全 文 ：·1876· 中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12,El
浓度增加，从而抑制菌类生长，可见p糖苷酶对植物
生长及次生代谢有多方面的影响，绞股蓝皂苷是皂
苷配基通过糖苷键与单糖或小分子多糖(主要是葡
萄糖)结合的产物，而p糖苷酶可使皂苷分解。因此
p糖苷酶活性降低有利于皂苷积累。本实验中，由于
水分亏缺和氮素不足，p糖苷酶活性降低，从而导致
绞股蓝皂苷的量反而增加。
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内生真菌对离体培养的福建金线莲生长的影响
唐明娟，孟志霞，于雪梅，郭顺星‘
(中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京100193)
摘要：目的研究离体培养时瘤菌根菌属(Epulorhizasp．)真菌AR一15和AR一18对福建金线莲生长的影响。方
法采用琼脂作支持物，考察真菌对福建金线莲鲜质量和增高的影响；采用蛭石作支持物，考察真菌和营养液对金
线莲鲜质嚣和增高的影响。结果在琼脂培养基上，与对照相比，接菌AR一15和AR一18可使金线莲苗的增高分别
提高97％和81．5％(P高(P(P<0．01)，显著促进金线莲增高1．17倍(尸<0．05)。真菌AR一18和蒸馏水组合极显著促进金线莲鲜质量的增加
和苗的增高(P<0．01)，分别是不接菌的3．86倍和1．45倍；真菌AR一18和营养液组合极显著促进金线莲增质量
1．96倍(P促进福建金线莲的生长；在人工栽培金线莲的过程中，使用真菌AR一15和AR一18为菌肥，有可能取得较好的效果。
关键词：福建金线莲；真菌；离体培养
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1876一05
EffectofendophyticfungiongrowthofA咒。口cfDc|}lfZ口sroxburghiiinvitroculture
TANGMing—juan，MENGZhi—xia，YUXue—mei，GUoShun—xing
(InstituteofMedicinalPl ntsDevelopment。ChineseAcademyofMedicalSciences
andPekingUnionMedicalCo lege，Beijing100193。China)
Abstract：ObjectiveTostudyth ffectoffungiAR一15andAR一18(Epulorhizasp．)onthegrowth
ofAnoectochilusroxb rghiiinv troculture．MethodsEffectoffungiAR一15andAR一18onfreshweight
andplantheightofA．roxburghiiwerestudiednvitroculture．whenagarwasusedasrest，andeffectof
fungiandnutrientso freshweightandplantheightofA．roxburghiiwerestudiednvitroculture，when
收稿日期：2008—05—08
基金项目：围家杰出青年科学基金资助项目(30325047)
作者简介：唐明娟(1972～)，女．四川I达县人，博上，从事植物分子生物学研究。
*通讯作者郭顺星Tel：(010)62829619E—mail：sxgu02006@yahoo．tom．eft
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1877·
vermiculitewasusedasrest．ResultsInagarmedium，thefungiAR一15andAR一18increasedthplant
heightofseedlingsby97％and81．5％(P(fungusAR—l5+distilledwater)extremelysignificantlyincreasedthfreshweightandplantheightof
