全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·929·
洗脱，由于检测波长较低，甲醇有末端吸收，用甲醇一
水为流动相基线波动较大，选用乙腈一水系统可以消
除溶剂的干扰，基线较平稳且色谱峰有较好的分离。
使用等度洗脱时，有效成分出峰时间长且分离效果
不够理想，梯度洗脱在60min内可使色谱峰全部洗
出，且多数峰达到基线分离。
3．3本实验采用二级管阵列检测器对指纹图谱的
检测波长进行了选择，从200～400nm进行了紫外
扫描，200、203am处所包含的信息量最大，同时各
峰的响应较大，但是由于200nm波长较短，基线波
动较大，影响色谱峰型和分离度，所以选择203nm
为测定波长。另外在o～4min时由于溶剂的影响以
及色谱峰在203nm的响应太大使色谱峰很难达到
分离，所以选择波长为230nm，可以改善各峰的分
离度和峰形。
3．4土贝母为单品种来源，主要考察产地的影响。
不同产地土贝母药材所含各有效成分基本相同，但
是各成分的量差别较大。由聚类结果可以看出，15
个样品大致可以分为3大类，从地理分布考虑：第A
类样品的产地是陕西、宁夏、甘肃、青海，这些地区都
属于西北地区气温较低且比较干燥；第B类样品的
产地是河南、河北、山东、安徽、山西、四川、湖北，这
些地区气温比较适中，并且此类又可分为两类，四
川、湖北为一类与其他产地分开，说明四川、湖北的
气候与其他产地有所不同，从而影响了土贝母药材
的质量；第C类样品的产地是云南，气温较高且潮
湿。由于药材的生长受到温度、光照和湿度的影响，
所以不同产地的土贝母之间的内在质量存在一定的
差异。由此可见如果要保证药材的一致性，应注意药
材的产地。
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白术药材的指纹图谱研究
黎琼红，马兴田，谢晨，龚秀琦
(广东康美药业股份有限公司，广东普宁515300)
摘 要：目的 建立白术药材的高效液相指纹图谱分析方法。方法 采用DikmaKromasilC。。(250mmX4．6mm，
5牡m)色谱柱，以乙腈一水梯度洗脱(45％～100％乙腈)，体积流量为1．0mL／min，柱温25℃，检测波长242nm。结
果 通过对13批不同产地的白术样品的测定，标定了24个共有峰，并通过“中药指纹图谱计算机辅助相似度软
件”和聚类分析等辅助手段，计算相似度等相关参数。结论该方法准确可靠，重现性好，为更好地控制白术内在质
量提供了科学依据。
关键词：白术；指纹图谱；高效液相色谱
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)06—0929—03
FingerprintsofRhizomaAtr ctylodisMacrocephalae
L1Qiong—hong，MAXing-tian，XIEChen，GONGXiu—qi
(GuangdongKangmeiPharmaceuticalCo．，Ltd．，Puning515300，China)
Keywords：RhizomaAtractylodisMacrocephalae；fingerprint；HPLC
白术为菊科植物白术Atractylodesmacrocepha—
laKoidz．的干燥根，主产于浙江、安徽、湖北、湖南
等省。其味甘、苦性温，具有健脾益气、燥湿利水、止
汗、安胎的功效叫。主要含有挥发油成分和内酯类成
分。为控制和保证产品质量的稳定性，本实验依据国
家药品监督管理局颁布的《中药注射剂指纹图谱研
收稿日期：2006—08一12
作者简介：黎琼红(1979一)，女，硕士研究生。Tel：(0663)2920370E—mail：kj6868kli@163．eom
万方数据
·930· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
究的技术要求(暂行)》和国家药典委员会印发的《中
药注射剂指纹图谱实验研究技术指南(试行)》对13
批不同产地药材进行了指纹图谱测定，该方法可操
作性强，重现性好，为更好地控制白术药材质量提供
了科学依据。
1仪器与试药
美国Agillem1100高效液相色谱仪，二级阵列
检测器，1100色谱工作站。乙腈和甲醇均为色谱纯，
水为纯净水。13批样品分别为浙江、安徽、江西、湖
南、湖北的药材，药材来源见表1(13批样品是专人
采集，经江西中医学院龚千锋教授鉴定为《中国药
典》规定的正品白术)。
表1 13批药材产地和批号
Table1 Sourceandlotnumbersof13batchesof
RhizomaAtr ctyiodisMacrocephalae
