全 文 ：中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·767·
娑罗子中三萜皂苷成分的HPLC定量分析
郭杰1’2，徐嵬1，杨秀伟p
(1．北京大学药学院，北京100083；2．北大世佳研究中心，北京100084)
摘 要：目的建立娑罗子中三萜皂苷成分的高效液相色谱测定方法，同时分析中华七叶树、天师栗和浙江七叶树
等的种子及商品娑罗子药材中5种三萜皂苷成分(qz叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib及七叶树皂苷A)的量。
方法采用反相Diamonsil。“C18硅胶色谱柱(250mm×4．6mm，5弘m)，以乙腈一水一磷酸(123：277：7)为流动相，
检测波长为220nm。结果建立了同时测定娑罗子中5种皂苷七叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib及七叶树
皂苷A的HPLC分析方法，线性范围内5个皂苷化合物的标准曲线呈良好的线性关系。结论该法简单、灵敏，可
同时定量分析娑罗子中七叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib及七叶树皂苷A。
关键词：娑罗子；七叶树；三萜皂苷；七叶树皂苷；七叶树皂苷A
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)05—0767—04
QuantifiedanalysisoftriterpenoidsaponinsinSemenAesculibyHPLC
GUOJiel”，XUWeil，YANGXiu—weil
(1．SchoolofPharmaceuticalSciences，PekingUniversity，Beijing100083，China；2．Bescholor
ResearchCenterofPekingUniversity，Beijing100084，China)
Keywords：SemenA sculi；AesculuschinensisBunge；triterpenoidsa o in；escins；aesculusideA
娑罗子是《中国药典》收载的传统中药之一，为
中华七叶树AesculuschinensisBunge、天师栗A．
wilsoniiRehd．和浙江七叶树A．chinensisBunge
var．chekingensis(HuetFang)Fang等的干燥成熟
种子[1]，此3种药用植物为我国特产。娑罗子性味
甘、温，归肝、胃经，具有理气宽中、和胃止痛之功效，
主治胸腹胀闷、胃脘疼痛；其主要成分为一系列结构
相似的皂苷，即七叶树皂苷，在抗炎、抗渗出、消肿胀
等方面作用显著，能恢复毛细血管的正常通透性，增
加静脉张力，改善微循环，对脑外伤和外周血管疾病
有很高的治疗价值D]。最新的研究结果表明七叶树
总皂苷具有抗肿瘤作用[3]，且七叶树总皂苷中的主
要成分七叶树皂苷Ia经人肠内细菌转化产生的去
酰基七叶树皂苷(desacylescin)I比原形化合物的
抗肿瘤活性更强[4]。笔者曾先后报道了中华七叶
树‘5～川、天师栗‘8|、日本七叶树‘9’103和浙江七叶树‘11]
等植物种子中的化学成分研究，在此基础上，本实验
报道应用HPLC方法同时定量分析中华七叶树、天
师栗和浙江七叶树的干燥成熟种子及商品娑罗子中
5种三萜皂苷成分的量，为其质量评价提供方法。
1仪器与试药
1．1 仪器：美国TSP公司高效液相色谱系统，
P2000型二元梯度泵，UV3000型紫外检测器，
PCI000型工作站。
1．2试药：水为重蒸馏水；乙腈为色谱纯，85％磷酸
为优级纯，皆购自北京化工厂；其余试剂皆为分析
纯。D一101大孔吸附树脂购于天津市海光化工有限
公司。
中华七叶树种子于1997年9月采自陕西省略
阳县，天师栗种子于1998年8月采自湖北省神农架
森林王林场，浙江七叶树种子于2001年9月采自浙
江省杭州市灵隐寺北高峰。市售商品分别购自：陕西
宁陕(f4品编号：9711112)、陕西汉中(9711113)、西
安所罗巷(971208)、河北安国(980106)、安徽毫州
(9712241)和四川莲花池(9712242)等药材集散地。
以上标本存放在北京大学天然药物及仿生药物国家
重点实验室，药材由北京大学药学院杨秀伟教授鉴
定。七叶树皂苷(escin)Ia、Ib和异七叶树皂苷
(isoesein)Ia、Ib及七叶树皂苷A(aesculuside)从
浙江七叶树种子中分离、纯化得到[111。
2方法与结果
