全 文 ：·1552- 中草药ChineseTradhionatandHerhalDrugs第36卷第10期2005年10月
菊花的HPLC指纹图谱研究
赵玉丛，，刘国际1，任保增1，屈凌波“”
(I．郑州大学化学系．河南郑州450002}2．安阳师范学院，河南安陌455002)
摘要：目的研究建立菊花HPLC指纹图谱分析法．评价不同品种不同来源菊花药材的质量。方法采用梯度洗
脱的方法进行色谱分离，用竞争层神经网络进行数据处理，对不同品种、不同来源的菊花样本进行模式识别。结果
建立了菊花的HPI．c指纹图谱分析方法。识别结果将菊花样本分为5类。鲭论利用菊花指纹图谱可对不同品种
不同来源的菊花药材进行鉴别，并可在一定程度上进行质量控制。
关键词：菊花lHPLC；指纹图谱}竞争层神经网络
中圈分粪号：R282．7 文献标识码：A 文章墒号z0253—2670(2005)10—1552一04
FingerprintofFlosChrysanthemibyHPLC
ZHAOYu—ton91，LIUGuo—jil，RENBao—zeng‘，QULing—bo“2
(1．DepartmentofChemistry，ZhengzhouUniversity．Zhengzhou450002，China；
2．AnynngNormalCollege，Anyang455002．China)
Abstract：ObjectiveToestablishtheanalyticalmethodf rthefingerprintofFlosChrysanthemiby
HPLCandestimatethequalityofPYosChrysanthemiinvariousspeciesfromdifferenthabitats．Methods
Thegradientelutionm dewasappliednchromatographicseparation，datacanbetreatedbycompetitive
layerneuralnetwork(NN)andpatterrecognitionbemadeforFlosChrysanthemisamplesofvarious
speciesfromdifferenthabitats，ResultsTheanalyticalmethodOffingerprintforFloschrysanthemiby
HPLCwasestablished，samplescanbeclassifiedintofivecategoriesaccordingtotherecognitionresult．
ConclusionThestablishedfingerprintcanbeusedfortheidentificationandqualitycontrolofFlos
Chrysanthemi．
Keywords：FlosChrysanthemilHPLC；fingerprint；competitive【ayerneuralne work
菊花为菊科多年生草本植物菊Chrysanthemum
morifoliumRamat．的头状花序，具有疏风清热、平
肝明目的功效，其主要成分为黄酮类、挥发油、氨基
酸、微量元素等。菊花总黄酮具有降血压、扩张冠状
动脉、防止冠脉粥样硬化等作用，其中木犀草素及其
苷类以及芹菜素具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤及扩张血
管等药理作用“。]。目前对菊花的研究多集中在某
单一有效成分的提取和测定上，而中医药理论强调
中药所含的某一种活性成分均不能代表其整体的疗
效。本实验采用HPLC法建立了菊花的指纹图谱，
并用竞争层(competitivelayer)神经网络对不同来
源的菊花样本进行模式识别，为菊花药材的品种鉴
定和质量控制提供科学依据。
1仪器与试药
Agilent1100毫效渡相色谱系统，DAD检测
器，Agilent色谱工作站；R201旋转蒸发器(上海申
生科技有限公司)；KQ一50型超声波清洗器(昆山
市淀山湖检测仪器厂)；索氏提取装置；MATLAB
6．5处理软件。
甲醇为色谱纯l水为二次重蒸水；其他试剂均为
分析纯；木犀草素、芹菜素对照品购于中国药品生物
制品检定所；菊花样品来源见表1，均经河南中医学
院生药教研室鉴定。样品置烘箱内50～60c干燥2
h，粉碎后过40目筛备用。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：ZorbaxSBC．。柱
