全 文 ：表 3。 结果提示:蜂毒素对 H22皮下移植瘤具有明显
的抑制作用 ,且随浓度增大 ,抑瘤作用逐渐增强。
表 3　蜂毒素对皮下荷 H22肝癌小鼠的抑瘤
及延长生存期作用 (x± s , n= 12)
Table 3　 Antitumor and prolonging survival time ef fect
of melitt in on subcutaneous inoculation mice
with H22 hepatocarcinoma cells (x± s , n= 12)
组　别 剂　量
/( mg· kg- 1 )
平均瘤重
/g
抑瘤率
/%
生存期
/d
生命延
长率 /%
蜂毒素　　　 4. 5 　 0. 33± 0. 13 　 84. 3 24. 18±1. 89* * 　 67. 30
3. 0 0. 64± 0. 07 69. 5 18. 09±1. 70* * 15. 03
1. 5 2. 03± 0. 41 3. 3 16. 09±1. 38* 9. 04
环磷酰胺 30 0. 07± 0. 02* * 96. 7 23. 63±1. 69* * 57. 06
对照　　　　 - 2. 10± 0. 47 0 14. 45±1. 37 0
　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs control group
4　讨论
　　本实验采用 M TT法检测了蜂毒素对体外培养
的小鼠肝癌 H22细胞的杀伤作用 ,结果表明 , 8μg /
m L以上蜂毒素对 H22细胞的抑制率均在 70% 以
上 ,作用明显 ,且随药物浓度增加而增强。 本实验还
在体外实验的基础上 ,继续观察了蜂毒素对小鼠皮
下 H22细胞移植瘤的抑瘤效果。结果表明蜂毒素不
但在体外可抑制 H22细胞生长增殖 ,在体内亦能明
显抑制移植瘤的生长 ,随药物浓度增大 ,抑瘤作用逐
渐增强 ,同时明显延长了荷瘤小鼠的存活时间。
增殖细胞核抗原 ( PCN A) 是真核细胞合成
DNA所必需的一种酸性核蛋白 ,近年研究表明其
是 DNA聚合酶的辅助蛋白之一 ,调控 DNA的合
成 ,并在细胞周期中起重要的调控作用 [5 ]。PCN A在
G1后期开始表达 ,并逐渐升高 , G1 /S期交界处达到
高峰 , S期持续高水平表达 ,到 G2期明显下降。现已
证明 PCN A的合成与表达与细胞的增殖状态相关 ,
其量的变化与 DN A的合成一致。本研究结果发现 ,
蜂毒素作用于 H22细胞 24, 48 h后 ,细胞平均荧光
强度低于对照组 ,提示 H22细胞经蜂毒素作用后 ,参
与 DNA合成的 PCN A的表达明显下降 ,故推测影
响 PCN A的表达可能是蜂毒素抑制小鼠肝癌 H22
细胞生长和增殖的作用环节之一 ,确切的作用机制
值得进一步探讨。
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泽兰有效部分对血小板聚集和血栓形成的影响
石宏志 1 ,高南南 2 ,李勇枝 1 ,余竞光 2 ,范全春 1 ,白桂娥 1
( 1. 航天医学工程研究所 ,北京　 100094; 2. 中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所 ,北京　 100094)
摘　要: 目的　研究泽兰有效部分 L. F04对血小板聚集和血栓形成的影响 ,探讨其活血化瘀作用机制。 方法　用
高分子右旋糖酐静脉推注造成大鼠血瘀证模型 ,观察泽兰 L. F04对二磷酸腺苷 ( ADP )诱导的大鼠体内血小板聚
集以及体内动静脉旁路血栓、体外旋转环内血栓形成的影响。结果　 L. F04 0. 408, 0. 204 g /kg对模型组大鼠 ADP
诱导的体内血小板最大聚集率明显增加皆有显著的抑制 ,且呈剂量依赖关系 ;与对照组相比 ,血瘀模型大鼠体外血
栓质量明显增加 ,长度仅有增加趋势 , L. F04高、低剂量 ( 0. 408, 0. 204 g /kg )皆有抗血栓形成作用 , L. F04高剂量
对血栓干质量、湿质量的减轻尤为明显 ; L. F04高、低剂量对实验性动静脉旁路血栓形成均有明显的抑制作用 ,抑
制率分别为 27. 41% , 27. 14%。 结论　泽兰 L. F04可显著抑制血小板聚集及体内、外血栓形成。
关键词: 泽兰 ; 血小板聚集 ; 血栓
中图分类号: R852. 22; R286. 32　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0923 04
·923·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-12-18基金项目: 国家自然科学基金资助项目 ( 39770899)作者简介: 石宏志 ( 1970— ) ,女 ,河北永清人 ,航天医学工程研究所助理研究员 ,硕士 ,毕业于中国医学科学院、中国协和医科大学药用植物研究所 ,研究方向为生药学、航天医学。 T el: ( 010) 66362387　 E-mail: shihong z2002@ yahoo. com. cn