2．1 色谱条件：DiamonsilTMC18分析柱(250mm×
收稿日期{2006—08—09
基金项目：国家自然科学基金资助项目(29972004)
作者简介：郭杰(1978一)，男，齐齐哈尔市人}北京大学药学院2001级硕士研究生，现就职于北大世佳研究中心。
*通讯作者杨秀伟Tel：(010)82805106，62070317Fax：(010)82802724E-mail：xwyang@bjmu．edu．ca
万方数据
·768· 中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
4．6mm，5弘m)，流动相：乙腈一水一磷酸(123：
277：7)，体积流量：1．0mL／min，柱温：室温，检测
波长：220nm。在此条件下，样品中七叶树皂苷Ia、
Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib及七叶树皂苷A与相邻
成分达到良好基线分离。娑罗子中5种皂苷对照品
的HPLC色谱图见图1，陕西汉中市售品娑罗子总
皂苷的HPLC色谱图见图2。
石1矿—i而j丽1矿i6石面0而汀丽硫0百蕊而§01§ol§o2ao
t|rain
图1娑罗子中5种皂苷对照品的HPLC色谱图
Fig．1HPLCChromatogramsffivereference
saponinsfromSemenAesculi
七叶树皂苷Ia
0 50 100
r／min
150 200 250
图2 陕西汉中市场品娑罗子总皂苷的HPLC色谱圈
Fig．2HPLCChromatogramsftotalsaponins
incommoditySemenAesculiatHanzhong
cruderugmarketofShaanxiProvince
2．2对照品溶液的制备：分别精密称取七叶树皂苷
Ia、Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib及七叶树皂苷A适量，
用甲醇配制成每种对照品质量浓度为2．5mg／mL
的储备液，放置在4℃冰箱中，备用。
2．3 供试品溶液的制备：精密称取娑罗子粉末(过
80目筛)约2g，加水饱和的正丁醇200mL，浸泡过
夜后超声振荡20rain。然后用滤纸滤过，再用50mL
水饱和的正丁醇洗药渣一次，弃去药渣，合并正丁醇
液并减压回收，得提取物。将提取物用少量甲醇充分
溶解，再用甲醇定容至10mL，2500r／rain离心15
rnin，取上清5mL，放置于干净的试管中。挥干甲醇
后用少量水溶解，加载于直径1．5CITI、高5C1TI的D一
101大孔吸附树脂柱(柱顶端铺加中性氧化铝0．2g)
中，依次用水40mL和95％乙醇40mL洗脱。收集
95％乙醇洗脱液并回收溶剂，得娑罗子总皂苷。将总
皂苷用甲醇定容至10mL，供HPLC定量分析。
2．4线性关系考察：分别精密吸取各对照品储备液
适量，配制成含七叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷
Ia、Ib及七叶树皂苷A为o．02、0．4、1．2、1．8、2．4
mg／mL的质量浓度梯度，各进样10弘L，依次注入
高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以峰
面积(y)为纵坐标，质量浓度(X)为横坐标，绘制标
准曲线。回归方程、相关系数和线性范围见表1。
表1 5种三萜皂营成分的标准曲线
Table1 Calibrationcurveffivekinds
oftriterpenoidsaponins
2．5精密度试验：分别精密吸取0．72mg／rnL的七
叶树皂苷Ia、0．48mg／mL的七叶树皂苷Ib、0．46
mg／mL的异七叶树皂苷Ia、0．44mg／mL的异七叶
树皂苷Ib及0．087mg／mL的七叶树皂苷A对照
品溶液10肛L，重复进样6次，测得其峰面积，计算
得相应的RSD分别为1．04％、1-18％、1．32％、
1．68％和1．34％。
2．6 稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液10
弘L，分别于0、4、8、12、16、20h进样，测得其峰面积，
分别计算七叶树皂苷Ia和Ib、异七叶树皂苷Ia和
Ib及七叶树皂苷A的质量分数，结果其RSD分别
为1．97％、1．90％、2．16％、1．93％和1．82％。表明
供试品溶液在20h内稳定。
2．7重现性试验：按照前述供试品溶液的制备方
法，精密称取同一批号样品，分别制备5份供试品溶
液，每次进样10肛L，按上述色谱条件测定七叶树皂