(200mmx4．6mm，5pm)。流动相：A为甲醇一水
(15：85)、B为甲醇一水(52：48)，从A到B进行30
min线性梯度洗脱，然后在B流动相条件下保持30
rain。体积流量：0．7mL／min；柱温：25℃；进样量：
将鼹嚣望鬓苗1_)’女．河南巩义人，郑州大学化学系研究生．主要从事药物分析方面的研究
。通讯作者屈凌波E—mail：qulingbo@zzu．educn
万方数据
中草药Chinese’rraditionalandHerbalDrugs第36卷第】0期20D5年10月·1553·
lo“I。；分析时间：60min；检测波长：350D．m。在上述
色谱条件下杭菊花色谱指纹图见图1。
囊1菊花样品来源
Table1 SourceofFlosChrysantkemisamples
编号 品种 产地或来源 编号 品种 产地或来源
1 杭菊 斯扛杭州 9 贡菊 黄Jj』
2 杭菊 扛苏 10 贡菊 河南
3 杭菊 广西 ll 贡菊 黄山
4 杭菊 广西 12 药菊 黄山
5 杭菊 新江杭州 13 怀菊 河南
6 杭菊 浙江桐乡 14 野菊花 河南
7 金菊 黄山 15 野菊花 东莞
8 盒菊 瑚北 16 野金菊 黄山
¨ i【J 』¨ j¨40，¨ 洲⋯tn
18-术犀草隶19一芹菜素
18[uteMin19apigenin
圈l杭菊花的HPLC指纹圈谱
Fig．1HPLCFingerprintofFlosChrysanthemi
fromHangzhou
2．2样品溶液的制备：取各药材样品2．003g置圆
底烧瓶中，加95％乙醇40ml。，回流提取2次，每次
2h，合并提取液，滤过，挥于乙醇，加水溶解，再用
80mI，醋酸乙酯分4次萃取，挥干醋酸乙酯，用甲醇
溶解，定容至50mL量瓶中，经0．45pm微孔滤膜
滤过，取续滤液即得。
2．3对照品溶液的制备：精密称取木樨草素、芹菜
素对照品适量，分别用甲醇溶解定容，得对照品溶
液，浓度分别为木犀草素0．0006 mol／L，芹菜素
0．002mol／I。。
2．4色谱指纹峰的标定：以参照物木犀草素对应的
色谱峰的保留时间和峰面积为1。计算其他各色谱
指纹峰的相对保留时间及相对峰面积。
2．5精密度试验：取同一菊花样品溶液，连续进样
5次，按上述条件进行检测。各主要色谱峰的相对保
留时间和相对峰面积的RSD分别为0．1％～o．8％
和1．5％～2．8％。
2．6重现性试验：取同一菊花样品，分别制备5份
样品溶液进行检测，各主要色谱峰的相对保留时间
和相对峰面积的RSD分别为0．2％～1．1％和
2．2％～4．2％。
2．7稳定性试验；取同一份菊花药材的供试品溶液
在o、4、6、12、24h按上述条件进行检测，各主要色
谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为
0．1％～2．5％和1．7％～3．7％。
2．8样品测定：按供试品溶液的制备方法，在上述
色谱条件下对16个菊花样品进行测定，各样品的相
对保留时间见表2，相对峰面积见表3。
裹2 16个菊花样品的相对保留肘间
Table2 Relativeretentionmeof16smplesofFIosChrysanthemi
样品号
各峰相对保留时间
o．0630．086 0．196 0 3740 3950 4550．5560 6640 7320．7580．949 1．900
0．0630 085 0195 0 3750 3970 4550．5560．6610．7310．7560 9501-000
0．0640，087 0．1980．233 0 3760 3970．4580．5580．6630．7310．1560 949】．ODD
0．0660 085 0．184 0．3710．3930．4540．5550 6620．7380．758u 949i．000
0 0700 082 0．2060 225 0 4080 4440，5740．6680．7340．7590 9501．000
0．0660．086 0．143O．203O．23 O．264O 2930．381札421O．463o．565机657O 752O 7560．949LO∞1．071
0 0650，084 0 2080 Z37 0 30Z 0．3920．472 0．6640 7310 7560．960I．000
0．0620．086 n1840．228 0．286O 3720 4020．4550．5570．6590 730．7560．949i．000
