全 文 ：刺五加片指纹谱分析方法及不同厂家样品谱比较
苗爱东 ,彭　燕 ,胡　辉 ,王本富 ,马　超 ,何二龙
(中国人民解放军第 474医院 ,新疆 乌鲁木齐　 830011)
摘　要: 目的　对 5个不同厂家生产的 9批刺五加片进行指纹谱的比较研究。 方法　以 5个不同厂家生产的刺五
加片为分析对象 ,选择适宜的条件 ,建立了刺五加片剂的指纹图谱。 结果　方法学考察表明 ,本研究建立的分析方
法有比较好的重现性 ;不同厂家生产的刺五加片共有峰面积的比值有一定的差异。结论　指纹谱分析方法可简便、
快速的鉴别和区分不同厂家生产的刺五加片剂。
关键词: 刺五加片 ; HPLC-FPS; HPLC
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 03 0218 03
HPLC-FPS analysis of Ciwujia Tablets and comparison of its different sources
M IAO Ai-dong , PENG Yan, HU Hui , WANG Ben-fu, M A Chao, HE Er-long
( PLA 474 Hospital, U rumqi 830011, China )
Abstract: Object　 To compare HPLC-FPS of fiv e kinds of Ciw ujia Tablets ( CWT) in nine ba tches
f rom fiv e dif ferent sources. Methods　 HPLC-FPS analysis method of CWT was developed, and the
HPLC-FPS of nine samples was established. Results　 The methodo logical ev aluation show ed that this
method had a good repeatabili ty, and the ratio o f common peak area fo r di fferent samples w as dif ferent.
Conclusion　 This method can be used to differentiate CW T from di fferent sources convenient ly.
Key words: Ciw ujia Tablet; HPLC-FPS; HPLC
　　刺五加片是由五加科植物刺五加 Acanthopanax
senticosus ( Rupr. et Maxim. ) Ha rms提取加工精制
而成 ,具有益气健脾 ,补肾安神作用。临床上主要用于
治疗脾肾阳虚 ,体虚乏力 ,食欲不振 ,腰膝酸痛 ,失眠
多梦等症。 刺五加片剂属《中华人民共和国药典》
2000年版一部收载品种。刺五加的主要活性成分为
刺五加苷 A, B, B1 , C, D, E, F, G等。 本实验采用反
相高效液相色谱法 ,梯度洗脱 ,对市售的刺五加片的
指纹图谱进行了研究 ,以期为进一步完善该制剂的
质量控制标准提供实验依据。
1　仪器、试剂和样品
L-7000型高效液相色谱仪 ,包括 L-7100双泵 ,
L-7400紫外可见检测器 , L-7300柱温箱 (日本日立
公司 ) ; HW-2000色谱工作站 (南京千谱软件有限公
司 ): CSF-250-3超声波清洗器 (济宁超声电子仪器
厂 ) ; TDL-4型离心机 (上海安亭科学仪器厂 )。
　　乙腈、甲醇为色谱纯 ,其余试剂为分析纯。
　　紫丁香苷 ( syringin)对照品 (美国阿尔法实验
室 ,纯度 99. 5% );刺五加对照药材 (中国药品生物
制品检定所 ) ;刺五加片 (市售 ,黑龙江南岔制药厂 ,
批号: 20000106, 20000702;黑龙江铁力制药厂 ,批
号: 20000726, 20001023, 20010618, 20010711;上海
信谊制药厂 ,批号: E010101;安徽东方制药厂 ,批
号: 000803;安徽广生制药有限公司 ,批号: 010907)。
2　方法与结果
2. 1　溶液的制备
2. 1. 1　对照品溶液的制备:精密称取紫丁香苷对照
品适量 ,以甲醇溶解 ,制成 0. 02 mg /m L的溶液 ,作
为对照品溶液。
2. 1. 2　刺五加对照药材溶液制备:精密称取刺五加
对照药材 1. 0 g ,置具塞锥形瓶中 ,加 75%乙醇 100
mL,放置 24 h,滤过 ,滤液浓缩后移至 10 mL量瓶
中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 ,离心 ( 3 000 r /min) 10
min,吸取上清液 , 0. 45μm微孔滤膜过滤后 , 20μL
进样测定。
2. 1. 3　供试样品溶液制备: 取样品 10片 ,除去糖
衣 ,精密称定后 ,研细 ,精密称取适量 (约 0. 2 g )置
