全 文 ：在 510～2510 mmol/ L 考察了硼砂浓度对迁移时间
的影响。实验表明大黄素、芦荟大黄素在硼砂浓度
为 510 mmol/ L 时不能很好分离 ,而当硼砂浓度为
1010 mmol/ L 时 ,芦荟大黄素的峰形不对称。结合
对迁移时间的影响 ,最终选择 1510 mmol/ L 作为最
佳硼砂浓度。
313 　SDS 浓度的影响 : 在缓冲溶液组成为 1510
mmol/ L 硼砂210 %乙醇 (p H 9160) 时 ,在 2010 ～
5010 mmol/ L 考察了 SDS 浓度对分离的影响。两
种有效成分的迁移时间都随着 SDS 浓度的增大而
增大 ,迁移顺序依次为大黄素、芦荟大黄素。当 SDS
浓度为 2010 mmol/ L 时 ,大黄素、芦荟大黄素彼此
间不能分离 ,而当 SDS 浓度超过 3010 mmol/ L 时 ,
迁移时间增大。综合考虑上述影响因素 ,最终选择
SDS 浓度为 3010 mmol/ L 。 314 　乙醇量的影响 :在缓冲液中添加有机物可改善HPCE 的分离效率。实验表明 ,在乙醇体积分数为0～5 %时分离情况不佳 ,出于对分离和迁移时间的综合考虑 ,选择 10 %乙醇。315 　分离电压的影响 :在毛细管电泳时 ,提高分离电压可以缩短体系分离时间 ,但是在高电压下会由于焦耳热的影响 ,使溶质产生扩散现象 ,从而降低毛细管电泳分离效率。本实验在 1510～2510 kV 考察了电压对分离的影响。综合考虑各影响因素 ,选择最佳分离电压为 2010 kV。References :[ 1 ] 　Hua H Q1 Study and clinical application of J uemingzi ( SemenCassiae) [J ]1 China J Chin M ater Med (中国中药杂志 ) ,1995 , 20 (9) : 56425671[ 2 ] 　Li Y , Li Y1 Capillary electrophoresis analysis on components inChinese materia medica [J ]1 Mod Inst ru (现代仪器) , 2000(5) : 1251
银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱研究
马 　欣 ,孙毓庆 Ξ
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 　110016)
摘 　要 :目的 　建立银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱。方法 　EGb 761 为对照 ,芦丁为内参比物 ,采用毛细管
电泳法分析银杏黄酮苷。结果 　利用指纹图谱相似度计算软件 ,计算出各厂家样品与 EGb761 的相似度指数 ,建立
银杏叶提取物的指纹图谱。结论 　该研究有助于银杏叶提取物的质量控制。
关键词 :银杏叶提取物 ;指纹图谱 ;毛细管电泳
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2004) 08 0876 03
Fingerprint for extract of Ginkgo biloba leaves
MA Xin , SUN Yu2qing
(College of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016 , China)
Key words : extract of Gi nkgo biloba leaves ( EGb) ; fingerprint ; capillary electrophoresis
　　银杏叶制剂临床广泛应用于治疗心脑血管疾
病 ,目前认为其有效部位为黄酮类和萜内酯类化合
物。现行分析方法多以 HPLC 法测定黄酮苷元 (槲
皮素、山柰酚和异鼠李素)计算总黄酮含量为主。在
银杏叶大部分成分尚不清楚的情况下 ,间接测定总
成分含量还不能真正反映提取物质量的稳定。
Hasler 等[1 ]和游松等[2 ]分别采用 HPLC 法建立了银
杏黄酮和银杏叶注射液的指纹图谱。由于银杏黄酮
极性相差很大 ,均采用了复杂的梯度洗脱。毛细管
电泳 (capillary electrophoresis) 是一种高效分离技
术 ,具有高效、快速、进样体积小、溶剂消耗少和抗污
染能力强等特点 ,在中药有效成分分析、指纹图谱研
究方面显示出显著的优势。EGb761 现为公认的银
杏叶提取物标准[3 ] 。因此本实验以 EGb761 为对照
建立了银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱。
1 　材料与方法
111 　仪器与试剂 :美国 Agilent 3D 毛细管电泳仪 ,
DAD 检测器 ,Agilent 化学工作站。未涂层石英毛细
·678· 中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 35 卷第 8 期 2004 年 8 月
Ξ 收稿日期 :2003210203
作者简介 :马　欣 (1977 —) ,女 ,广东汕头人 ,2000 年毕业于中国药科大学英语药学专业 ,现为沈阳药科大学在读硕士研究生 ,主要从事
中药分析研究。Tel : (024) 23842602 　E2mail : maxine- ma @sohu1com
管柱 (65 cm ×75μm ,有效长度 57 cm) (河北永年光
导纤维厂) 。
甲醇、乙腈和异丙醇为色谱纯 ,其他试剂均为市