seedlings(P<0．01)，whichwas3．26and1．51times，respectivelyascomparedwiththenon—inoculated
ones．Whiletheffectofcombinationtreatment(fungusAR一15+nutrients)onfreshweightofseedlings
wasverysignificant(Pnutrients)increasedsignificantlytheplantheightofseedlingsby1．17timesa control(Pvermiculitemedium，thecombinationtreatment(fungusAR-18+distilledwater)extremelysignificantly
increasedthfreshweightandplantheightofseedlings(P<0．01)，whichwas3．86and1．45times，
respectivelyascomparedwiththenon—inoculatedones．Whiletheffectofcombinationtreatment(fungus
AR一18+nutrients)onfreshweightofseedlingswasverysignificant(Pcontrol(Pofseedlingsbv1．25timesa control(PthegrowthofA．roxburghiiseedlingsinvitroculture．Whileagoodr sultmaybeobtainedbyusingthe
fungiAR一15andAR-18asbiologicalmanureintransplantationcul vationofA．roxburghii．
Keywords：Anoectochilusroxburghii(Wall．)Lindl．；fungi；invitroculture
福建金线莲Anoectochilusroxb rghii(Wall．)
Lindl．是兰科开唇兰属植物，是一种常用的名贵中
药材，广泛用于治疗高血压、糖尿病和肝炎等n]。由
于产区药农长期采挖，其自然资源濒临灭绝瞳]。通过
组织培养可大量繁殖金线莲试管苗，但试管苗移栽
成活率低，生长缓慢，难以养护成为有价值的商品
苗。现在虽有关于金线莲试管苗移栽试验的报道[3]，
但真正栽培成功且可推广应用的目前尚未见报道。
根据自然界兰科植物常与内生真菌形成菌根共生关
系的特点，郭顺星“]等从野生的福建金线莲根中已
经分离获得多种菌根真菌，并将这些菌根真菌回接
到金线莲组培苗，观察到其中5种菌根真菌不但可
与金线莲幼苗形成典型的菌根结构，而且对其生长
具有显著促进作用。本实验在此基础上，进一步研究
了其中2种菌根真菌AR一15和AR一18对离体培养
的福建金线莲试管苗生长的影响，以期为人工栽培
金线莲和试管苗移栽提供新的技术手段，促进其早
日产业化。
1材料与方法
1．1植物材料：继代于改良MS(大量元素减半)+
15g／L蔗糖培养基上，生长状态一致的福建金线莲
Anoectochilusroxburghii(Wall．)Lindl．试管苗。
1．2真菌菌株：瘤菌根菌属Epulorhizasp．真菌，编
号为AR一15和AR一18，0～4℃保存n]。使用前接种
于平皿麦麸培养基上(50．0g／L麦麸，1．5g／L
MgS04，20．0g／LD一葡萄糖，3．0g／LKH2P04，
12．0g／L琼脂粉，pH自然)，(24士1)。C黑暗中活化
10，．--15d，生长良好的真菌用打孔器打成菌片备用。
1．3方法
1．3．1琼脂作支持物培养：用100mI。三角瓶，每
瓶接种2株福建金线莲试管苗，两苗相距1～1．5
cm，共生培养基成分为：NH。N03825mg／L，KN()。
950mg／L，MgSO。185mg／L，肌醇100mg／L，其他
有机成分为MS培养基有机成分量的2／3，蔗糖15
g／L，其他成分同MS培养基，琼脂9g／L，pH
5．8[5]。先将金线莲苗接种于此培养基上生长10～
15d，然后将1个菌片(直径4．5mm)接种于距离
苗1～1．5cm处，接菌后培养35d收获，对照不接
菌。采用完全随机实验设计，重复8次。
1．3．2蛭石作支持物培养：用100mL三角瓶，每
瓶接种2～3株福建金线莲试管苗，支持物为蛭