10 mL量瓶中 ,加适量水 ,超声处理 30 min,加水至
刻度 ,摇匀。 离心 ( 3 000 r /min) 10 min,吸取上清
液 , 0. 45μm微孔滤膜过滤后 , 20μL进样测定。
·218· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-06-17作者简介:苗爱东 ( 1969— ) ,男 ,四川自贡人 ,副主任药师 ,博士 ,主要从事药物分析及质量标准研究工作 ,在省级以上刊物发表论文 30余篇 ,其中 20余篇论文被《美国化学文摘》收录。 Tel: ( 0991) 6632883
2. 2　不同流动相系统及检测波长的选择: 吸取上述
样品 20μL进样 ,分别以乙腈 -磷酸、乙腈 -水、乙腈 -
醋酸、甲醇-磷酸、甲醇-水、甲醇-醋酸的不同浓度、
比例的等度和梯度洗脱进行试验 ,记录 220, 254,
270, 300, 344, 360 nm波长的色谱图。 结果表明:用
甲醇-1%醋酸进行梯度洗脱 ( 0→ 60 min, 1%醋酸
100%～ 35% ) ,流速为 1 mL /min,测定波长 270 nm
的条件为佳 ,见图 1。
2. 3　指纹图谱的建立
2. 3. 1　色谱条件及系统适应性试验:色谱柱为钻石
C18 ( 4. 6 mm× 250 mm , 5μm) (北京迪马公司 ) ;甲
醇 -1%醋酸为流动相进行梯度洗脱。 检测波长为
270 nm ,理论塔板数按紫丁香苷峰计算应不低于
30 000。
2. 3. 2　测定方法:分别精密称取对照品溶液和供试
溶液各 20μL,注入液相色谱仪 ,记录 60 min内的色
谱图。 以紫丁香苷色谱峰 ( S峰 )的保留时间和峰面
积为 1. 0,计算相对保留时间和峰面积比值。
2. 3. 3　方法学考察 [ 1, 2]:稳定性试验:取同一供试品
溶液 ,分别在 0, 2, 4, 8, 24 h检测指纹图谱。 其相对
保留时间稳定 ,主要共有色谱峰相对峰面积 RSD
为 1. 86%。 结果表明 ,供试品溶液稳定性较好。
　　精密度试验: 取同一供试品溶液 ,连续进样 5
次 ,检测指纹图谱。 其相对保留时间稳定 ,主要共有
色谱峰相对峰面积 RSD为 1. 42%。结果表明 ,精密
度较好。
　　重现性试验:取同一批号供试品 5份 ,分别处理
后检测指纹图谱。其相对保留时间稳定 ,主要共有色
谱峰相对峰面积 RSD为 2. 16% 。结果表明 ,重现性
较好。
2. 4　不同生产厂家刺五加片指纹谱比较:按供试品
溶液的制备方法制备 ,分别取 5个不同厂家生产的
9个批次刺五加片制成供试品溶液。取 20μL进样 ,
按选定的色谱条件测定 ,记录指纹图谱 (图 1)。以紫
丁香苷为对照品 ,其相对保留时间为 1. 0,标示了刺
五加片指纹图谱中 17个共有峰 ,其相对保留时间和
主要共有峰的相对峰面积列于表 1, 2。
　　结果表明 , 5个生产厂家刺五加片 HPLC指纹
图 1　刺五加对照药材 ( A)和刺五加片 (B)的指纹图谱
Fig. 1　 HPLC f ingerprints of Ciwuj ia crude drug (A) and Ciwujia Tablet (B)
表 1　刺五加片剂指纹图谱共有峰相对保留时间
Table 1　 Relat ive retention times of common peaks
for nine batches of Ciwujia Tablet
峰号 000106 000702 000726 00080 3 001023 010101 010618 010711 010907 均值
1 0. 269 0. 268 0. 269 0. 270 0. 270 0. 268 0. 270 0. 271 0. 276 0. 270
2 0. 305 0. 306 0. 306 0. 306 0. 306 0. 305 0. 306 0. 307 0. 312 0. 307
3 0. 328 0. 328 0. 328 0. 328 0. 329 0. 327 0. 329 0. 328 0. 334 0. 329
4 0. 435 0. 434 0. 435 0. 435 0. 436 0. 432 0. 436 0. 437 0. 424 0. 434
5 0. 528 0. 529 0. 529 0. 528 0. 528 0. 527 0. 526 0. 527 0. 531 0. 528
6 0. 584 0. 584 0. 585 0. 585 0. 584 0. 583 0. 584 0. 584 0. 585 0. 584
7 0. 655 0. 655 0. 656 0. 656 0. 656 0. 655 0. 655 0. 655 0. 657 0. 655
8 0. 675 0. 676 0. 676 0. 676 0. 676 0. 675 0. 676 0. 675 0. 676 0. 676
