全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
加样回收率供试液，按上述色谱条件测定，结果平均
回收率为97．4％，RSD为1．7％。
2．1l样品的测定：取同一产地大麦及其麦芽和麦芽
的不同炮制品(炒麦芽、焦麦芽)各5g，制备供试品溶
液，按上述色谱条件测定麦黄酮，测定结果见表1。
裹1大麦、生麦芽、炒麦芽、靠麦芽中
麦黄酮的测定结果(n=3)
Table1 Determinationoftrlelni barley，rawmalt。
torrefiedmalt．andustulatedmalt妇一3)
样品 麦黄酮／(rag·g叫)样品 麦黄酮／(ms·g-t)
大麦0．0031 炒麦芽0．0067
生麦芽0．0056 焦麦芽0．0090
3讨论
实验前曾对麦芽的提取方式、提取溶剂及其用
量和提取时间进行过考察，结果表明用10倍量的甲
醇热回流提取3h为佳。
大麦芽制成生麦芽后麦黄酮的质量分数上升至
原来的1．8倍左右；但是生麦芽经炮制后，麦黄酮显
著上升，炒麦芽中麦黄酮质量分数为生麦芽的1．2
倍，焦麦芽中麦黄酮质量分数是生麦芽的I．6倍左
右。研究结果对从化学成分角度解释大麦、生麦芽、
炒麦芽和焦麦芽生物活性的差异提供了科学依据。
Reference：’
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骨碎补超微饮片的HPLC指纹图谱研究
李顺样“““4，张志光“4，龙勉5，蔡光先“2
(1．湖南省中医药研究院，湖南长沙410006I2．湖南中医学院，湖南长沙410007；3．湖南师范大学，湖南长沙
410081；4．湖南农业大学，湖南长沙410128；5．StateUniversi yofNewYork，StonybiookNY11794，USA)
摘要：目的研究骨碎补超微饮片的HPLC指纹图谱，考察其有效成分，为骨碎补超微饮片的质控提供可靠方
法。方法色谱柱为大连依利特公司HypersilBDSC。。(200mm)(4．6miD_，5pm)，流动相为甲醇一0．1％磷酸水溶
液梯度洗脱；柱温为25_c}体积流量为1．0mL／minI检测渡长为283nm。结果初步建立了骨碎补超微饮片的
HPLC指纹图谱，标定了8个共有峰。结论利用HPLC指纹图谱可以比较全面的控制骨碎补超微饮片的内在质量。
关键词：骨碎补超微饮片I指纹图谱；高效液相色谱
中田分类号：R282．7}R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)11—1634—04
HPLCfingerprintofUltramicroRhizomaDrynariae
LIShun—xian91^3一．ZHANGZhi—guan93”，LONGMian5，CAIGuang—xianl’2
(1．HunanAeademvofTraditioamlChineseMedicine，Changsha410006，China；2．HunanCollegeofTraditionalChinese
Medicine。Changsha410007，China‘3．HunanNormalUniversity，Changsha410081，China；4．HunanAgricultural
University，Changsha410128，China}5．StateUniversityofN wYork，StonybrookNY儿794，USA)
Abstract：ObjectiveTostudyUltramicroRhizomaDrynariae(herbalpiecespreparedfordecoction)
andetermineitsconstituentsandcontentbyHPLCfingerprint．MethodsChromatographiccolumn：
HypersilBDSC18(200mm×4．6mm，5弘m)；mobilephase：methanol一0．1％phosphoricacidinwaterina
gradientlution；columntemperature：25℃；flowrate：1．0mL／min；wavelength：283nm．Results
ThefingerprintofUltramicroRhizomaDrynariaewasestablishedandeightcommonpeaksweredisplayed
inthefingerprint．ConclusionThemeth dsa datacanbeusedtocontrolthequalityofUltramicro