石：砂子(3：2)，并在三角瓶底部加少量栎树(山
毛榉科Fagaceae)树叶碎片，121℃灭菌1h备用。
营养液采用改良MS+15g／I。蔗糖，121‘C灭菌20
min备用，蒸馏水也经灭菌后备用。实验处理共6
组：(1)不接菌+蒸馏水(CKD)；(2)不接菌+营养
液(CKM)；(3)接种AR一15十蒸馏水(15D)；(4)接
种AR一15+营养液(15M)；(5)接种AR一18+蒸馏
水(18D)；(6)接种AR一18+营养液(18M)。接种
时，将2个菌片(直径11ram)接于树叶上，福建金
线莲苗接种于菌片上，使其根与菌片接触，用蛭石与
砂子把金线莲苗的根埋好，然后浇10mL营养液或
10mL蒸馏水，不接菌的处理组也浇10mL营养液
或10mL蒸馏水，培养2个月收获。采用完全随机
实验设计，重复8次。
1．3．3试管苗的培养条件：温度(24±1)℃，日照
万方数据
·1878· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
11h，照度1500lx。
1．3．4培养物的收获：收获培养物时洗净支持物，
以吸水纸吸千培养物表面的水，称鲜质量，测苗高。
1．3．5统计学处理：琼脂作支持物时，接菌的金线
莲的鲜质量和增高分别与对照进行比较，采用t检
验进行统计分析。蛭石作支持物时，接菌的金线莲的
鲜质量和苗高分别与对照进行比较，采用F检验进
行统计分析[6]。
2结果与分析
2．1 琼脂作支持物时真菌AR一15和AR一18对福
建金线莲生长的影响：金线莲幼苗分别接种AR一15
和AR一18后，两种菌长势较缓慢。接种AR～15后的
前两周气生菌丝发达，菌落白色，后两周气生菌丝变
得不发达，开始出现暗自色基内菌丝与植株基内根
接触，菌落从中心到边缘由灰黑色变白。AR一18菌
落中央为白色气生菌丝，周围有脓状光滑物，后期白
色气生菌丝不发达，变成灰黑色，并出现基内菌丝。
AR—15和AR一18都是在与苗共培养2～3周即长
出基内菌丝时开始与苗及根相接触，根由浅绿或绿
根表逐渐稍微变黄，再渐渐变成黄褐色。根体仍为绿
色，有的根上可见褐色点。由表1可知，接菌AR一15
和AR一18后极显著促进了苗的增高(P别比不接菌增高97％和81．5％；接菌AR一15和
AR一18对苗的增质量也有一定的促进作用，分别比
不接菌促增质量34％和10．3％，但经t检验均无
显著性差异。
表1琼脂培养基上真菌AR一15和AR一18对金线莲
生长的影响(n一8)
Table1 EffectsoffungiAR一15andAR一18ongrowth
ofA．roxburghiiinagarmedium(府=8)
与对照组比较；一J’。。P2．2蛭石作支持物时真菌AR一15对福建金线莲生
长的影响：培养1周后，在蛭石表面处理组15M和
15D都开始长出白色的真菌菌丝，并与福建金线莲
苗开始接触。培养2周后，处理组15M，在蛭石表面
真菌与福建金线莲苗接触，瓶底发现少量真菌菌丝；
处理组15D，在蛭石表面真菌也与福建金线莲苗接
触，但菌丝量比处理组15M少，瓶底尚未发现真菌
菌丝。所有处理组的福建金线莲生长良好。培养3周
后，处理组15M和15D的瓶底均发现少量真菌菌
丝，所有处理组的福建金线莲生长良好。培养4周
后，在蛭石表面，处理组15M和15D的真菌已停止
生长，瓶底有树叶的地方真菌生长良好，无树叶的地
方菌丝不明显，处理组15M的真菌长势好于处理组
15D，所有处理组的福建金线莲生长良好，根生长明
显。培养2个月时，处理组15M和15D的真菌在瓶
底停止生长，所有处理组的福建金线莲生长良好，但
处理组15D的福建金线莲在整个生长过程中一直
到收获时都略好于其他3组处理(图1)。收获时，所
有处理组的福建金线莲的根系发达且粗壮，长约
2cm，每株苗有3～6条根，叶脉金黄色。金线明显，
生长良好。CKM处理组和CKD处理组的根白色或
绿色；而处理组15D的根白色、绿色或黄褐色，黄褐
色约占10％；处理组15M的根白色、绿色或黄褐
色，个别黑色。，黄褐色约占20％。表2结果经一’检验
表明：在无营养液时，接菌AR一15极显著促进福建金
线莲的增质量和苗的增高(P<0．01)，分别是不接
菌的3．26倍和1．51倍；在有营养液时，接菌AR一15
极显著促进福建金线莲增质量1．41倍(P<0．01)，