9 0. 692 0. 691 0. 691 0. 692 0. 693 0. 691 0. 692 0. 691 0. 692 0. 692
10 0. 713 0. 713 0. 712 0. 713 0. 713 0. 711 0. 712 0. 712 0. 713 0. 712
11 0. 832 0. 830 0. 824 0. 832 0. 830 0. 830 0. 830 0. 830 0. 829 0. 830
12 0. 878 0. 878 0. 878 0. 879 0. 878 0. 878 0. 879 0. 877 0. 878 0. 878
13 ( S) 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000
14 1. 082 1. 080 1. 083 1. 081 1. 081 1. 080 1. 080 1. 080 1. 080 1. 081
15 1. 145 1. 143 1. 145 1. 142 1. 143 1. 142 1. 142 1. 141 1. 142 1. 143
16 1. 379 1. 378 1. 378 1. 376 1. 378 1. 377 1. 377 1. 378 1. 377 1. 378
17 1. 454 1. 454 1. 451 1. 450 1. 453 1. 452 1. 446 1. 449 1. 447 1. 451
表 2　刺五加片剂指纹图谱共有峰的相对峰面积值
Table 2　 Relative areas of common peaks for nine
batches of Ciwuj ia Tablet
峰号 000106 000702 000726 000803 001023 010101 010618 010711 010907 均值
1 0. 064 0. 070 0. 100 0. 081 0. 113 0. 084 0. 068 0. 079 0. 066 0. 081
2 0. 248 0. 371 0. 224 0. 156 0. 274 0. 222 0. 154 0. 186 0. 215 0. 228
3 0. 109 0. 095 0. 118 0. 171 0. 179 0. 125 0. 147 0. 141 0. 116 0. 133
4 0. 140 0. 155 0. 110 0. 255 0. 193 0. 150 0. 099 0. 142 0. 327 0. 175
5 0. 269 0. 246 0. 218 0. 410 0. 906 0. 161 0. 266 0. 373 0. 378 0. 358
6 0. 175 0. 420 0. 241 0. 109 0. 318 0. 260 0. 142 0. 172 0. 184 0. 224
7 1. 052 0. 740 0. 237 0. 799 0. 808 0. 714 0. 504 0. 463 0. 656 0. 664
8 0. 220 0. 234 0. 158 0. 234 0. 267 0. 245 0. 229 0. 244 0. 256 0. 232
9 0. 085 0. 110 0. 073 0. 076 0. 101 0. 072 0. 062 0. 074 0. 083 0. 082
10 0. 256 0. 445 0. 234 0. 236 0. 435 0. 365 0. 295 0. 350 0. 399 0. 335
11 0. 086 0. 111 0. 153 0. 072 0. 129 0. 112 0. 105 0. 122 0. 103 0. 110
12 0. 125 0. 110 0. 079 0. 091 0. 138 0. 089 0. 093 0. 099 0. 107 0. 103
13 ( S) 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000
14 0. 119 0. 144 0. 085 0. 099 0. 145 0. 102 0. 111 0. 107 0. 169 0. 120
15 0. 167 0. 087 0. 046 0. 089 0. 205 0. 076 0. 100 0. 081 0. 135 0. 110
16 0. 136 0. 124 0. 096 0. 075 0. 108 0. 102 0. 070 0. 116 0. 144 0. 108
17 0. 223 0. 138 0. 059 0. 154 0. 147 0. 165 0. 0810 0. 103 0. 126 0. 133
·219·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
图谱存在一定的差异 ,其共有峰相对保留时间基本
一致 ,相对峰面积比值存在一定的差异 ,可用来鉴别
和区分不同厂家生产的刺五加片。
2. 5　结论:根据研究结果 ,制定了刺五加片剂标准