RhizomaDrynariae．
Keywords：UltramicroRhizomaD ynariae(herbalpiecespreparedfordecoction)；fingerprint；HPI。C
骨碎补为水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei
(Kunze)J．Sm的干燥根茎，具有补肾强骨、续伤止
痛的作用“1。但市售骨碎补药材有12种之多⋯。本
实验对相同植物来源的10批不同地区的商品骨碎
收藕日期：2005—03—24
嚣喜器界：旱蠢蕞磊：銎芎鹫器昌薯饕等金贾冶鬻紫露兰焉髫薯；慝鍪；辩舅甏；?雾群筹黝§鬻籍蓍喜岳舅雾雾番器驽霁器重
点实验室主任。从事天然资源研究、中药新药研究。Tel／Faxt(0731)8807173Email：lishunxiang@hotmail·corn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 635·
补药材制成微米级细胞破壁的超微饮片进行测定，
并进行方法学考察，初步建立了指纹图谱，为骨碎补
标定了8个共有指纹峰，其中柚皮苷为对照品。并且
比较了8个植物来源种的骨碎补药材指纹差别。
1仪器与试剂
岛津Lc一10A高效液相色谱仪(配有Lc～
10Avp输液泵，SPD--10Avp紫外检测器，柱温箱)。
柚皮苷对照品(批号：722—200005，供测定用，中国药
品生物制品检定所)，甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其
余试剂为分析纯。10批商品骨碎补药材购自湖南、
四川、重庆、广东、广西、江西、福建、陕西等地，经湖
南省中医药研究院中药研究所生药室谢昭明研究员
鉴定，分别加工成超微饮片。
2方法与结果
2．1供试品溶液的制备：分别精密称取骨碎补超微
饮片粉末约1．0g(共10批)，精密称定，于圆底烧
瓶中，加甲醇40mg，加热回流3h，滤过，滤液转移
至50mL量瓶中，用甲醇洗涤药渣及容器，洗液滤
人同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0．45,um微孔
滤膜滤过，即得。
2．2对照品溶液的制备：分别精密称取在110uC干
燥至恒重的柚皮苷对照品约5mg，置50mI。量瓶
中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2．3色谱条件：色谱柱为大连依利特公司Hypersil
BDSC．。柱(200mm×4．6mm，5pm)；流动相为甲
醇(A)一0．1％磷酸水(B)，二元梯度洗脱，洗脱程序：
A：0min0％，5min5％，30min30％，45min
50％，55min60％，70min50％；柱温为25℃；体
积流量为1．0mL／min；检测波长为283nm。该条件
下骨碎补的各色谱峰均获得较好的分离，见图1。
S
t，m112
图1 骨碎补超微饮片的HPLC指纹圈谁
Fig．1HPLCfingerprintofUltramicro
RhizomaDrynariae
2．4方法学考察
2．4．1精密度试验：取同一份骨碎补超微饮片的供
试品溶液连续进样5次，比较共有指纹峰的相对保
留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相
对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD<2％，符
合指纹图谱的检测要求o]。
2．4．2稳定性试验：取同一份骨碎补超微饮片供试
品溶液，分别在制备后1、2、4、8、12，24h进样，比较
各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果
表明各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基
本一致，RsD<2％，表明样品溶液在24h内稳定，
符合指纹图谱的检测要求口]。
2．4．3重现性试验：取同一批骨碎朴超微饮片样品
5份，制备供试品溶液，比较各共有指纹峰的相对保
留时间和相对峰面积，结果表明各共有指纹峰的相
对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD<2％，符
合指纹图谱的检测要求o]。
2．5指纹图谱的建立
2．5．1共有指纹峰的标定：采用相对保留时间标定
共有指纹峰：以柚皮苷为参照物(s)，将各色谱峰保
留时间与同一图谱中参照物的保留时间比较，其比
