全 文 ：中草药 C h in e se T r a d itio n a l a n d H er b a l Dr u 罗 第 3 5 卷第 1 0 期 2 0 0 4 年 1 0 月 · 1 1 3 3 ·
1
·
5 m in ;载气 : N : ;检测器 : FI D 。 理论板数按正丁醇
峰计算应不低于 3 0 0。。
2
.
2 对 照品溶液 的制备 : 精 密吸取正 丁醇 19 3 . 。
拌L (1 5 6 · 2 5 m g )置 1 0 0 m L 量瓶 中 , 以 二甲基亚矾
溶解并稀释至刻度 , 摇匀 。 分别精密量取 4 . 0 m L 置
25 m L 量瓶中 , 以二 甲基亚矾稀释至刻度 , 摇匀 。 取
溶液 Z m L 置 10 m L 顶空瓶中 , 密封 。
2
.
3 供试品溶液的制备 : 取本品约 1 0 m g , 精密称
定 , 置 10 m L 顶空瓶 中 , 加二 甲基亚讽 2 m L , 密封 ,
加热使溶解 , 即得 。
2. 4 标 准曲线的制备 : 精密吸取正 丁醇 19 3 . 0 “L
( 1 5 6
·
2 5 m g ) 置 1 0 0 m L 量瓶 中 , 以二 甲基亚矾溶
解并稀 释至刻度 , 摇匀 。 分别 精密量取 0 . 1 、 0 . 4 、
0
·
8
、
4
·
0
、
8
.
0
、
1 6
.
0 m L 置 2 5 m L 量瓶 中 , 以二 甲基
亚矾稀释至刻度 , 摇匀 。按上述色谱条件及顶空进样
条件分别测定 , 记录峰面积值 。 以对照品溶液的质量
浓 度 (C )为横坐标 , 峰面积积分值 (A )为纵坐标 , 绘
制标准曲线 , 得 回归方程 : A 一 4 65 . 6 c 一 0 . 58 , : ~
0
·
9 9 9 9
。 结果表明 : 正丁醇在 0 · 0 0 6 2 5 ~ 1 · 0 m g /
m L 时 , 进样质量浓度与峰面积呈 良好的线性关系 。
2
.
5 空 白试验 : 取二甲基亚矾溶剂 2 m L , 按上述色
谱条件测定 ,在正丁醇处无峰 , 不干扰测定 。
2
.
6 最小检 出质量浓度 : 在上述色谱条件下 , 正丁
醇 的最小检 出质量浓度为 0. 0 06 25 m g / m L (为供
试品溶液质量浓度的 0 . 0 1 2 5 % ) 。
2
.
7 精密度试验 : 取 0 . 25 m g / m L 正丁醇对照品溶
液按上述色谱条件及顶空进样条件平行测定 6 次 ,
结果峰面积的 R SD 为 2 . 17 % 。
2
.
8 稳定性试验 :取供试品溶液于 。、 2 、 4 、 6 、 8 、 2 4 、
4 0 h 测 定 其 峰 面 积 值 , 结 果 峰 面 积 的 R S D 为
0
.
31 写 。 表明试验溶液在 40 h 内稳定性 良好 。
2
.
9 回收率 : 取批号为 0 2 0 7 2 6 样 品 1 0 0 m g , 6 份 ,
分别置 10 m L 顶空瓶 中 , 加人正丁醇对照品溶液 2
m L
, 密封 ,加热使溶解 。 取上述两种溶液分别测定 ,
以对照品溶液为对照 , 计算回收率 。结果平均回收率
为 1 0 0 . 7 % , R SD 为 1 . 7 9 % (n 一 6 ) 。
2. 10 样 品中正丁醇的残留量测定 : 取供试品溶液
Z m L 置 l o m L 顶空瓶 中 , 密封 , 1 0 0 ℃平衡 1 5 m in ,
取顶空气 1 m L 注人气相色谱仪 , 测定 , 结果见表 1 。
结果表明样 品中正丁醇残 留量很少 , 均低于《IC H 》
规定的小于 0 . 5 %的要求 。
表 1 心宁提取物中正丁醉残留 t 的测定结果 (n ~ 3)
T a b le 1 D e te r m in a tio n o f n
一
b u ta n o l r e s id u e s
in X in n in g e x tr a e t (n 一 3 )
批 号
0 2 0 7 2 2
0 2 0 7 2 4
0 2 0 7 2 6
正丁醇 / %
未检出 (。. 0 12 5 写以下 )
0
.