Effects of active fractions L. F04 from ground part of Lycopus lucidus
var. hirtus on platelet aggregation and thrombosis formation
SHI Hong-zhi1 , GAO Nan-nan2 , L I Yong-zhi1 , YU Jing-guang2 ,
FAN Quan-chun
1 , BAI Gui-e
1
( 1. Institute of Space Medico-Engineering , Beijing 100094, China; 2. Institute
o f Medicinal Plant , C AMS& PUMC, Beijing 100094, China )
Abstract: Object　 To study the effects of activ e f raction L. F04 from the g round part o f Lycopus lu-
cidus Turcz. va r. hirtus Reg. on pla telet ag g rega tion and thrombosis fo rmation and investiga te it s mecha-
nisms of promo ting blood ci rculation and remov ing blood stasis. Methods　 The effects o f L. F04 on
platelet agg rega tion induced by ADP in vivo, th rombosis o f artery-vein side road and thrombus formed in
rota ry lo op in vit ro were examined, the ra t model of blood stasis made by injecting high mo lecula r w eight
dex t ran ( HMWD) w as used. Results　 L. F04 0. 408 and 0. 204 g /kg evident ly inhibi ted the ADP-induced
increase of platelet maximum agg rega tion rate in v ivo in HMWD model, w ith a concentration-dependent
manner. Compa red wi th the control g roup, the thrombus w eight in ra t model of blo od stasis w as increased
signi ficant ly and the leng th of th rombus w as show n an increasing t rendency. L. F04 0. 408 and 0. 204 g /kg
bo th show n th e anti-thrombosis ef fect. L. F04 0. 408 g /kg show ed bet ter effects o f lessening the thrombus
dry w eigh t and w et w eigh t. Bo th L. F04 0. 408 and 0. 204 g /kg could inhibi t the th rombosis of ar tery-vein
side road, the inhibi tion rates are separately 27. 41% and 27. 14% . Conclusion　L . lucidus var. hirtus F04
could significantly inhibi t platelet ag g rega tion and th rombosis forma tion.
Key words: the g round part of Lycopus lucidus var. hirtus Reg. ; platelet agg rega tion; thrombosis
　　泽兰是唇形科植物毛叶地瓜儿苗 Lycopus lu-
cidus Turcz. v ar. hirtus Reg. 的干燥地上部分 ,是
常用的活血化瘀中药 ,其水煎剂能降低血液黏度、纤
维蛋白原含量、红细胞压积及缩短红细胞电泳时间、
减少红细胞聚集 [1 ] ,还有抑制血小板聚集、抗凝血和
血栓形成 [ 2]、改善微循环 [1 ]、调节血脂代谢 [3 ]等作
用。然而 ,国内外对泽兰有效部分及有效成分的药理
学研究比较少 [4, 5 ]。曾对泽兰的 4个提取部分 (乙醇
提取部分、水提取部分、乙醇提取物水溶性部分、 L.
