提取，但柑橘类植
物中除了新橙皮苷之外，往往还含有柚皮苷、橙皮苷
等理化性质非常接近的黄酮苷类物质，这使得从柑
橘类植物中分离新橙皮苷非常困难。DelRio等研究
了西班牙产的不同品种、不同季节的柑橘中的新橙
皮苷、柚皮和橙皮苷的含量，选择了一个新橙皮苷含
量很高，而柚皮和橙皮苷含量很少的柑橘品种来提
收稿日期：2004—06—04
基金项目：国家自然科学基金重大研究计划资助项目(90209005)
作者简介：许永兴(1976一)，男，浙江东阳人，硕士研究生，研究方向为制药工程。
*通讯作者E—mail：chengyy@zju．edu．en
万方数据
·526· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
取新橙皮苷r-1|。本实验利用新橙皮苷和柚皮苷在正
丁醇和水中溶解度的差异从枳壳提取物中分离高纯
度橙皮苷，大大扩大了提取新橙皮苷的原料取材范
围，使得一些柚皮苷和新橙皮苷含量都较高的原料
(如枳壳)也可以使用。
1材料与仪器
新橙皮苷、柚皮苷对照品(Sigma公司，纯度均
大于98％)，枳壳药材产于江西，购自华东医药股份
有限公司，试剂均为分析纯。岛津高效液相色谱仪。
2方法与结果
2．1新橙皮苷的HPLC测定03
2．1．1色谱条件：LichrospherC18柱，流动相为乙
腈一水(20：80)，体积流量为1mL／min，检测波长为
280nm。
2．1．2对照品溶液的制备：精密称取新橙皮苷对照
品5．57mg，置于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释
至刻度，摇匀，即得。
2．1．3标准曲线的绘制：精密吸取新橙皮苷对照品
溶液5、10、15、20、30、40,uL，在上述色谱条件下进
样，测定峰面积值。以进样量为横坐标，峰面积为纵
坐标绘制标准曲线，计算得回归方程A一2×105C+
544842，r一0．9998。结果表明新橙皮苷在2．285～
22．28pg与峰面积呈良好线性关系。
2．2枳壳提取液的制备：称取枳壳药材440g，用8
倍量水煎煮2h，然后再用8倍量的95％乙醇回流
提取2h。将水提物减压浓缩至250mL；过D一101大
孔树脂柱(80cm×6．0cm)，用30％乙醇洗脱1600
mL，弃去，用60％乙醇洗脱2000mL，收集60％乙
醇段，与95％乙醇提取液合并，减压浓缩至无乙醇。
加适量的水，得600mL浓缩液。液相分析结果表明
提取液中新橙皮苷的质量浓度为13．66g／L。
2．3用正丁醇萃取分离枳壳提取液：正丁醇与枳壳
提取液体积比按1．2：1，用3600mL正丁醇萃取5
次，所得萃余液中新橙皮苷的质量浓度仅为0．14
g／L，萃取率为[(13．66—0．14)×0．6]／(13．66×
0．6)一99．o％。可见按本法可以把大部分的新橙皮
苷转移到正丁醇相。
2．4正丁醇萃取液的减压浓缩：将正丁醇萃取液
3600mL加入400mL正丁醇稀释成4000mL正
丁醇母液，测得新橙皮苷的质量浓度为2．03g／L。
将其平均分成5份(800mL／份)，分别浓缩到不同
的体积(表1)，放置过夜，使沉淀完全。
2．5新橙皮苷纯度的测定：采用高效液相色谱面积
归一化法评价纯度，这个纯度并不是新橙皮苷真正
的纯度，但它可以反映混合物中新橙皮苷的质量分
数，将这个纯度称之为表观纯度(P。。，)。
2．6纯化得率的计算：按下式计算。
纯化得率一结晶量×结晶体的表观纯度／(浓缩前正丁
醇萃取液×新橙皮苷质量浓度)×100％
2．7测定结果：测定了各自的固体沉淀量及沉淀中
新橙皮苷的表观纯度P。⋯同时测定了各沉淀经第1
次重结晶后的晶体量及晶体中新橙皮苷的表观纯
度，见表1。可以看出，随浓缩倍数的增加，固体沉淀
量增多，固体沉淀的表观纯度逐渐减少；结晶量先增
多后减少，直到最后不能形成晶体，而结晶纯度逐渐
降低。在本实验条件下，C方案的纯化得率最高．。但
由于各枳壳提取液本身的新橙皮苷的质量浓度各不
相同，杂质种类、多少也不一样，所以本实验的结论
对于另外的实验只能是一个参考的作用。
2．8枳壳提取液中杂质对新橙皮苷的促溶作用：将
正丁醇萃取液浓缩结晶，分离晶体，取上清液，测定
上清液中新橙皮苷的质量浓度，结果见表1。这个质
量浓度可以认为是新橙皮苷在各自不同环境中的饱
和浓度。浓缩倍数越高，杂质越多，新橙皮苷的饱和
浓度也越高，显示了杂质对新橙皮苷的促溶能力。
表1各不同方案下新橙皮苷产量、表观纯度和得率
Table1 Output，apparentpurity，andyieldofneo—
hesperidinat fferentoperation
沉淀操作 结晶操作 新橙皮 上清液中
固体沉表观纯 结晶表观纯苷纯化tltf皮：ffl
淀量／g J宦／oA l／g度／％得率／％(g·L一1)
800 310 2．6 0．86479．32
800 210 3．8 1．92878．44
800 160 5．0 2．9674．08
800 125 6．4 4．12869．13
800 50 16．0 4．85862．96
0．43294．52
0．89794．04
1．05391．92
0．63289．16
O 一
24．9 8．46
51．4 8．70
59．O 12．32
34．7 18．60
— 25．71
2．9新橙皮苷的重结晶：最佳纯化方案得到的新橙
皮苷结晶还含有相当一部分的杂质，所以对结晶体
用50％乙醇又进行了两次重结晶，得白色针状晶体
0．8g，经HPLC法检测纯度为98．7％，纯化得率为