0 6 1
未检出 (0 . 01 2 5% 以下 )
3 讨论
本实验采用正丁醇萃取的方法制备 的心宁提取
物 , 总黄酮质量分数大 于 50 % , 通过顶空进样气相
色谱法测定正丁醇 的残留量 , 3 批样品结果均小 于
0. 5 %
, 符合《IC H 》的规定 , 证明工艺是可行 的 , 同时
也保证人用药的安全 。
H PL C 法对精制银翘解毒胶囊中连翘昔的定量分析
潘 莹 ‘ , 江海燕, , 卢忠朋 ’
(1
. 广西 区人民医院 药剂科 , 广西 南宁 5 3 0 0 2 1 ; 2 . 广西中医学院 , 广西 南宁 5 3 0 0 0 1)
精制银翘解毒胶囊是 由连翘 、金银花 、桔梗等药
味组成 。具有显著抗菌 、抗病毒 、抗炎 、镇痛 、散风 、退
热作用 , 对于流行性感冒 、头痛咳嗽 、咽喉疼痛 、温毒
发颈 、两腮赤肿具有很好疗效 。连翘昔是方 中主药连
翘的主要成分之一 , 具有较强抗菌作用和抗病毒作
用 , 并能抑制 C AM P 磷酸二醋的活性 。 连翘药材 中
的连 翘昔 含量测 定方法 有 薄层 扫描法 、 H P LC 法
等 仁‘一 3〕。 本实验采用 H PL C 法测定精制银翘解毒胶
囊 中连翘昔的含量 , 该方法灵敏 、准确 , 可作为精制
银翘解毒胶囊的质量标准 。
1 仪器与试药
日本 岛津 L C一10 A 液相色谱仪 , SPD一 SA 紫
外检测仪 , 岛津 C一R 10 A 数据处理机 。 连翘昔对照
品 (中国药品生物制品检定所提供 , 批号 : 7 0 9 一2 0 0 8 ,
榨馨是契:黔戮棍卜 ) , 女 , 主管药师 , 1 9 9。年毕业于广西中医学院药学专业 , 主要从事医院制剂与药理研究 。
.1 1 3 4
- 中草药 Ch in e s e T r a d itio n a l a n d H e rb a l D r u g s 第 3 5 卷第 1 0 期 2 0 0 4 年 1 0 月
纯度 98 % ) , 精制银翘解毒胶囊 (贵州金康制药有限
公 司 , 批号 : 2 0 0 2 0 3 2 5 、 2 0 0 2 0 4 1 6 5 、 2 0 0 2 0 5 2 3 ) , 所用
试剂均为色谱纯 , 纯净水 。
2 方法与结果
2
.
1 色 谱条 件 : S him 一P a e k C l: 柱 (1 5 0 m m X 4 · 8
m m
,
5 拜m ) , 流动相为 乙睛 一水 (25 : 7 5 ) , 测定波长
为 2 7 7 n m , 体积流量为 1 . 0 m L / m in , 柱温为室温 ,
进样量为 20 产L 。
2
.
2 对照品溶液的制备 : 精密称取连翘昔对照 品
1 0
.
2 3 m g
, 置 1 0 0 m L 量瓶中 , 加 5 0 %甲醇溶解并稀
释至刻度 , 摇匀 , 即得 。
2
.
3 供试品溶液的制备 : 取精制银翘解毒胶囊内容
物约 1. 0 9 , 精密称定 , 置 50 m L 量瓶 中 , 加甲醇适
量 , 超声处理 45 m in , 并加甲醇至刻度 , 滤过 , 精密
吸取续滤液 25 m L , 蒸干 , 加水 15 m L 加热使溶解 ,
置分液漏斗 中 , 用醋酸乙醋提取 5 次 , 合并醋酸 乙
醋 , 并蒸 发至近 干 , 加 中性 氧化 铝 0 . 5 9 拌匀 , 用
75 % 乙 醇 80 m L 洗脱 , 收集洗脱液 , 蒸千 , 残渣用
50 %甲醇后转移至 10 m L 量瓶 中 , 用 50 % 甲醇稀释
至刻度 , 摇匀 , 用 O , 45 “m 微 孔滤膜 滤过 , 取续 滤
液 , 即得 。
2
.
4 标准曲线的制备 : 分别吸取连翘昔对照品溶液
2
、
5
、
1 。、 1 5 、 20 拼L 进样 , 记录峰面积 。 以连翘昔的进
样 量伽 g )为横坐标 , 以相应的峰面积为纵坐标 , 回
归 得标 准 曲线 : Y 一 2 . 74 X 10 6 X + 0. 0 01 2 , r -
0
.
