全 文 ：·1644· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
何首乌炮制前后高效液相图谱的变化
刘振丽，李林福，宋志前，吕爱平
(中国中医研究院基础理论研究所，北京100700)
何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum
multlflorumThunb．的干燥块根。具有解毒、消痈、
润肠通便之功效。经炮制后为制何首乌，具有补肝
。肾、益精血、乌须发等功效o]。何首乌经炮制后其外
形、功效均发生了变化。目前在优选炮制工艺与评价
饮片质量中，多注重量变的研究，测定某成分或提取
物在炮制过程中的变化。由于基础性研究工作薄弱，
每味中药中可以进行测定的成分屈指可数，单纯～
种成分的变化并不能全面解释整个单味药功效的改
变，有时成分的变化与功效的改变不相吻合。某些被
认为是单味药中起作用的有效成分，在炮制过程中
逐渐下降，如何首乌中具有补肝作用口1的二苯乙烯
苷，在炮制后降低o“]。
随着指纹图谱鉴定技术的发展，越来越多的中
药采用指纹图谱进行鉴定和质量控制。较之单一成
分的测定，指纹图谱可以较全面有效地控制和评价
中药饮片质量，为深入阐明炮制前后药性和功效的
改变提供一定的依据。
《中国药典》和《全国中药炮制规范》中，何首乌
的炮制方法为黑豆汁蒸、黑豆汁炖和清蒸糟§对全国
二十几个省市的炮制规范总结，另有黑豆汁高压
蒸“3等。炮制时间从3h至40h不等。本实验选择
两个产地的何首乌药材，分别采用不同炮制工艺炮
制相同时间，以及同一炮制工艺炮制不同时间，对得
到的制何首乌饮片进行HPLC—uv图谱分析，探讨
何首乌炮制前后内在成分质与量的变化。
1仪器、材料与试剂
高效液相色谱仪：HPll00，G1322A脱气机，
G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1316A恒
温箱，G1315AD D检测器，G1314AVWD检测
器，HP化学工作站。
何首乌药材来自广东省德庆县德城镇和湖北恩
施，经中国中医研究院中药研究所I谢宗万f研究员鉴
定，均为蓼科植物何首乌P．multiflorumThunb．
的干燥块根；实验样品为实验室自制的何首乌生饮
片和经黑豆汁蒸12、24、32、48h，清蒸32h口]，黑豆
汁高压蒸12h[{3的饮片。
2，3，5，4-四羟基二苯乙烯一2一O一卢一D一葡萄糖苷
(简称二苯乙烯苷，批号0844—200003)、太黄素(批
号0756—200110)、大黄素甲醚(批号758—20000S)购
自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯(美国
Fisher公司)，水为超纯水。
2方法与结果
2．1色谱条件：DiamondC1B色谱柱(250mm×4．6
mm，5pm)，甲醇一水从0min(18：82)到45min
(100；o)线性梯度洗脱，体积流量为1．2mL／min，
检测波长为280nm，柱温为40℃。
2．2对照品溶液的制备：精密称取大黄素、大黄素
甲醚、二苯乙烯苷对照品适量，加甲醇溶解制成40、
20、60f^g／mL的溶液，作为对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备：取各何首乌饮片粉末(过
四号筛)o．15g，精密称定，精密加入甲醇lOmL，称
定质量，回流提取30min，放冷，再称定质量，用甲
醇补足减失的质量，摇匀，过0．45,um微孔滤膜，取
续滤液作为供试品溶液。
2．4方法学考察
2．4．1精密度试验：取同一何首乌饮片制备的供试
品溶液，连续进样5次。测定HPLC图谱。结果色谱
峰1～4保留时间的RSD分别为0．12％、0．87％、
1．21％、1．81％，峰面积的RSD分别为0．78％、
1．13％、3．78％、4．86％。
2．4．2稳定性试验：取同一何首乌饮片制备的供试
品溶液，分别在o、8、16、24h测定HPLC图谱。结果
色谱峰 ～4保留时间的RSD分别为0．60％、
1．11％、1．10％、2．07％，峰面积的RsD分别为
0．18％、2．00％、2．96％、3．89％。表明供试品溶液在
24h内稳定。