48．6％。相当于从88g枳壳中提取的提取物，所以
从枳壳中提取新橙皮苷的产品得率为0．9％。
3讨论
3．1 枳壳提取物的预处理：枳壳提取物中的多糖类
物质会使正丁醇萃取过程发生较为严重的乳化现
象，所以在萃取前枳壳提取物最好经大孔树脂分离
纯化；另外，乙醇的存在会影响正丁醇和水的分层，
所以萃取前枳壳提取物应除去乙醇。
3．2不同浓缩比例对新橙皮苷得率和纯度的影响：
由表1可知，从A到C过程析出的主要是新橙皮
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·527·
苷，杂质却因未到饱和而很少析出，所以固体沉淀量
增加(从0．864g增加到2．967g)，但其表观纯度下
降不大(从79．32％下降到74．08％)。从C到E过
程，柚皮苷等杂质也逐渐达到饱和析出，所以固体沉
淀量迅速增加(从2．967g增加到4．858g)，表观纯
度下降明显(从74．08％下降到62．96％)。从结晶的
角度看，在D和E中，虽然固体沉淀量很多，但由于
固体沉淀中杂质太多，其中不单只有柚皮苷，还有许
多色素类杂质都沉淀析出，对结晶产生很大的影响，
直至E无法结晶。所以，本实验中新橙皮苷的分离
是一种基于新橙皮苷和柚皮苷在正丁醇溶解度差异
的分离方法，所以正丁醇萃取液的减压浓缩的程度
是非常关键的一步，直接关系到新橙皮苷的纯度和
生产得率。
3．3杂质促溶作用对新橙皮苷产品得率的影响：表
1显示的促溶能力暗示着枳壳的提取方法对最终新
橙皮苷产品得率的影响是非常复杂的，一方面是新
橙皮苷提取率对最终产品得率的影响；还有另一个
不能忽略的方面是不同的提取方法会带入不同的杂
质，这也会对最终产品得率和质量产生影响。
References：
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RP—HPLC法测定金槐冠心片中薯蓣皂苷元的含量
徐雄良1，向轶1，柯尊洪2，张志荣p
(1．四JIf大学华西药学院，四川成都610041；2．成都康弘科技实业(集团)有限公司，四川I成都610041)
摘 要：目的 建立RP—HPLC法测定金槐冠心片中薯蓣皂苷元含量的方法。方法采用RP—HPLC法，Shim—pack
CLC一0DS柱(150mm×6．0mm，5弘m)，以甲醇一乙腈(3：2)为流动相，在206nm波长下测定样品水解后的薯蓣
皂苷元含量。结果该方法专属性强；平均空白回收率为95．6％，RSD为2．44％，平均加样回收率为98．7％，RSD
为2．66V00(n一6)。结论该方法简便，分离效果好，可用于金槐冠心片中薯蓣皂苷元的质量控制。
关键词：金槐冠心片；薯蓣皂苷元；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)04—0527—03
Quantitativeanalysisofdiosgenini J huaiGuanxinTabletbyRP—HPLC
XUXiong—lian91，XIANGYil，KEZun—hon92，ZHANGZhi—ron91
(1．WestChinaSchoolofPharmacy，SichuanUniversity，Chengdu610041，China；2．ChengduKanghong
ScienceandTechnologyIndustry(Group)Co．，Ltd．，Chengdu610041，China)
Keywords：JinhuaiGuanxinTablet；diosgenin；HPLC
金槐冠心片由四川省中药研究所于1973年研
制，对冠状动脉粥样硬化性冠心病具有较好的治疗
效果[1]，收载于《四川省药品标准》(中药成方制剂，
1993年版)。本品由穿山龙、槐米、雪胆3味药材经
提取压制而成，具有活血、散结、通脉等功效。原标准
未对其质量进行控制。穿山龙为方中主药，主要含有
多种水溶性和水不溶性皂苷，其中水不溶性皂苷主
要为薯蓣皂苷元与不同糖类结合而成的薯蓣皂苷，
常通过测定水解后生成的薯蓣皂苷元来控制穿山龙
的质量。由于本品穿山龙是以70％乙醇渗漉后的提
取物投料，因此可通过直接水解穿山龙总皂苷来测
定片中的薯蓣皂苷元。文献报道[z3在低波长下采用
RP—HPLC测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量，本实
验在此基础上进一步考察其色谱条件，测定金槐冠
心片中薯蓣皂苷元的含量。该方法简便、分离效果
好，可用于控制本品的质量。
1仪器与试药
日本岛津LC--10Avp高效液相色谱仪，包括
SPD一10Avp紫外可见光检测器，CLASS—VP
V5．03色谱数据处理工作站；CQ一250型超声波清
收稿日期：2004—07—06
基金项目：四川省重点科技项目(01SG008—01)
*通讯作者Tel：(028)85501566Fax：(028)85456898E—mail：zrzzl@vip．sina．com
万方数据
从枳壳中分离纯化新橙皮苷对照品
作者： 许永兴， 瞿海斌， 程翼宇， XU Yong-xing， QU Hai-bin， CHENG Yi-yu
作者单位： 浙江大学,中药科学与工程学系,浙江,杭州,310027
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(4)
被引用次数： 9次

参考文献(2条)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200504018.aspx