0 0630．087 0 1560 1920．228 0 3690 3880 4520 5530 6600．7310．757 1 000
0，D6B0，086 0．1470．2040 Z340．269 0．3930．d330．4730 5860 6S40．7280 758 1．000
O．0640 087 o 1850．288 0 3690 3890 4530．5550．6590．7320．757 1 000
0．0680．0860．110 0．1990 231 0．370O．3910．4550．560O，6630．7330．75B 1．000 1．230
0．0660．086 0 1 5 0．2020．239 0．4060．4460．6070．6570 7300．7540 9491 O舭) 1．240
0．072 O．248 0．6670．729n753o．9481。000
0 0670 OB6 0 668D．7330 759O 9501 000
0．0650．086 0．154 0．7320．7550 9501．0001．101
万方数据
·1554· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月
衰3 16个菊花样品的相对峰面积
Table3 Relativepeakareaof16samplesofFlosChrysanthemi
2．9信息处理：用竞争层神经网络在MATI，AB平
台对所得的色谱信息进行处理，竞争层神经网络为
单层网络，网络传递函数为竞争函数。对于本实验所
采用的竞争层网络，相关函数如下：权值函数为
negdist。输入函数为netsum函数，传递函数为corn—
pet函数，网络用train函数训练，输入相对保留对阈
和相对峰面积值(数据经过适当处理)，结果分为5
类：1～5号样品为一类；6号样品为一类；7、8、12、13
号样品为一类；9～11号、16号样品为一类；14、15号
样品为一类。
3讨论
3．1 本实验以木犀草素对照品的最大吸收波长
350、254om为指标进行检测渡长的考察，结果发现
254nm处的色谱图中基线漂移较大，且峰数少，故
为获取更多信息，选取350nm作为菊花指纹图谱的
检测波长。同时进行了乙醇回漉提取、乙醇回流提
取一醋酸乙酯萃取、超声波提取、酸解提取、索氏提取
等提取方法的考察，结果表明乙醇回流提取一醋酸乙
酯萃取法所得色谱图中色谱峰峰数较多、峰分离比
较好、且主峰强度较高，所以选取乙醇回流提取一醋
酸乙酯萃取法来制备样品溶液。
3．2建立了菊花药材指纹图谱的HPLC测定法，该
方法能使菊花提取液中的大部分化学成分得到较好
分离，具有很好的稳定性、重现性和可行性。其中木
犀草素和芹菜素已确证为菊花中的药效成分，但由
于对照品的匮乏，无法判定菊花样品图1中1～l7
号各峰所代表的物质成分，尚需进行进一步的研究。
3．3杭菊酸水解后仅有木犀草素和芹菜素两个主
要色谱峰，且它们的量远远高于末水解时，表明杭菊
中黄酮类成分主要为以木犀草素和芹菜素为苷元的
黄酮苷类化合物，酸解后黄酮苷类化合物发生分解，
从而形成游离的苷元。
3．4竞争层神经网络在样本类别大致可知的情况
下，可以无须学习样本即可对数据进行分类，在样卒
量不是太多的情况下较为适用。接HPLC色谱峰相
对保留时间和相对峰面积，用competitivelayer神经
网络可将样品分为5类；即1～5号杭菊为1类．6号
杭菊为一类，贡菊、野金菊为一类，药菊、怀菊与金菊
为一类，野菊花为一类，与实际样本基本一致。因此
用competitivelayer神经网络可以对菊花药材的种
类进行模式识别，从雨为菊花资源的开发利用提供
科学依据。
3．5不同品种的菊花指纹图谱差异较为明显，同一
品种的菊花指纹图的整体概貌是一致的，但各色谱
峰的强度有差异。药菊，怀菊的色谱图相似，这与文
献报道药菊可能起源于河南的怀菊“3是一致的；且
二者色谱图中备色谱峰均较强，尤其木犀草素和芹
菜素的量在这几个菊花品种中为最高，这为临床上
药菊、怀菊主要药用，而杭菊、贡菊为药茶兼用提供
了依据。金菊花是菊科植物神农香菊与菊花的杂交
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年io月·1555·
新品种“1，从模式识别结果上可以推测金菊花与怀
菊、药菊有较类似的药理作用。但尚需进一步的实验
来论证。
References3
[1]Hel．N．HeSB．YangJ Invitroanti—coxsackieB virus[J]