值为各色谱晦的相对保留时间。分别计算10批骨碎
补样品的指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间和峰
面积，其中8个色谱峰为槲蕨共有(表1)，因此，标
定它们为共有指纹峰。其共有指纹峰的相对保留时
间为：峰l(o．5276)、峰2(o．5403)、峰3
(o．6193)、峰4(O．745o)、峰5(o．8501)、峰6
(O．910)、峰S(1．000O)、峰8(1．0842)。
裹1 10批骨碎补超撇饮片的相对保留时间
Table1 Relativeretenttimeoftenbatches
ofUltramicroRhizomaDrynariae
相对保留时问批号一1 2 3 4 5 6 S 81 o 5278 05405 0 6196 0 719 6 o_8537 0 9140 1．0000 1．08422 0 5272 05蛐80．6188 0．720 08“40 9138 1．0000 1．08453 0．5267 0．54010 6194 0．?207 0．8417 0．9141．0000 1 08464 05265 0 5帅20．520 0．7187 O e54 O罾063 1．O呻01．08385 0．5268 0 5397 0．6188 0 720 0．8414 0 9】38 1．0000 1 0趴56 0．5278 0 5帅60．6194 0．719 9 0 8537 0 9065 1．0000 1．08447 0-5287 0．5408 06195 0 7208 0 8530 0-9139 1．OOO0 1．08438 0．52B4 0．5368 0 6195 0 71910．8538 0 9058 i，000O 1 0船8
9 0．5273 0，5408 0．6187 0．9718 08536 0．9061．0000 1．0836
】0 0-5283 0．5394 0．6104 0 7169 0854i0．9055 1．000 1．0647
±!』!：!!!!!：!!!!!：坐!!：些!!：!!!!业!!!：型!!：!!1
2．5．2共有指纹峰的相对峰面积：以图谱中柚皮苷
为参照物，将各共有指纹峰峰面积与同一图谱中参
照物的峰面积比较，其比值为各共有指纹峰的相对
峰面积。根据《中药注射剂指纹图谱研究的技术要
求》的规定口]，单峰峰面积占总峰面积<10％时，峰
面积比值不作要求，仅需标定相对保留时间。把所有
的峰面积全部标定，见表2。
2．6骨碎补超微饮片中柚皮苷的测定o]：精密量取
万方数据
·1636· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
寰2 10批骨碎扑超搬饮片共有指垃蜂的相对峰面积
Table2 Relativecommonpeakareaoftenbatches
ofUltramtcPoRhiz lnaDrynarlae
相对蟑面积批号一1 2 3 4 5 6 S 81 0·2747 0 215Z 0-0204 0．0390 0-叭52 0 01帅1000 l 05322 0．2776 0．21410 0210 O，03q9 0016i0．毗B5 1．0∞01．066l3 0．2678 0．2102 0 0212 0 0403 0．0153 0．0189 1．0000 0，05104 0 2763 0．2138 0．0212 0．0397 0．0162 0 0187 1．0000 1．06595 0 2653 O．2103 o-0209 0 0396 0．0154 0．札84 1．000O 1 07786 0 2672 0．2102 0．0202 0．0402 00158 0．0180 I．0000 1．06707 0．2684 0 2167 0．0209 0 0396 00154 0．0190 1 000 1 0768
8 0．2772 0 2145 0．0206 0．0364 0．0159 O0180 1 OOO0 1 0657
9 027610 2114 0-0804 0 0390 0．0152 00164 I．0000 1．0610
10 0．2684 0 2039 0 02010毗O6 0 01510．0186 1．0000 1．0663
平均值0．2719 O 2114 o．0207 o．0397 0．0156 0018 1 000 1 064l
配制好的柚皮苷对照品溶液，2．5、5、10、15、20“L
进样，测定峰面积。以柚皮苷进样量为横坐标，峰面
积响应值为纵坐标，绘标准曲线，得回归方程：Y一
790．96X+132z．04，r一0．9995。结果表明柚皮