F04)进行初步筛选 ,确定其有效部分为 L. F04 (用
CH2 Cl2-H2O分配后的中间层 ) [4 ]。 本实验旨在研究
L. F04对血小板聚集和体内、外血栓形成的影响 ,
并为进一步提取其有效成分 ,改进剂型 ,开发新药提
供理论基础。
1　材料
1. 1　动物: Wistar大鼠 ,雄性 ,由北京市海淀区通
利实验动物养殖场提供。
1. 2　试剂:二磷酸腺苷 ( ADP) ,北京普利生科贸集
团提供 ;戊巴比妥钠 ,化学纯 ,佛山市化工实验厂 ;枸
橼酸三钠 ,分析纯 ,北京化工厂 ;肝素钠 ,效价 150
U /mg ,北京鼎国技术发展中心产品 ;高分子右旋糖
酐 ( Dex tran500) ,瑞典 Pha rmacia Biotech公司。
1. 3　受试药品: 泽兰 L. F04提取部分 ,褐绿色粉
末 ,无味 , 4. 08 mg /g生药 ,用时加入 5% Tween-80
助溶 ,配成均匀的混悬液 ,由中国医学科学院药用植
物研究所植化室余竞光教授提供 ;阳性药复方丹参
片 (每片含丹参浸膏 0. 215 g、三七 0. 141 g、冰片
0. 008 g ) ,河北巨龙药业有限责任公司生产 ,规格:
4. 568 g /10片 ,批号 20000226。
1. 4　仪器: LBY— N J血液凝聚仪 ,北京普利生精密
仪器研究中心生产 ; XSN— RⅡ型体外血栓形成、血
小板黏附两用仪 ,无锡县电子仪器二厂生产 ; AE—
240电子天平 ,瑞士 Mett ler Toled公司生产。
2　方法
2. 1　动物分组及给药: 实验分两批进行 ,第 1批大
鼠体重 ( 180± 20) g , 50只 ,随机分为 5组 ,每组 10
只: 正常对照组与高分子右旋糖酐模型组 (以下简
称高右模型组 ) ig等体积蒸馏水 ; L. F04高、低剂量
组分别 ig L. F04 0. 408, 0. 204 g /kg;阳性药复方丹
参片组 ig复方丹参片 1. 175 g /kg ,每日 ig 1次 ,连
续 10 d。末次给药后 1 h,除正常对照组外 ,其余各
组大鼠由尾静脉快速推注 10% 高分子右旋糖酐
500 5 mL /kg。1 h后戊巴比妥钠 45 mg /kg ip麻醉 ,
颈总动脉取血 3 mL, 3. 8% 枸橼酸三钠 1∶ 9抗凝 ,
测血小板聚集率 ;取血 1. 8 mL,不抗凝 ,做体外血栓
形成实验。第 2批大鼠体重 240～ 260 g , 41只 ,随机
分为 4组 ,正常对照组 11只 ,其余各组 10只 ,不采
用高分子右旋糖酐造模 ,其余各组给药时间、方法及
剂量皆与第 1批相同。末次给药后 1 h做体内血栓
形成实验。
·924· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
2. 2　测量指标和方法
2. 2. 1　血小板聚集实验:比浊法。取血 3 mL, 1 000
r /min 离心 6 min, 吸取上 层富 血小板 血浆
( Platelet-rich-plasma , PRP)。 余下的血浆再以
3 000 r /min 离心 15 min,即得贫血小板血浆
( Pla telet-poo r-plasma, PPP)。以 PPP调 PRP使透
光度在 30左右 (血小板数 4× 108 /mL) ,取 200μL
PRP,加入磁棒 ,置仪器的恒温孔中 37℃ 预温 5
min,另取 200μL PPP备用。根据仪器提示 ,在测试
通道中插入 PPP,自动调零后 ,换入 PRP,在电磁搅
拌下 ,加入致聚剂 ADP (终浓度为 300μmol /L) 10
μL,观察药物对 ADP诱导血小板聚集功能的影响 ,
计算最大聚集率 [6 ]。
2. 2. 2　体外血栓形成实验:取血 1. 8 mL,迅速放入
内径为 4 mm的硅胶管中 ,在体外血栓形成仪上以
17 r /min 37℃ 下旋转 10 min,旋转完毕立即取下
圆环 ,倒出血栓 ,用滤纸吸去多余血液 ,直尺量血栓
长度 ,分析天平称血栓湿质量。 干燥箱 64℃ 烘烤
30 min,称血栓干质量 [6 ]。
2. 2. 3　体内血栓形成实验: 大鼠戊巴比妥钠 45
mg /kg ip麻醉 ,仰卧位固定于手术板上 ,分离右颈
总动脉和左颈外静脉 ,在 3段聚乙烯管中放一长 12
cm已称质量的手术丝线 ,肝素钠生理盐水 ( 50 U /
m L)充满聚乙烯管中 ,并按 50 U /mL注入静脉内 ,
连通动、静脉环路 ,开放循环后计时 15 min,中断血
流 ,迅速取出丝线称质量 ,减去丝线质量即为血栓湿
质量 ,同时计算血栓形成抑制率 [7 ]。
2. 3　数据处理: 实验结果用 x± s表示 ,用第四军医
大学卫生统计学教研室所编 SPLM 1. 0版中文统计
软件 ,用方差分析及 q检验进行统计分析。
3　结果
3. 1　对 ADP诱导的大鼠体内血小板聚集的影响:
高分子右旋糖酐静脉推注使 ADP诱导的大鼠体内
血小板最大聚集率显著增加 ,与正常对照组相比有
显著差异 ( P < 0. 01)。泽兰 L. F04高、低剂量均可
使最大聚集率明显下降 ,与高右模型组相比有显著
差异 (P < 0. 01) ,且 L. F04的作用存在量效关系。