ChinJModApplPharm(中国现lt应用药学)，2000，17(5)}
562—363．
[2]ChanEC，PannangpetehP．WoodmanOI，．Relaxationto
flavonesandflavonolsjDratisolatedthora㈣icona!mecha
nismofactiona dstructureactivityrelationships[J]．Car-
diWasePha㈣ot，2000，35(2)；326—329
r31YuaaLH，WuK．Advancesiustudies㈣autitu州activity
ofapigenia[J]．Chin．，PublicHealth(中国公共卫生)，
2004，20(2)：241-242
[4]PengSP，1．iJ，LuJQ．StudyOnextraclingtechnologyoftO
taIextractionandtotalf avonei DendranthemntHo}i)blium
Tzvelwithotthogo叫designEli．JHuheiCollTraditChin
Med(湖北中医学院学报)，2002，4(2)：29．
红大戟的组织培养及植株再生
凌征柱1，覃文流2，余丽莹1，蓝祖栽1，昊庆华1
(1．广西药用植物园，广西南宁530023}2．广西大学．广西南宁530005)
摘要：目的研究红大觏快速繁殖技术．为人工栽培提供种源。方法 以野生红大戟的茎尖作外植体，通过不同
的培养基进行诱导培养获得丛生芽，进而生根获得再生植株。结果MS+BA2．0rag／L+NAA0．1rag／l。适合红
大戟的丛生芽继代增殖。1／2MS+NAA1．0mg／L适宜诱导生根获得健全再生植株。移栽成活率70％。结论本
研究得出的方法可为人工栽培红大戡提供种源。
关键词t红大戟；组织培养；试管苗
中囤分类号：R282．1 文献标识码，A 文章编号：0253—2670(2005)10一1555一03
TissuecultureandplantletregenerationofKn xiavalerianoides
I，INGZheng—zhu‘，QINWen—liu2，YULi—yin91，LANZuzail，WUQing—hual
(1．GuangxiBotanicalGardenofMedicinalPl nts，Nanning530023，China；2．GuangxiUniversity．Nanning530005，China)
Abstract；ObjectiveThetissuecultureofthestemapexofKnoxiavalerianoideswasonetore—
searchtheoptimumculturemediumfortest—tubese dlingsforlarge—scaleplanting．MethodsThestem
apexofwildK．valerianoideswasus dflSthexplantsandcultivatedindifferentcul uremediaseparately
toinducefascicledbud．root，andpla tletr generation．ResultsThculturalmediumMS+BA2．0mg／
I，+NAA0．1mg／1．wassuitableforthesub—multiplicationoffasc cledbuandthemedium1／2MS+NAA
1．0mg／Lforootinducementandtheplantletregeneration．Thetransplantati。nsurvivalrateoftheplant—
letregenerationwas70％．ConclusionThetissuecultureofK．valerianoidescoulbeu edtoproduce
test—tubese dlingsforlarge—scaleplanting．
Keywords：KnoxiavalerianoidesThoreltPitard；tissuecult re；test—tubeeedling
红大戟Kno：Hav lerianoidesThoreltPitard
为茜草科多年生草本植物，又名红芽大戟、红芽戟。
药用部位块根，有泻水逐饮，攻毒消肿散结功效。主
治胸腹积水、二便不利、痈肿疮毒、瘰疬痰核。]，是中
成药紫金锭的主药。由于自然繁殖缓慢，以及滥采乱
挖，致使野生资源濒临灭绝。20世纪90年代初单是