显著促进苗的增高(P图I 蛭石基质上真菌AR一15对福建金线莲生长的影响
Fig．1EffectoffungusAR一15ongrowthofA．
roxburghiiinvermiculitemedium
表2蛭石基质上真菌AR—15与营养液对福建金线莲
生长的影响(库一8)
Table2 EffectsoffungusAR一15andnutrientso growth
ofA．roxburghiiinvermiculitemedium(库=8)
与其他处理比较：’P’P2．3蛭石作支持物时真菌AR一18对福建金线莲生
长的影响：培养1周后，在蛭石表面处理组18M和
18D都开始长出白色的真菌菌丝，并与福建金线莲
苗开始接触。培养2周后，处理组18M在蛭石表面
真菌已全部与福建金线莲苗接触，蛭石表面的真菌
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1879·
菌丝生长较多；处理组18D在蛭石表面真菌也全部
与福建金线莲苗接触，但菌丝量比处理组18M的
少。培养3周后，处理组18M和18D瓶底均发现有
真菌菌丝，但处理组18D的菌丝量比处理组18M
的少，所有处理组的福建金线莲生长正常。培养4周
后，处理组18M和18D在蛭石表面真菌生长旺盛，
将苗团团围住，瓶底有树叶的地方真菌生长良好，无
树叶的地方菌丝不明显，处理组18M的真菌生长势
好于处理组18D。到收获时，处理组18M和18D真
菌生长减缓，处理组的福建金线莲生长健壮(图2)。
所有处理组的福建金线莲根系发达，生长良好，黄褐
色，少量白色或黑色，较粗，长约2cm，每株苗约
2--6条根。处理组18D的真菌与根密切接触的约
占20％，处理组18M的真菌与根密切接触的约占
50％～60％。由表3可知，真菌AR一18配合使用蒸
馏水极显著促进了福建金线莲鲜质量的增加和苗的
增高(P的鲜质量增加为不接菌的3．86倍，苗的增高为不
接菌的1．45倍。在有营养液时，真菌AR一18配合使
用营养液对福建金线莲鲜质量的增加为不接菌的
1．96倍，苗高增高1．25倍，显著增加了鲜质量和苗
的增高。由此可见，真菌AR一18配合使用蒸馏水为
最佳处理组合。
图2蛭石基质上真菌AR一18对福建金线莲生长的影响
Fig．2EffectoffungusAR-18ongrowthofA．
roxburghiiinvermiculitemedium
表3蛭石基质上真菌AR一18与营养液对福建金线莲
生长的影响(疗一8)
Table3 EffectsoffungusAR一18andnutrientso growth
ofA．roxburghiiinvermiculitemedium(捍=8)
与其他处理比较：’P。P<0．05，一尸<0．01wothert eatments
3讨论
本实验研究了离体培养条件下不同基质上真菌
AR一15和AR一18对福建金线莲生长的影响。从形
态上看，无论在琼脂培养基还是在蛭石基质上，两种
真菌都对福建金线莲的生长有明显影响，表现在根
粗壮，茎节的节间长，茎粗，高生长非常明显，叶脉金
红色，叶上的金线更明显，生长健壮。从收获的鲜质
量看，真菌对金线莲生长的影响随基质不同而稍有
不同，琼脂培养基上两种真菌对金线莲鲜质量的增
加没有显著性影响，但对苗的增高有极显著促进作
用；蛭石基质上无营养液时两种真菌对金线莲鲜质
量的增加和苗的增高均有极显著促进作用，说明这
两种菌根真菌能有效地促进福建金线莲的生长。这
一结论与文献报道一致[4]。此外，如果在蛭石基质中
加入营养液，两种真菌极显著促进金线莲鲜质量的
增加，而对苗的增高只有显著作用，可能是因为加入
MS营养液时，福建金线莲可凭借自身发达的根系
和气生根从基质中吸收营养物质，这时真菌对它来
说是可有可无的，这也是为什么组培时生长在MS
培养基上的金线莲不需共生真菌也能生长良好的原
因。同时也在一定程度上解释了野生福建金线莲常
与真菌共生的原因，因为在外界土壤中营养常比较
缺乏，菌根真菌的菌丝在共生系统中可能正好起着
传递营养的重要作用，从而克服了因营养不足对生
长所造成的不利影响。综合本实验不难发现真菌和
蒸馏水组合是比较有利的处理。这为下一步人工栽
培福建金线莲提供了很好的实验依据。
在蛭石基质上，真菌AR一15和AR一18促进了
福建金线莲的生长，对其鲜质量的增加具有极显著