9 9 9 8
。结果 表明 , 连翘昔 的进样量 在 0 . 2 0 4 6一
2
.
04 6 拜g 与其峰面积呈 良好线性关系 。
2
.
5 阴性对照试验 : 按精制银翘解毒胶囊的处方量
下制备不含银翘药材 的阴性对照样品 , 按供试品溶
液的制备方法制备阴性对照溶液 , 吸取 20 拌L 进样 ,
按上述条件测定 , 结果表明 , 阴性样品中其他成分对
连翘昔色谱无干扰 。
2
.
6 精密度试验 :取同一供试品溶液和对照品溶液
2 0 拌L , 分别重复进样 5 次 , 测定连翘昔峰面积 , 结果
对照品和供试品的峰面积的 R S D 分别为 0 . 36 %和
1
.
12 % (n ~ 5 )
。
2
.
7 稳 定性 试 验 : 精 密 取供 试 品溶 液 (批 号 为
2 0 0 2 0 4 1 6 )
, 按上述色谱条件 , 间隔 Z h 进样 i 次 , 共
考察 12 h ,结果连翘昔峰面积在 12 h 内基本稳定不
变 , R S D 为 0 . 3 3 % 。
2
.
8 重现性试验 : 取本 品 (批号 : 2 0 0 2 0 4 1 6) 5 份按
供试品溶液制备方法制备 , 测定连翘
昔的含量 , 结果连翘昔 的质量分数为 。. 3 4 m g / g ,
R S D 为 1 . 3 2 % 。
2
.
9 回收率试验 : 采用加样 回收法 。 取已知含量的
样品 , 分别添加连翘昔对照品适量 ,按样品测定项下
方法测定连翘昔的含量 , 计算回收率 , 结果平均回收
率为 9 9 . 7 % , R S D 为 2 . 3 3 % 。
2
.
1 0 样品的测定 : 分别精取供试品溶液 20 拼L , 注
人色谱仪 , 按上述色谱条件测定 , 计算连翘昔的含
量 , 结果见表 1 , 色谱图见图 1 。
表 1 精制银翘解毒胶班中连翘普的测定结果 伽一 3)
T a b le 1 Fo r s yth in in R e fin e d Y in q ia o Ca p s u le (n = 3 )
批 号 连翘昔 /( m g · 粒 一 ’) R SD / %
2 0 0 2 0 3 2 5
2 0 0 2 0 4 1 6
2 0 0 2 0 5 2 3
0
.
6 3 6
0
.
7 0 1
0
.
6 6 9
l
。
3 6
1
.
3 7
1
.
3 2
时间 r / m in
* 一连翘昔
釜 一fo r s y thin
图 1 连翘普对照品 (A )、精制银知解毒胶班(B )和
缺连翘的阴性对照 (C )的 H P L C 图谱
Fig
·
1 H P LC e h r o m a to g ra m s o f fo r sy thin re fe re n e e
su b , ta n ee (A )
,
R e fin e d Yin q ia o C aPs u le (B )
,
a n d n e g a tiv e s a m Ple w ith o u t F川““5 Fo r sy -
thia e (C )
3 讨论
实验根据文献报道 [2j ,对不同的流动相如甲醇 -
水 、 乙睛一甲醇一水以及不同比例的乙睛一水系统进行
了比较 , 结果表 明 : 乙睛一水 (25 : 7 5) 时连翘昔峰形
对称 , 分离完全 。 阴性对照不干扰 。
采用上述方法提取精制银翘解毒胶囊 , 提取完
全 , 快捷稳定 、杂质对分离无干扰 , 选择性强 , 可为精
制银翘解毒胶囊的质量控制及含量测定提供可行的
方法 。
R e fe r e n e e s :
[ l〕 C h P (中国药典) [S〕. V o l 1 . 2 0 0 0 ·
〔幻 L I J , Ch e n Z , M a K . De t e r m in a t io n o f c o n te n t o f p hilly r in in
S h u a n g h u a n g lia n p r e p a r a tio n s by T L CS [J〕. Ch in ? ra dit p a t
几么d (中成药 ) , 1 9 9 9 , 2 1 (8 ) : 3 9 4 一3 9 5 .
〔3〕 Z ha n g w , Z h a n g H M , G a o M L . D e t e r m in a t io n o f fo r syth in
in F r u e tu s F o “y t h ia e a n d G a n m a o T u ir e G r a n u le by H PL C
[J〕. Ch in 7认理d it P a z M亡d (中成药 ) , 1 9 9 9 , 2 1 (3 ) : 4 5 2 一4 5 3 .