苷Ia、Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib及七叶树皂苷A的
质量分数，结果平均质量分数分别为5．61、4．07、
2．30、2．52、0．25mg／g生药，RSD分别为2．o％、
1．3％、3．7％、2．1％和1．3％。
2．8样品测定：按“2．3供试品溶液的制备”项所述
方法分别制得中华七叶树、天师栗、浙江七叶树等的
干燥成熟种子和6种商品娑罗子的总皂苷，按2．1
项进行总皂苷中七叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷
Ia、Ib及七叶树皂苷A的HPLC分析，各进样10
肛L，测得峰面积，由标准曲线计算5种皂苷的量，结
果见表2。
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·769·
表2不同来源的娑罗子中5种三萜皂苷成分的
定量分析(万一3)
Table2 Quantifiedanalysisoffivekindsof
triterpenoidsaponinsinSemenAesculi
fromvarioussources(厅一3)
3讨论
3．1 流动相系统的选择：本项研究对HPLC流动
相进行了探讨，选择了甲醇一水一甲酸、甲醇一水一冰醋
酸、乙腈一水一甲酸和乙腈一水一磷酸等流动相系统，结
果以乙腈一水一磷酸(123；277：7)为流动相系统时5
种皂苷达到了良好分离。本项研究亦探讨了流动相
中磷酸的比例，以该比例为最佳，低于该比例达不到
良好分离。见图2。
3．2提取方法的考察：取娑罗子试验样品，分别以
水饱和的正丁醇、95％乙醇和70％乙醇为溶剂，经
索氏回流或超声处理，进行了最佳提取方法的探讨。
用索氏回流提取时，精密称取样品粉末(过80目筛)
2g(平行样3份)，以相应溶剂浸泡过夜后经索氏回
流3h，然后用滤纸滤过除去药渣，回收溶剂得到提
取物。超声处理提取时，称取同样和同样量的样品粉
末，以相应溶剂浸泡过夜后经超声处理20min，然
后用滤纸过滤除去药渣，回收溶剂得到18份提取
物。总皂苷的精制参考文献方法[12](如上“2．3样品
的处理”)，得到娑罗子总皂苷。将总皂苷用甲醇定容
至10mL，各进样10肛L，依次注入高效液相色谱
仪，按上述色谱条件测定峰面积，由标准曲线计算七
叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷Ia、Ib的量。结果表
明3种提取方法按总皂苷的收率评价，以超声处理
提取收率较高。如果按七叶树皂苷Ia、Ib和异七叶
树皂苷Ia、Ib的合计量评价，亦以水饱和的正丁醇
为溶剂、超声处理提取为佳。
3．3 由以上测定结果(表2)可知，在确定种的3种
七叶树属植物中，中华七叶树种子中的七叶树皂苷Ia
和Ib、异七叶树皂苷Ia和Ib的量皆为最高，且5种
皂苷合计量亦最高；对于七叶树皂苷A来说，在天师
栗的种子中量显著，而在中华七叶树和浙江七叶树种
子中却几乎检测不到。对于市场品娑罗子而言：在河
北安国市场品中，七叶树皂苷Ia、Ib和异七叶树皂苷
Ia、Ib的量皆最高，且5种皂苷合计量亦最高，其生药
基源可能为中华七叶树种子；在西安索罗巷市场品娑
罗子中，七叶树皂苷Ia、Ib的量明显低于另外5种市
场品，且5种皂苷合计量亦最低；在6种市场品娑罗
子中，皆有效地检测到了七叶树皂苷A。对于中华七
叶树种子而言，4种主成分，即七叶树皂苷Ia、Ib和异
七叶树皂苷Ia、Ib的量比值近似为3：2：1：1，而购
自陕西宁陕的市场品中，相应的比例也近似为3：2：
1：1。另外，购自陕西汉中和四川莲花池的市场品中，
相应的比例接近3：2：1：1。因此，初步判断陕西宁
陕、陕西汉中和四川莲花池的市场品娑罗子为中华七
叶树的种子。从5种主要皂苷的相对量比例上来看，
河北安国市场品娑罗子亦可能为中华七叶树的种子。
从化学结构上来看，当七叶树皂苷Ib和异七叶树皂
苷Ib分子结构中的乙酰基水解掉之后即成为七叶树
皂苷A。由于市场品娑罗子中七叶树皂苷A的量有
不同程度的提高，推测娑罗子在储藏过程中可能会发
生这种转化，有待深入研究。从中华七叶树、天师栗、
浙江七叶树的分布量及其娑罗子的产量并结合本文
的研究结果，推测市场上主流生药娑罗子来源于中华
七叶树。
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】996．
东北红豆杉内生真菌的分离及产紫杉醇菌的鉴定
金涛1，王伟2，刘 军1，平文祥1，周东坡”
(1．黑龙江大学生命科学学院微生物黑龙江省高校重点实验室，黑龙江哈尔滨150080；