2．4．3重现性试验：同一何首乌饮片按供试品溶液
制备方法平行制备5份，分别检测HPLC图谱。结
果色谱峰1～4保留时间的RSD分别为0．08％、
鉴鍪品眢：留荽莒蒙辑学基金资助项目(30472191)}国家中医药管理局资助项目(04一052P“)
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 645·
1．04％、1．94％、1．36％，峰面积的RSD分别为
0．55％、1．99％、3．11％、3．01％。
2．5各样品HPLC图谱测定
2．5．1色谱峰的归属：精密吸取对照品溶液和何首
乌供试品溶液各20止注入液相色谱仪，以DAD
检测器确认图谱中各对照品峰的归属。
2．5．2各供试品HPLC图谱测定；取各供试品溶
液20此进样，得到各供试品HPLC谱图。湖北恩
施产何首乌采用黑豆汁蒸制不同时间各饮片的
HPLC图谱见图1，相关色谱峰的峰面积占总峰面
积的百分数结果见表1。广东德庆产何首乌采用不
同炮制方法炮制32h后各饮片的HPLC图谱见图
2，相关色谱峰的峰面积占总峰面积的百分数结果见
裹1■蔓汁蒸制不同时间各何首乌饮片相美色谱峰的
峰面积占总峰面积的百分数(月一2)
Table1 Percentageofrelativepeakareaintotalpeak
areaofRadixPoOgoulM ltiflorifromsteamed
wjthblackbeonsaucefordifferenttime抽一2)
样品来源 新产生 二苯乙 大黄 大黄素
笪望些 竖董些 茎壁里墼堕
生片 o 58．88 2．19 2．31
炮制12h
炮制24h
炮制32h
炮制48h
3．34
11．73
27．25
26．35
45．05
35．13
28．40
27．53
3．84
5．80
7．16
7．68
2 90
11．04
13．95
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O 10 曲 30 40
，／min
1一新产生的组分22=苯乙烯苷3一大黄素4一太黄索甲醚
A一生片B黑豆汁蒸12h C一黑豆汁燕24b
D一黑豆汁蒸32h E一黑豆计燕蚰h
卜newcomponents2stilbeneglueoside3- modin
4-physcionA—ra．wherbalpiecesB—steamedwithbladk
beansaucefor12h C—steamedwithblackbeansauce
for24h Dsteamedwithblackbearlsaucefor32h
E—steamedwithblackbeansaucefor48h
圈l湖北恩施产何首乌黑蔓汁蒸制不同
时间饮片的HPLC圈谐
Fig．1HPLCehromatogramsfRadixPolygoniMulti-
ⅣorifromEnshl，HubelProvincesst amed
withblackbeansaucefordlfferenttime
．， JI2。 3J j蝇坐毒§
，m血
1一新产生的组分2一二苯乙烯苷3一大黄索4一大黄索甲醚
A一生片B一黑豆汁燕32h C-清蒸32h D一黑豆汁高压燕12h
1-flewcompoaents2-stilbeaeglucoside3- rnodifl
4-physcionA一1-awherbalpieces8-steamedwithblack
be8nsaucefor32h C-steamedfor32h D-steamed
州thblackbeansauceinhighpressuretot12h
圈2广东德庚产何首乌不同炮制方法饮片HPLC圈谱
Fig．2HPLCehromatogramsfRadixPolygoni
MultiflorifromDeqlng，Guangdong
processedwithdifferentm thods
裹2不同炮制方法所得各何曹乌饮片相关色谱
峰的峰面积占总峰面积百分数抽=：)
Table2 Percentageofrelativear aintotalpeak
areaofRadixPolygoniMultiflori
bdifferentprocessings(月一2)
峰1 峰2 峰3 峰4