广西产地上市为3X104kg以上，到了2000年上市
不足L5×104kg，ifij今不足5000kg，致使价格不
断攀升。1999年50～55元／kg，2000年升至60～65
元／kg，2001年升至70元／kg，2002年80元／kg，
2003年升到90元／kg，2004年上半年已升至
125元／kg口。。20世纪80年代后虽然已开展人工栽
鉴鐾品智：挈蔷硅饔翟怕区科技厅科技攻关项目(0322024-3A)
作者简介：T凌e征l：柱(07(7119)553602)7’男92’广西桂平市人·嗣!J研究员’碗士生导师从事荮用植物组织培养及引种驯化研究工作
万方数据
菊花的HPLC指纹图谱研究
作者： 赵玉丛， 刘国际， 任保增， 屈凌波， ZHAO Yu-cong， LIU Guo-ji， REN Bao-zeng，
QU Ling-bo
作者单位： 赵玉丛,刘国际,任保增,ZHAO Yu-cong,LIU Guo-ji,REN Bao-zeng(郑州大学,化学系,河南
,郑州,450002)， 屈凌波,QU Ling-bo(郑州大学,化学系,河南,郑州,450002;安阳师范学院
,河南,安阳,455002)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(10)

参考文献(4条)
1.He L N;He S B;Yang J In vitro anti-coxsackie B3 virus[期刊论文]-中国现代应用药学 2000(05)
2.Chan E C;Pannangpetch P;Woodman O L Relaxation to flavones and flavonols in rat isolated thoracic
aorta:mechanism of action and structure-activity relationships 2000(02)
3.Yuan L H;Wu K Advances in studies on anti-tumor activity of apigenin[期刊论文]-中国公共卫生
2004(02)
4.Peng S P;Li J;Lu J Q Study on extracting technology of total extraction and total flavone in
Dendranthema morifolium Tzvel with orthogonal design[期刊论文]-湖北中医学院学报 2002(02)

本文读者也读过(9条)
1. 蒋惠娣.胡碧波.曾苏.JIANG Hui-di.HU Bi-bo.ZENG Su 杭白菊HPLC指纹图谱的评价[期刊论文]-中国药学杂志
2005,40(8)
2. 刘伟.邢志霞.陈志红.王东.LIU Wei.XING Zhi-xia.CHEN Zhi-hong.WANG Dong 怀菊花挥发性成分的GC指纹图谱
研究[期刊论文]-中草药2007,38(8)
3. 刘婷娜.朱恩圆.侴桂新.王峥涛.LIU Tin-gna.ZHU En-yuan.CHOU Gui-xin.WANG Zheng-tao 野菊花高效液相色
谱指纹图谱及质量评价方法的建立[期刊论文]-时珍国医国药2009,20(4)
4. 叶皓.沈顺.张祥民.YE Hao.SHEN Shun.ZHANG Xiangmin 液相指纹图谱结合欧氏距离对野菊花质量控制的研究
[期刊论文]-世界科技研究与发展2006,28(2)
5. 程宏英.冯启余.曹玉华.龚立冬.侯建霞.汪云 菊花中活性成分的高效液相色谱测定与指纹图谱研究[期刊论文]-
分析科学学报2007,23(3)
6. 李晓波.谭晓杰.贾英.程维明.陈晓辉.毕开顺.LI Xiao-bo.TAN Xiao-jie.JIA Ying.CHENG Wei-ming.GHEN
Xiao-hui.BI Kai-shun 野菊花注射液的GC指纹图谱[期刊论文]-沈阳药科大学学报2007,24(9)
7. 郑晓珂.魏悦.冯卫生.ZHENG Xiao-ke.WEI Yue.FENG Wei-sheng 化学模式识别分析不同采收期金银花HPLC指纹
图谱[期刊论文]-中药材2007,30(10)
8. 曹杨 金菊花化学成分与指纹图谱研究[学位论文]2006
9. 肖波 神农香菊化学成分及指纹图谱研究[学位论文]2008


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200510044.aspx