售分析纯。配制缓冲液和供试品溶液所用的水均为
纯净水。
112 　溶液的制备 :取供试品适量 ,低温干燥 3 h ,用
40 %甲醇配制成 2 mg/ mL 的供试品溶液 ,0145μm
滤膜滤过 ,待用 ;称取芦丁适量 ,用 40 %甲醇配制
100μg/ mL 的溶液 ,0145μm 滤膜滤过 ,待用。
银杏叶提取物 : EGb761 (法国博福2益普生制药
公司) ;深圳海王药业 ( Ⅰ) ;江苏扬子江药业公司
( Ⅱ) ;山东鲁南制药厂 ( Ⅲ) ;湖北随州银杏生物制品
有限公司 ( Ⅳ) ;香港余仁生药厂 ( Ⅴ) ;桂林央达植物
制药厂 ( Ⅵ) ;江苏邳州银杏叶基地 ( Ⅶ) ;山东郯城银
杏叶基地 ( Ⅷ) 。内参比物芦丁由沈阳药科大学药厂
提供 ,经毛细管电泳法测定含量大于 9810 %。
113 　电泳条件 :运行缓冲液 : 500 mmol/ L 硼酸240
mmol/ L Tris215 %甲醇 (加 1 mol/ L NaOH 调节 pH
815) ;运行电压 :30 kV ;柱温 :25 ℃;进样量 :压力进样
50 mbar ×10 s ;检测波长 : 254 nm。实验之间依次
用011mol/ L NaOH溶液、水、运行缓冲液冲洗毛细 管 5 min。2 　指纹图谱及相似度结果211 　指纹图谱 :银杏叶提取物 EGb 761 的毛细管电泳图见图 1 ,其中有 13 个共有峰 ,其峰面积均大于总峰面积的 5 %。各供试品共有峰的相对保留时间和相对峰面积分别见表 1 和表 2。其他供试品的谱图见图 2。212 　相似度计算结果 :采用沈阳药科大学计算机中心自行开发研制的指纹图谱相似度计算软件 ,选用欧氏距离和相关系数法分别考察各供试品与银杏叶提取物 EGb 761 的相似度 ,结果见表 3。102内参比物芦丁102internal reference substance rutin图 1 　银杏叶提取物 EGb 761 的毛细管电泳图Fig1 1 　Capillary electrephorogram of EGb 761
表 1 　银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱相对保留时间
Table 1 　Relative retention time in capillary electrophorograms of EGb samples
供试品
各峰相对保留时间
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
EGb 761 01554 01640 01672 01681 01692 01871 01913 01963 01977 11000 11125 11212 11482
Ⅰ 01547 01643 01674 01684 01695 01871 01912 01962 01975 11000 11124 11208 0 　　
Ⅱ 01545 01641 01673 01683 01694 01874 01913 01964 01978 11000 11124 11210 11413
Ⅲ 01561 01652 01683 01693 01704 01877 01917 01965 01978 11000 11121 11203 11399
Ⅳ 01545 01636 01666 01677 01688 01869 01908 01961 01975 11000 11125 11209 11411
Ⅴ 01567 01658 01688 01699 01710 01892 0 　　 0 　　 0 　　 11000 11154 11326 11450
Ⅵ 01549 01642 01672 01683 01694 01876 01913 01964 01978 11000 11130 11212 11415
Ⅶ 01550 01636 01668 01678 01689 01871 01912 01964 01979 11000 11049 11212 0 　　
Ⅷ 01552 01641 01670 01681 01691 01871 01909 01961 01977 11000 11136 11221 11446
均值 01554 01644 01674 01684 01696 01875 01913 01963 01977 11000 11120 11221 11433
RSD/ % 218 117 115 115 115 019 013 012 012 0 　 212 215 114 　
表 2 　银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱相对峰面积
Table 2 　Relative peak area in capillary electrophorograms of EGb samples
供试品
各峰相对峰面积
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
EGb 761 01140 01434 01332 01376 01937 01806 01518 01126 01347 11000 01091 01341 11005
Ⅰ 01071 01380 01104 01339 01511 01902 01199 01114 01466 11000 01139 01150 0 　　
Ⅱ 01093 01620 01132 01525 01885 11545 01199 01191 01696 11000 01175 01325 01179