的作用，认为是菌根真菌的菌丝在共生系统中起着
传递营养的重要作用。因为多数兰科菌根真菌能产
生胞外水解酶，把复杂的碳水化合物分解成小分子
物质。1966年Smith首先证实兰科菌根菌能把纤维
素分解为葡萄糖，而葡萄糖能进入到兰科植物L7J。
1973年Hijnr和Arditti发现丝核菌中的一个种能
产生烟酸，而烟酸最为兰科植物所需[83；1975年
Harvais和Pekkala发现立枯丝核菌能释放硫胺素
和烟酸到基质中，进一步研究发现立枯丝核菌能产
生谷胺酰氨、谷氨酸、天冬氨酸和少量其他氨基酸，
但不释放到基质中，而是由菌丝运输到果实细胞中
供其生长发育之用。所以Harvais认为在自然条件
下兰科植物是依赖其共生真菌来摄取生长所需氨基
酸L9]。综上，虽然有关菌根真菌促进绿叶成年兰科植
物生长的机制已有许多不同的报道：如依靠真菌菌
丝吸收基质中的P、N、Zn、Cu等矿质营养口州，碳水
化合物和水分[11]或产生生长激素[121促进寄主生长
万方数据
·1880- 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
发育，或提高寄主植物的抗性Da,143等。但对于菌根
真菌AR—15和AR一18促进福建金线莲生长的机制
仍有待深入研究。
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芍药种子内源抑制物质活性的研究
张荣荣，王康才+
(南京农业大学中药材研究所，江苏南京210095)
摘 要：目的 通过对芍药种子内源抑制物质的研究，探讨芍药种子休眠的原因。方法 采用生物测定和离体培养
的方法对芍药种子种皮、胚乳中抑制物的活性进行研究。结果证实了芍药种子胚乳、种皮中含有一定活性的抑制
物质，且两者对白菜幼根生长的抑制活性均高于对白菜种子萌发的抑制活性；胚乳乙醚萃取液纸色谱Rf值为0．5
区段对白菜幼根生长抑制活性最强(根长相对百分率36．36％)；接种在不同的培养基上的离体胚均能生根，但未
加GA。培养基上的胚上胚轴不能伸长生长。说明离体胚也存在上胚轴休眠现象，或存在抑制物质。结论芍药种子
中的内源抑制物质是导致其休眠的主要原因。
关键词：芍药种子；抑制物质；胚离体培养
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1880一04．
ActivityofintrinsicinhibitornseedofPaeonialactiflora
ZHANGRong—rong．WANGKang—cai
(InstituteofChineseMedicinalMaterials。NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatethedormancyreasonftheseedsbystudyingo intrinsic
inhibitorntheseedofPaeonialactiflora．MethodsBiologicalmethodsandembryoculturewerecarried
outostudytheactivityofintrinsicinhibitorn hetestaandendospermoftheP．1actiflD凇seeds．Results
TheActivityofintrinsicinhibitorexistsinthetestaandendosperm，andbothoftheintrinsicinhibitors
showedstrongerinhibitoryeffectonthegrowthofyoungerrootsofBrassicapekinensisthanthatontheir
seedgermination．TheRfO．5sectionofthetherxtractofendospermshowedthestrongestinhibitionon
thegrowthofyoungerrootsofB．pekinensis(relativerate：36．36％)．Allembryosthatinoculatedon
differentculturem diumcouldroot，butthe picotylsofembryosthatinoculatedonculturemedium