2．东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨150030)
东北红豆杉TaxuscuspidataSieb．etZucc．又
名紫杉、赤皮松、紫柏松，《本草推陈》记载有利尿、通
经作用，现代研究表明含有二萜类化合物，如紫杉宁
(taxinine)、紫杉宁A、紫杉宁H、紫杉宁K、紫杉宁
L等口]，另外还含有包括紫杉醇在内的紫杉烷类化
合物。紫杉醇(paclitaxel，商品名Tax01)是提取自红
豆杉植物的能够治疗多种癌症的有效药物口]。目前
已在临床上作为乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌的
一线用药，其作用机制是抑制微管蛋白的解聚，破坏
细胞微管的功能，从而影响纺锤体的形成，抑制肿瘤
细胞的有丝分裂‘3|。由于红豆杉天然资源十分有限，
通过各种生物工程方法生产紫杉醇已经成为国内外
研究和规模开发紫杉醇的热点。通过微生物发酵法
生产紫杉醇不仅有利于保护珍稀濒危的红豆杉树
种，而且可以完全解决紫杉醇的药源问题，所以说微
生物发酵法生产紫杉醇具有十分巨大的经济效益和
广阔的开发空间。本实验主要对东北红豆杉内生真
菌的分离方法及产紫杉醇菌的鉴定进行了研究。
1材料和方法
1．1 标本：东北红豆杉树皮采样自黑龙江省穆棱林
业局。采集时注意树皮带有木质部并迅速放入无菌
材料袋，保存于实验室4℃冰箱。
1．2培养基：固体培养基包括PDA培养基[4]、查氏
培养基[4]、马丁氏琼脂培养基[4]。液体发酵培养基是
由添加维生素、金属离子的改良培养基组成[5]。
1．3 仪器与试剂：日本岛津LC一10ATvp高效液相
色谱仪，岛津SPD一10ATvp检测器，20弘L进样定量
环，日本岛津SIL一10AD自动进样器。Waters2695
液相色谱仪，ZQ2000质谱检测器(配有电喷雾电离
源)。具有显微摄影功能的OlympusBX51显微镜。
乙腈为液相色谱纯；高效液相色谱仪用水为双
蒸水；其他药品为分析纯；紫杉醇对照品购于Sigma
公司，质量分数大于99．8％，配制成质量浓度为
1．079mg／mL的对照品保存，使用时适当稀释。
1．4方法
1．4．1内生菌分离方法：所采集红豆杉的树皮切成
约0．5cm×0．5cm的小块，经75％酒精表面消毒2
min，然后用无菌水冲洗3遍左右，按3点接种法栽
种于PDA培养基平皿上，于恒温箱中28℃倒置培
养。3d后，经无菌操作挑取新长出的菌丝，划线转
接于PDA培养基平皿上，经数次划线分离，得到形
态完全一致的单菌落即纯化的内生真菌。
1．4．2液体发酵培养：菌株在28℃，120r／min的
摇床上进行培养。500mL三角瓶中培养基装置为
200mL，接种量为3％，培养周期为14d。
1．4．3发酵液中紫杉醇的薄层色谱初步鉴定：将东
北红豆杉内生真菌发酵液滤过，得到的菌丝体研磨
破壁，按质量与体积1：5的比例用醋酸乙酯萃取，
滤去菌丝的澄清滤液用同等体积的醋酸乙酯萃取3
次，将醋酸乙酯萃取液合并，50℃减压蒸干，用5
mL甲醇溶解再浓缩至o．5mL得样品液。
取硅胶适量加合适比例水研磨至均匀，倾倒于
薄层色谱板(20em×20cm)上，阴干24h后，于干
燥箱中105℃活化30min备用。取50肛L样品和5
肛L紫杉醇对照品点样于薄层色谱板上，每个样品间
距2am，放入展层剂已饱和的色谱缸中，展层剂为
收稿日期：2006—08—17
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30570025)；黑龙江省“十五”重大攻关课题(GA02C101)；黑龙江省教育厅资助项目(10533013)
作者简介：金涛’，男，博士，主要研究方向为生物制药和微生物学。Tel：13766969566E—mail：jintaoliu8@yahoo．eom．en
*通讯作者周东坡Tel：13936163985E—mail：zhoudp@yahoo．com．en
万方数据
娑罗子中三萜皂苷成分的HPLC定量分析
作者： 郭杰， 徐嵬， 杨秀伟， GUO Jie， XU Wei， YANG Xiu-wei
作者单位： 郭杰,GUO Jie(北京大学药学院,北京,100083;北大世佳研究中心,北京,100084)， 徐嵬,杨
秀伟,XU Wei,YANG Xiu-wei(北京大学药学院,北京,100083)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(5)
被引用次数： 5次

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