Ⅲ 01230 01602 01162 01430 01883 11078 01264 01188 01530 11000 01102 01265 01153
Ⅳ 01068 01177 01041 01140 01343 01409 01060 01084 01144 11000 01040 01092 01043
Ⅴ 01614 01737 01112 01784 01357 11228 0 　　 0 　　 0 　　 11000 01182 01094 01178
Ⅵ 01190 11181 01250 01622 01931 21268 01497 01200 01666 11000 01219 01276 01231
Ⅶ 01211 01593 01113 01511 01837 11582 01189 01162 01687 11000 01155 01207 01317
Ⅷ 01160 01446 01119 01341 01608 11176 01468 01152 01676 11000 01197 01316 01128
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图 2 　银杏叶提取物 EGb 761 与其他
供试品的毛细管电泳谱图
Fig12 　Capillary electrophorograms of EGb 761
and other samples
　　　　表 3 　指纹图谱相似度计算软件处理结果
Table 3 　Results of f ingerprint similarity by software
供试品
相似度
欧氏距离 相关系数
Ⅰ 01789 01765
Ⅱ 01863 01801
Ⅲ 01887 01854
Ⅳ 01850 01810
Ⅴ 01749 01732
Ⅵ 01862 01847
Ⅶ 01788 01693
Ⅷ 01813 01785
3 　方法学考察
311 　系统适用性试验 :按电泳条件进行试验 ,以芦
丁峰计算理论塔板数为 150 000 ,芦丁峰与其相邻峰
的分离度大于 115 ,对称因子为 1105。
312 　精密度试验 :取一新制备供试品溶液 ,连续测
定 5 次 ,共有峰相对保留时间的RSD < 119 % ,共有
峰相对峰面积的RSD < 211 %。
313 　重现性试验 :取同一供试品 ,同法制备 5 个供
试品溶液进行测定 , 共有峰的相对保留时间的
RSD < 215 % ,相对峰面积的RSD < 213 %。
314 　稳定性试验 :取一新制备供试品溶液于 0、2、
4、6、8、10 h 测定峰面积 ,结果共有峰面积 RSD <
312 %。
4 　讨论
411 　有机改性剂的影响 :分别考察了甲醇、乙腈、异
丙醇和四氢呋喃对分离的影响。随着有机改性剂含
量的增加 ,缓冲液电导减小 ,电渗流降低 ,迁移时间
延长。结果向缓冲液中加入 15 %甲醇 ,分离效果较
好 ,迁移时间适中。
412 　柱温影响 :考察了柱温为 15、20、25、30、35 ℃
时 ,对分离的影响 ,发现随着温度的降低 ,缓冲液黏
度增加 ,迁移时间延长。温度过高时 ,分离度降低 ,
且易产生气泡。综合考虑 ,最后选择了 25 ℃为分离
温度。
413 　参照物的确定 :芦丁是银杏叶中含有的一种黄
酮醇苷类化合物 ,其迁移时间居中 ,在各供试品中含
量较稳定 ,因此被选作内参照物。
414 　相似度计算结果 :国家药典委员会推荐使用的
“中药指纹图谱计算机辅助相似度计算软件”,一般
相似度计算结果在 019～110 为符合要求。该软件
拟合出一个共有模式 ,然后计算各样品与这个共有
模式的相似度。本实验采用沈阳药科大学计算机中
心自行开发研制的“指纹图谱相似度计算软件”,以
EGb 761 为共有模式 ,计算其他样品与它的相似度。
发现大部分样品的相似度均低于 019 ,考虑有以下
几个方面的原因 : EGb 761 的指纹图谱中含有一些
其他样品中没有的色谱峰 ;相似度计算软件不同 ;算
法不同。综合考虑 ,认为相似度小于 018 的样品与
EGb 761 差异显著。
415 　EGb 761 的电泳谱图中第 13 号峰明显大于其
他供试品 ,可能为相似度计算结果偏低的原因。从
此峰光谱图上看 ,推测此化合物为黄酮类化合物。
此峰的定性需要应用 GE2MS 技术进行进一步研
究。
　　致谢 :广州市药品检验所谢培山教授提供 EGb
761 及其他部分供试品。
References :
[ 1 ] 　Hasler A , Sticher O1 Identification and determination of the
flavonoids from Ginkgo biloba by high performance liquid chro2
matography [J ]1 J Chromatogr , 1992 , 605 : 412481
[ 2 ] 　You S , Wang L , Jiang Y H , et al1 Studies of fingerprint of
Ginkgo injection [J ]1 Chin Tradit Herb Drugs (中草药 ) ,
2002 , 33 (3) : 21622181
[ 3 ] 　Sticher O1 Quality of Ginkgo preparation [J ]1 Planta Med ,
1993 , 59 : 2291
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