苷在0．250～2．000“g与峰面积呈良好的线性关
系。精密吸取对照品溶液10pL，供试品溶液10pL，
分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算，即得。
10批不同来源骨碎补超微饮片中的柚皮苷测定结
果见表3。
2．7相似度计算：采用中南大学“计算机辅助相似
性评价系统”进行相似度计算。
。!J。．jL～———．—。—J．．d——。JJ～——
o_1矿1矿1矿1F’矿丽
SO 60
flrl矿1矿1矿丐而j
有关参数设置如下：预处理，数据压缩，5000×
11，压缩层数2；数据平滑，使用移动窗口多项式最
小二乘拟合平滑；数据平移，三标准峰平移；谱峰处
理：谱峰识别，所有指纹图谱同一阈值0．02I自动谱
峰匹配。相似度计算结果见表4。
2．8不同植物来源的骨碎补的指纹图谱：见图2。
衰3 10批不同来源骨碎补中柚皮苷测定结果
TabJe3 Narlnginintenbafch盼ofUltramicroRhizome
Drynariaefromdifferentorigins
批号 产地 柚皮苷／％ 批号 产地 柚皮苷／“
1 湖南永州0．60 6 广东0．76
2湖南寝牌县0．77 7 江西0．5P
3 湖南怀化0．62 8 广西防城0．59
4 宁远0．13 9 福建051
5 郴州永兴0．61 10重庆南川038
寰4骨碎补相似度计算(垒谱)结果
Table4 Slmilaritycountof enbatchesof
UltramicroRhizomaDrynariae
一：』血。。圳。 一!。。．。．⋯。。，1丁—五—菇—丽—而，1了—丽—而—而—赢
=：==兰=兰兰些型=
60 0 10 20 30 40 50600 10 20 30 40 5060 0 10 20 30 40 50
f，8112
A一槲蕨(永州)B-中华槲藏(陕西)c一石莲姜槲蕨(重庆)D一川滇槲蕨(云南)E栎中槲藏(海南)
F团叶槲蕨(广西贺州)G一崖姜蕨(广东肇东)H一太叶骨碎补(广西)
A—D．forfunel(Yongzhoucity)B-D．baronii(Shaanxi)C—D．propinqua(Chongqingcity)D—D，delavyi(Yun an)
E—D·querciyblia(Hainan)F—D．bonli(Hezhoucity)G—Pseudodrynaria㈣Hj(Zhaoqingc ty)HDavalliformosa月a(Guangxi)
圈2不同檀物来源的骨碎补指纹嘲谱
Fig·2FingerprintsofGusuihufromdifferentorigins
3讨论
3．1超微饮片是我院研制的一种微米级新型中药
饮片，因其原药材的形状、显微特征已不存在，采用
指纹图谱技术来控制其质量具有较强的专属性。
3．2本实验所用的对照品为柚皮苷，参照《中国药
典》中骨碎补的测定方法制备供试品溶液，参照文献
报道“’5]，选择乙腈一水(2t 98～26；74)--_二元梯度洗
脱的分离效果比较好，保留时问也适合。供试品溶液
紫外扫描显示在230、270、283nm有较强的吸收，
平行试验结果得出采用参照柚皮苷的最大吸收波长
之一283nm为检测渡长时，各峰的吸收较均衡，故
被选用。
3．3对10批不同商品的骨碎补超微饮片进行了柚
皮苷的测定，结果表明骨碎补超微饮片因原料品种
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 637·
与产地的不同，其有效成分也有较大的差异，
3．4 同名异物(种)的指纹图谱研究主要考察市场
品种的有效性，资源的可替代性，以及为药材的真伪
鉴别、化学分类学做些铺垫。对槲蕨科槲蕨属的槲
蕨、中华槲蕨、石莲姜槲蕨、川滇槲蕨、栎叶槲蕨、团
叶槲蕨、崖姜蕨属崖姜、骨碎补科骨碎补属的大叶骨
碎补8个药材骨碎补来源品种的测定显示8个种的
成分有相同性；从成分种类及含量也存在较大差异，
槲蕨中成分全面，活性成分含量，从分子水平证明
《中国药典》收载的品种是正确的。 ．
3．5相似度计算结果表明，4组相似度的参数均在
0，9以上，说明建立的指纹图谱相似度较好”j。
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柱前衍生化RP—HPLC法分析龟板中氨基酸
李惠芬，骆迭，张庆伟，朱丽丽，李蓥
(天津医科大学药学院中药分析国家重点实验室，天津300070)
摘要：目的采用柱前衍生RPHPLC法对龟板中13种氨基酸进行分析。方法用6mol／LHCI水解提取龟板