指纹图谱技术参数 ,其共有峰的峰号 (相对保留时
间 ): 1 ( 0. 270) , 2( 0. 307) , 3 ( 0. 329) , 4( 0. 434) , 5
( 0. 528) , 6( 0. 584) , 7( 0. 655) , 8( 0. 676) , 9( 0. 692) ,
10( 0. 712) , 11( 0. 830) , 12 ( 0. 878) , 13( 1. 000) , 14
( 1. 081) , 15( 1. 143) , 16( 1. 378) , 17( 1. 451)。
3　讨论
3. 1　文献研究了不同产地刺五加药材的指纹图
谱 [3 ] ,流动相采用了甲醇 -水-冰醋酸 ( 15∶ 85∶ 1)等
度洗脱。研究中发现:由于刺五加中含有较多的化学
成分 ,流动相若采用等度洗脱 ,当提高流动相的洗脱
能力时 ,则可出现较多的色谱峰 ,提供较多的信息 ,
但有很多峰不能完全分离 ;当降低流动相的洗脱能
力时 ,虽可改善峰的分离情况 ,但有部分成分不能被
洗脱出峰 ,信息量减少。采用梯度洗脱 ,可兼得二者
的优点。各成分之间分离情况良好 ,因此本实验采用
了甲醇 -1% 醋酸梯度洗脱 ( 0→ 6 0min 1% 醋酸
100% ～ 35% )的方法。
3. 2　刺五加对照药材与其片剂的指纹图谱比较显
示 ,药材的成分比片剂更复杂 ,但片剂特征峰与药材
特征峰基本一致 ,相关性良好。
3. 3　试验结果显示: 5个不同生产厂家刺五加片指
纹图谱中主要峰群的整体图貌基本一致。但各成分
含量的相对比值有所不同 ,为鉴别、区分不同来源的
刺五加片提供了科学依据。
3. 4　建立指纹图谱对刺五加片进行综合、宏观的分
析有利于全面控制该制剂的质量 ,促进刺五加制剂
质量控制水平的提高。
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化瘀巴布膏体外透皮吸收研究
寿　旦 ,孙静芸
(浙江大学药学院 ,浙江 杭州　 310006)
摘　要: 目的　研究促透皮吸收剂氮酮对化瘀巴布膏体外透皮吸收的影响。方法　采用改良 Franz扩散池法 ,研究
化瘀巴布膏中胡椒碱的体外透皮吸收特性 ,采用高效液相色谱法检测透过的胡椒碱 ,同时采用气相色谱法 ,以丁香
酚为检测指标考察制剂稳定性。结果　经统计学分析 ,胡椒碱的体外渗透过程符合零级方程 ,并且试验过程中制剂
基本稳定。 结论　促透皮吸收剂氮酮可以促进药物的透皮吸收。
关键词: 化瘀巴布膏 ;透皮吸收 ;胡椒碱 ;改良 Franz扩散池法 ;丁香酚
中图分类号: R283. 62; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 03 0220 03
Study on in vitro percutaneous adsorption of Huayu Babu Sticking Plaster
SHOU Dan, SUN Jing-yun
( Schoo l o f Pha rmacy , Zhejiang Univ ersity, Hang zhou 310006, China )
Abstract: Object　 To resea rch the effect o f lauro capram upon the percutaneous abso rption o f Huayu
Babu Sticking Plaster ( HBSP) in vitro. Methods　 The improved Franz di ffusing cells were chosen to study
percutaneous abso rption o f piperine f rom HBSP. The content o f permeated piperine was determined by
HPLC; w hi le the content of augenol w as determined by GC to inspect the stabi li ty o f HBSP. Results　 The
resul t show ed that the process o f penet ra ting of piperine in HBSP through skin could be in accordance w ith
zero-grade releasing equation and HBSP w as stable during the course of experiment. Conclusion Lauro-
·220· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-03-18基金项目:浙江省中医药管理局资助项目 ( 045)作者简介:寿　旦 ( 1973— ) ,女 ,浙江诸暨人 ,助理研究员 , 1994年毕业于华西医科大学药学院药学专业后 ,在浙江省中医药研究院从事中药新药开发工作 ,现为浙江大学药学院研究生。