withoutGA3couldnotelongate，whichshowedt atthe mbryoinvitroalsoexistshedormancyof
收稿日期：2008—04一16
基金项目：江苏省资源开发局项目支持(IAIL3—2007一KJ一02)
作者简介：张荣荣(1983一)，女，在读硕上研究生。河南洛阳人。研究方向为药用植物栽培与生理。
E—mail：2006104121@njau．edu．ca
*通讯作者王康才Tel：(025)84396125E—mail：Wangkc@njau．edu．cn
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万方数据
内生真菌对离体培养的福建金线莲生长的影响
作者： 唐明娟， 孟志霞， 于雪梅， 郭顺星， TANG Ming-juan， MENG Zhi-xia， YU Xue-mei
， GUO Shun-xing
作者单位： 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京,100193
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(12)
被引用次数： 3次

参考文献(14条)
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4.郭顺星;陈晓梅;于雪梅 金线莲菌根真菌的分离及其生物活性研究[期刊论文]-中国药学杂志 2000(07)
5.于雪梅;郭顺星 金线莲与内生真菌共生培养体系的建立[期刊论文]-中国中药杂志 2000(02)
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本文读者也读过(10条)
1. 高微微.郭顺星 三种内生真菌对铁皮石斛、金线莲生长影响的研究[期刊论文]-中草药2002,33(6)
2. 唐明娟.孟志霞.郭顺星.陈晓梅.肖培根.TANG Ming-juan.MENG Zhi-xia.GUO Shun-xing.CHEN Xiao-mei.XIAO
Pen-gen 内生真菌对福建金线莲栽培及酶活性的影响[期刊论文]-中国药学杂志2008,43(12)
3. 唐明娟.孟志霞.郭顺星 菌根真菌对人工栽培金线莲糖类和无机元素的影响[期刊论文]-中草药2008,39(10)
4. 郭顺星.陈晓梅.于雪梅 金线莲菌根真菌的分离及其生物活性研究[期刊论文]-中国药学杂志2000,35(7)
5. 孔祥海 “药王”金线莲的自然资源初步研究[期刊论文]-中草药2001,32(2)
6. 黄慧莲.刘贤旺.吴祥松.赖学文.张寿文 金线莲种子诱导成苗的研究[期刊论文]-中药材2002,25(1)
7. 陈晓梅.郭顺星.王春兰 四种内生真菌对金线莲无菌苗生长及多糖含量的影响[期刊论文]-中国药学杂志
2005,40(1)
8. 郝丽丽.乙引.申刚.张习敏.HAO Li-li.YI Yin.SHEN Gang.ZHANG Xi-min 金线莲腋芽增殖培养条件的优化[期刊
论文]-贵州农业科学2010,38(7)
9. 赵元藩.ZHAO Yuan-fan 金线莲的开发利用价值及林下栽培技术初步研究[期刊论文]-林业调查规划2008,33(3)
10. 孟志霞.郭顺星.于雪梅.陈晓梅.肖培根.MENG Zhi-xia.GUO Shun-xing.YU Xue-mei.CHEN Xiao-mei.XIAO Pei-
gen 植物生长调节剂对福建金线莲丛生芽增殖的影响[期刊论文]-中国药学杂志2008,43(23)

引证文献(4条)
1.张福生.郭顺星 金线莲ISSR反应体系的建立与优化[期刊论文]-中草药 2011(1)
2.刘建利 宁夏枸杞内生真菌的分离及抗氧化活性的测定[期刊论文]-时珍国医国药 2011(4)
3.张福生.郭顺星 金线莲ISSR反应体系的建立与优化[期刊论文]-中草药 2011(1)
4.勇应辉.戴传超.高伏康.杨启银.赵沫 大戟内生真菌对其生长和两种萜类物质量的影响[期刊论文]-中草药
2009(7)


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