阳性药复方丹参片也表现出良好的抑制血小板聚集
作用 ,见表 1。
表 1　 L. F04对 ADP诱导的大鼠体内
血小板聚集的影响 (x± s, n= 10)
Table 1　 Effect of L. F04 on platelet aggregation induced
by ADP in rats in vivo ( x± s , n= 10)
组　别 剂量
/ ( g· kg- 1)
血小板最大
聚集率 /%
血小板聚集
抑制率 /%
正常对照 - 　　 30. 92± 5. 028 -
高右模型 - 63. 30± 5. 477* * -
L. F04 0. 204 50. 52± 10. 237* * # # 20. 19
0. 408 41. 66± 7. 409* # # △ 34. 19
复方丹参片 1. 175 37. 84± 7. 469# # △△ 40. 22
　　与正常组比较: * P < 0. 05　 * * P < 0. 01; 与模型组比较:
# # P < 0. 01; 与 L. F04小剂量组比较: △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01
　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs normal con t rol g rou p; # # P < 0. 01
vs model group; △ P < 0. 05　△△ P < 0. 01 vs L. F04 low -dose g roup
3. 2　对血瘀大鼠体外血栓形成的影响:注射高分子
右旋糖酐所致血瘀证大鼠其血栓干质量、湿质量与
对照组相比都明显增加 (P < 0. 05) ,长度仅有增加
趋势 ,泽兰 L. F04有减轻血栓质量的作用 ,高剂量
组血栓干、湿质量与模型组相比有明显降低 ( P <
0. 01) ,低剂量组和复方丹参片组血栓湿重与模型组
相比差异显著 (P < 0. 05) ,见表 2。
3. 3　对大鼠体内血栓形成的影响: L. F04高、低剂
量组及阳性对照药复方丹参片组血栓湿质量与空白
对照组比较 ,明显减轻 ( P < 0. 05) ,表明 L. F04及
复方丹参片对体内血栓形成有明显的抑制作用 , L.
F04高、低剂量组间未显示出明显的量效关系 ,见
表 3。
4　讨论
　　从现代医学角度来看 ,中医的血瘀证与血栓形
成密切相关。而血小板在止血和血栓形成过程中起
关键性作用 ,血小板的黏附、聚集和释放是其在生理
条件下止血功能的基本条件 ,也是其在病理情况下
表 2　 L. F04对血瘀大鼠体外血栓形成的影响 (x± s )
Table 2　 Effect of L. F04 on thrombosis in blood stasis rats in vitro (x± s )
组　别 动物 /只 剂量 /( g· kg- 1 ) 血栓长度 /mm 血栓湿质量 /g 血栓干质量 /g
正常对照 8 - 117. 25± 20. 949 0. 356± 0. 148 0. 083± 0. 035
高右模型 10 - 137. 25± 10. 784 0. 566± 0. 127* 0. 145± 0. 037*
L. F04 10 0. 204 113. 90± 26. 379 0. 415± 0. 187# 0. 101± 0. 504
10 0. 408 105. 34± 25. 810 0. 274± 0. 121# # 0. 066± 0. 023# #
复方丹参片 10 1. 175 116. 85± 23. 788 0. 351± 0. 173# 0. 106± 0. 035
　　　　与正常对照组比较: * P < 0. 05; 与模型组比较: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
　　　　* P < 0. 05 vs normal cont rol g roup; # P < 0. 05　# # P < 0. 01 vs model g roup
·925·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
表 3　泽兰 L. F04对大鼠体内血栓形成的影响 (x± s)
Table 3　 Ef fect of L. F04 on thrombosis
in rats in v ivo (x± s )
组　别 动物 /只 剂量
/ ( g· k g- 1 )
血栓湿重
/g
血栓形成抑
制率 /%
正常对照 11 - 35. 82± 10. 88 -
L. F04 10 0. 204 26. 10± 9. 97* 27. 14
10 0. 408 26. 10± 7. 16* 27. 41
复方丹参片 10 1. 175 24. 40± 9. 90* 31. 88
　　与正常对照组比较: * P < 0. 05
　　* P < 0. 05 vs normal cont rol group
形成血栓的主要因素。观察泽兰 L. F04对血小板聚
集和血栓形成的影响 ,是研究其活血化瘀作用机制
的一个重要组成部分。 本实验结果表明 ,泽兰 L.