样品 来源 批号 样品 来源 批号
S1 江西修水051110s8 浙江磐安041012
S2 江西修水060615S9 重庆酉阳051126
S3 浙江东阳060602S10湖南岳阳050605
S4 浙江缙云060602$11湖北利川051130
s5 浙江磐安060526S12浙江金华050625
S6 浙江新昌060526s13湖北恩施051201
S7 浙江缙云051225
2方法和结果
2．1色谱条件：DikmaKromasilC18(250mm×4．6
mm，5弘m)色谱柱，以乙腈为流动相A，以水为流动
相B，梯度洗脱程序为(A)：0--25min，45％～80％；
25～40min，80％～100％；40～55min，100％。体积
流量为1．0mL／min，柱温25℃，检测波长242nlTl。
2．2供试品溶液的制备：精密称取自术药材粗粉约
2g，置于锥形瓶中，精密加入甲醇40mL，密塞，称
质量。超声30min后放冷，称质量，补足减失质量。
滤过，吸取续滤液，过0．45肚m滤膜，即得。
2．3测定方法：分别精密吸取参照物溶液和供试品
溶液10肛L，注入液相色谱仪，记录55min的色谱
图，即得。供试品色谱图中，以色谱峰(s峰)的保留
时间和峰面积为1，计算各指纹峰的相对保留时间
和峰面积比值。
2．4分析时间考察：吸取供试品S8溶液10牡L，注
入高效液相色谱仪，运行120min，记录色谱图，发
现55min以后已无明显色谱峰，因此分析时间定为
55min。
2．5空白试验：吸取甲醇空白溶液10弘L，注入高
效液相色谱仪，记录色谱图，结果溶剂出峰少，对检
测基本无干扰。
2．6精密度试验：取同一批供试品溶液，连续进样
6次，分别对共有峰的相对保留时间和峰面积比值
进行考察。结果表明，各共有峰的相对保留时间
RSD小于0．1％，峰面积比值RSD小于2．0％，符
合指纹图谱分析要求。
2．7重现性试验：取供试品药材粉末6份，制备供
试品溶液，分别对共有峰的相对保留时间和峰面积
比值进行考察。结果表明，各共有峰相对保留时间
RSD小于0．1％，峰面积比值RSD小于3．0％，符
合指纹图谱分析要求。
2．8稳定性试验：取供试品溶液分别于0、3、6、9、
12、15、18、21、24h进样分析，考察共有峰的相对保
留时间和峰面积比值。结果表明，各共有峰相对保留
时间RSD小于0．1％，峰面积比值RSD小于
4．0％，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2．9指纹图谱相似性评价[2]：分别将13批样品进
样分析，记录色谱图，保留时间(fn)为36．13min的
峰面积均较稳定，且分离度好，设为参照物峰S，以
其保留时间和峰面积为1，计算各峰的相对保留时
间(a／Tr)和峰面积比值。图1为13批白术药材的指
纹图谱。
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14．49 21．，4 28．g甘 36．Z3 43．48
t／rain
图1 13个不同产地样品指纹图谱
Fig．1Fingerprintsofsamplesfrom13habitats
2．9．1 聚类分析：将样品所有出峰的相对保留值导
入SPSS软件，以余弦夹角作为距离测度方式，建立
样品间相似性聚类。结果见图2。将各类之间的距离
标定至1～25，可见在距离约为5～10时，可将样品
分成4类，除S8、S1、S11自成一类外，其他样品具有
较好的相似性，归于一类，而在3～5，S2、S6、S5、S9、
$13较相似，$10、$12、S4、S7较相似。将S8、S1、Sll
3批排除，其他10批样品参与共有模式的建立。
2．9．2共有模式的建立及相似性分析：依据聚类分
析后的结果，将10批药材出峰数据导人“中药指纹
娜mⅢ喜|趵鼯盯；；}踮驰∞鸵甜
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·931·
0 5 10 15 20 25
1一——一一—。。1一+——～——一+一一一+一一⋯一一{一——一一+
图2 13批样品聚类分析树状图
Fig．2Dendragramofhierarchicalclusteringanalysis
for13samples
图谱计算机辅助相似度计算软件”，经过峰点校正和
数据匹配，以中位数法建立对照指纹图谱即共有模
式，见图3。各样品与共有模式之间的相似度在0．95
以上，结果见表2。结合样品出峰情况及匹配结果，
有24个峰为10批样品共有，但在各产地中丰度差
异较大。其他各峰在不同产地中出现率差异较大。确
定该24个峰为共有峰，其相对保留时间和相对峰面