中总氨基酸，以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂，采用外标法，梯度洗脱的方式分析。结果13种氨基酸在
40min内均可得到很好的分离，回收率(除甘氨酸外)为91．68蹦～106．26％，RsD为0．718“～4．386％。结论所
建立的方法分离效果好、灵敏、准确、简便，且采用普通的C，s色谱柱，可广泛用于台有多种氨基酸样品的分析。
关键词：龟板}氨基酸；异硫氰酸苯醅衍生；高效液相色谱
中田分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号t0253—2670(2005)11一i637—03
Determinationof minoacidinChinemysreevesiibypre—columnderivatizationRP—HPLC
1。IHui—fen，LUODa，ZHANGQing—wei，ZHULi—li，LIJun
(StateK yLaboratoryofChineseMateriaMedicaAn lysis，CollegeofPharmacy．TianiinMedicalUniversity,
Tianjin300070，China)
Abstract：0bjeetiveTodeterminethecontentof13aminoacidsinChinemysreevesiibypre-column
derivatizationRP—HPLC．MethodsToextractto alminoacidsbythemethodofhydrolysisin6mol／L
HClandusephenyli30thiocyanate(PITC)astheflerivatinggentwithexternalstandardmethodt analyze
thembygradientelution．ResoltsThirteenkindsDfaminoacidscanbeseparatedwellin40min。the
averagerecoverieswere91．68％一106．26％，andRSD0．718％一4．386％．ConclusionThemethodiS
sensitive，accurate，simple，andreliableforthdeterminationof mi oacidsinmanyothersampleseven
bycommonC1Bcolumn．
Keywords：Chinemysre ve ii(Gray)；aminocid；PITCderivatization；HPLC
’龟板是乌龟Chinemysreevesii(Gray)的干燥腹
甲，味甘成，性微寒，归肝、肾、心经，具有滋阴潜阳、
益肾强骨、养血、补心等功能。龟板中含有丰富的氨
基酸。以往分析氨基酸多采用氨基酸分析仪，价格昂
贵，用途单一。本法采用RP—HPLC梯度洗脱及
PITC、TAG柱前衍生技术‘“⋯，使用普通C。。分析
柱，采用外标法，对龟板中13种氨基酸成分进行了
分析，取得了满意的结果。
ll曩翼!茎l套潍(194技6术)笔曼薯裂罴裹罂星挈棼；jg棼譬，现为天津医科大学药学院仪器分析中心主任，国家中医药管理局中药分析作者简介：李惠芬 ，女，教授，研究方向为中药分析，现为天津医科大学药学院仪器分析中心主任，国家中医药管理局 药分析
重点实验室主任。TelT(022)23529243E—mail：lihuifen@tijmu．edu．en
万方数据
骨碎补超微饮片的HPLC指纹图谱研究
作者： 李顺祥， 张志光， 龙勉， 蔡光先， LI Shun-xiang， ZHANG Zhi-guang， LONG Mian，
CAI Guang-xian
作者单位： 李顺祥,LI Shun-xiang(湖南省中医药研究院,湖南,长沙,410006;湖南中医学院,湖南,长沙
,410007;湖南师范大学,湖南,长沙,410081;湖南农业大学,湖南,长沙,410128)， 张志光
,ZHANG Zhi-guang(湖南师范大学,湖南,长沙,410081;湖南农业大学,湖南,长沙,410128)，
龙勉,LONG Mian(State University of New York Stonybrook NY 11794,USA)， 蔡光先
,CAI Guang-xian(湖南省中医药研究院,湖南,长沙,410006;湖南中医学院,湖南,长沙
,410007)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 11次

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