F04高、低剂量 ig给药对血瘀证大鼠 ADP诱导的
血小板聚集皆有显著的抑制作用 ,且呈剂量依赖关
系 ,与预期结果相一致 ,并为确定 L. F04为泽兰活
血化瘀作用的主要有效部分提供了进一步的证据。
本实验结果还表明 ,泽兰 L. F04 0. 408, 0. 204
g /kg均能有效地减轻血瘀大鼠体外血栓湿、干质量
及抑制大鼠体内血栓形成 ,其中高剂量组的抗血栓
作用尤为显著。研究证实泽兰 L. F04不仅可以抑制
血小板聚集 ,还通过阻抑凝血系统功能、减少血浆纤
维蛋白原含量来抑制血栓形成。同时 L. F04具有较
强的改善红细胞变形能力、抑制红细胞聚集、降低血
液黏度等特点 [5 ] ,说明 L. F04从多种途径、多种作
用环节干预血栓形成过程。其中抑制血小板聚集起
关键性作用。
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板蓝根中丁香酸的抗内毒素作用
刘云海 ,方建国 ,贡雪 ,谢　委
(华中科技大学同济医学院附属同济医院 ,湖北 武汉　 430030)
摘　要: 目的　研究从板蓝根中分离出的丁香酸的抗内毒素作用。方法　将丁香酸配成 1% 水溶液 ,鲎试验法做抗
内毒素定量测定 ;用内毒素致兔发热实验检测丁香酸体内抗内毒素作用 ;内毒素致小鼠死亡实验测定丁香酸保护
作用。结果　 0. 334 mg /m L丁香酸可使 4 EU内毒素降为 0. 777 EU ,破坏率为 83. 16% ; 1% 丁香酸溶液可使内毒
素引起的兔热显著降低 ;使同等剂量脂多糖引起的小鼠死亡率由 68% 降为 20%。结论　丁香酸有抗内毒素作用。
关键词: 丁香酸 ; 抗内毒素 ; 板蓝根
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0926 03
Anti-endotoxic effects of syringic acid inRadix Isatidis
LIU Yun-hai , FAN G Jiang-guo , GON G Xue-peng , XIE Wei
( Tong ji Hospital, Tong ji Medical Co lleg e, Hua zhong Univ ersity o f Science and Tech no lo gy , Wuhan 430030, China )
Abstract: Object　 To study the anti-endotoxic effect of syringic acid ( SA) w hich w as isola ted f rom
Radix Isatidis ( Banlangen in Chinese, BLG) . Methods　 SA was ex t racted and isolated f rom BLG and
made to 1% solution. The content of SA-pret reated ET w as quantitativ ely determined using Limulus
Test. Then the abili ty of fev er induction of endotoxin ( ET) pret reated w ith SA was measured using endo-
·926· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-10-11基金项目: 国家自然科学基金资助项目 ( 39870872) ; 卫生部科学研究基金资助项目 ( 98-2-110)作者简介: 刘云海 ( 1942— ) ,男 ,江苏如东人 ,主任药师 ,主要从事医院药学研究。 Tel: ( 027) 83649095　83624090
E-mail: liuyunhaitong ji@ Yahoo. com. cn