积范围结果见表3。经统计共有峰面积占总峰面积
百分比为93．27％～98．30％，非共有峰面积与总峰
面积的百分比为2％～7％。符合指纹图谱研究的非
共有峰占总峰面积百分比<10％的技术要求。
S
j．．；曼筑L捻篡扎婪融
20
I
121
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7．97 15．93 23．90 31．87 39．83 47．80
t／min
图3 白术药材共有模式指纹图谱
Fig．3ReferencefingerprintofRhizoma
Atract3，iodisMacrocephalae
表2 10批样品的相似度结果
Table2 Similarityoftensamples
样品 相似度 样品 相似度
S2 0．99 S7 0．98
S3 O．978 S9 0．988
S4 ．0．977 S10 0．982
S5 O．996 S12 0．98
S6 0．995 S13 0．989
表3 10批白术样品共有峰
Table3 CommonpeaksoftenbatchesofRhizoma
AtractylodisMacrocephalaesampl s
峰号竺翌竺 相对峰面积 峰号竺翌竺 相对峰面积
留时间 留时间
⋯
1 0．2910．019～0．06913 0．7580．027～0．173
2 0．3350．006～0．05714 0．8700．011～0．039
3 0．3690．007～0．02715 0．9100．099～0．174
4 0．4560．019～0．14816 0．9500．032～0．065
5 0．4810．482～0．99417 0．9790．OZ7～0．057
6 0．5120．305～0．624S 1．0001．000
7 0．6180．009～0．13918 1．1180．004～0．026
8 0．6410．035～0．20719 1．1340．008～0．032
9 0．6570．031～0．08120 1．1620．258～0．408
10 0．6700．017～0．06521 1．1790．153～0．189
11 0．7040．012～0．05722 1．1960．011～0．129
12 0．7380．023～0．29223 1．2290．021～0．030
3讨论
3．1 本实验用梯度洗脱的方法使白术药材得到了
较好的分离。对13批药材进行测定和聚类分析，结
果表明3批差异大不归入一类，其他10批相似，但
各峰量上表现出较大差异，可初步分为3类。全面考
虑各产地因素，因此筛选该10批样品参与共有模式
的建立。经过比较各样品的出峰情况，标定了24个
特征峰，建立白术指纹图共有模式。各样品之间的相
似度均在0．9以上，与共有模式的相似度均在0．95
以上，说明样品间整体出峰相似，以这些样品建立共
有模式较为可靠。通过实验证实该测定方法稳定，可
用于白术药材真伪鉴别。
3．2 色谱条件优化：对甲醇一水、0．5％磷酸水一乙
腈、乙腈一水系统进行了考察，结果表明乙腈一水系统
分离良好，峰形佳，故选择乙腈一水系统进行梯度洗
脱；比较了203、220、242、276、300nm5个波长下的
色谱图，发现203和300nlTl峰信号少，220和276
niTl处有几个出峰信号大，但其他峰信号太小，而
242rim处出峰多且信号整体较为明显，因此选择
242mE为检测波长。
3．3供试品提取方式选择：分别考察了甲醇、乙醇、
醋酸乙酯、丙酮等不同提取溶剂，超声、回流等不同
提取方式，并进行了提取时间为30min、1h、2h，提
取次数为一次、两次的考察，结果表明，以甲醇超声
30rain一次即可提取完全，与长时问的提取结果相
差很小，因此确定该提取方法。
References：
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万方数据
白术药材的指纹图谱研究
作者： 黎琼红， 马兴田， 谢晨， 龚秀琦， LI Qiong-hong， MA Xing-tian， XIE Chen，
GONG Xiu-qi
作者单位： 广东康美药业股份有限公司,广东,普宁,515300
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(6)
被引用次数： 9次

参考文献(2条)
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床 2011(8)


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