样品来源 新产生 二苯乙 大黄 大黄素
的组峰 烯苷峰 索峰 甲醚峰
生片0 7832 3．45 9．64
黑豆计燕32h 7．06 50．89 9．48 29．50
清蒸32h 9．31 39．88 8．07 26．14
黑豆汁高压蒸12b 7．46 43．27 7．99 14．26
3讨论
本实验主要对炮制后何首乌新产生的一组色谱
-一，Q
万方数据
·1646· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
峰以及可以确定归属。的3个色谱峰进行了比较研
究。从湖北恩施产何首乌采用黑豆汁蒸制不同时间各
饮片的HPLC图谱分析可以看出，随炮制时间的延
长，3种单体成分中大黄素、大黄素甲醚峰面积逐渐
升高，二苯乙烯苷峰面积逐渐降低，而炮制后保留时
间4．5～6．5min出现了一组新的色谱峰。并且随炮
制时间由12、24h延长32h，这组谱峰峰面积占总峰
面积的百分数逐渐增加，至48h不再增加。
从广东德庆产何首鸟采用黑豆汁燕32h、清蒸
32h和黑豆汁高压蒸12h前后各饮片的HPLC图
谱分析可知，炮制后保留时间介于4．5～6．5min也
有新的色谱峰产生。同时，大黄素、大黄素甲醚峰峰
面积占总峰面积的百分数升高，二苯乙烯苷降低。各
种炮制方法都显示类似的变化。提示与辅料黑豆汁
无关。
曾试用甲醇0．1％磷酸为流动相进行梯度洗
脱，但样品分析时基线不平，影响相对峰面积的准确
计算，且与甲醇一水系统比较，分离无明显改善。因此
选择甲醇一水梯度洗脱。在供试品溶液的制备中，曾
比较了醋酸乙酯、70％乙醇、甲醇回流提取，或甲醇
超声提取。结果显示以甲醇回流提取图谱重现性较
好，提供的色谱峰数量多，相应色谱峰峰面积大。因
此，采用甲醇回流提取制备供试品溶液。采用DAD
检测器确定检测波长为280nm。
试验结果显示，两个产地的何首乌经炮制后既
有已知成分量的变化，更存在内在成分质的改变。而
炮制后新产生组分的化学结构及其与功效改变的关
系，值得进一步研究。
References：
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PublishingHoHse．1975．
枳壳生饮片的HPLC指纹图谱研究
王少军1，曾君2，杨武亮2，龚千锋2，王跃生1，杨世林1
(1．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330077；2．江西中医学院，江西南昌330006)
枳壳为芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL．
及其栽培变种的于燥未成熟果实，具有理气宽中、行
滞消胀功效。枳壳生饮片作用较强，偏于行气宽中除
胀。目前我国市场上主流枳壳商品为江枳壳。湘枳
壳，川枳壳，分别产于江西、湖南、四川。枳壳来源复
杂，质量参差不齐，加之市场上不断出现伪劣枳壳药
材，有必要对枳壳饮片建立较全面的质量控制手段。
本实验对10批主流枳壳生饮片进行高效液相色谱
分析，建立了枳壳生饮片的特征峰，为枳壳饮片的鉴
别及质量进一步评价提供了一定的科学依据。
1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，Agilent1100柱
温箱，DAD检测器，Agilent1100色谱工作站，
MettlerAE240电子天平，KQ318T型超声波清洗
器。HPLC级甲醇购于Merck公司，甲醇、磷酸、醋酸
乙酯为分析纯，水为重蒸水。新橙皮苷对照品(自制，
面积归一化测得质量分数为99．34％)，柚皮苷对照
品(批号0722—200108)、橙皮苷对照品(批号0721—
200010)均购自中国药品生物制品检定所。枳壳原药
材分别购于江西新干、江西樟树、湖南连桥、四川荷花
池药材市场，经江西中医学院中药鉴定教研室刘庆华
鉴定为枳壳。枳壳生饮片为本课题组自制，见表1。
衰1枳壳生饮片名称殛产地
Table1 NamesandhabitatsofFructusA rantiirawdrugs
作收者n筒fl介Wh；2王0少05辜：】笛9一)，男，陕西渭南人，硕士研究生．主要从事中药质量标准及天然药物化学研究。E硼i1；wang。j@】。jlcom
万方数据
何首乌炮制前后高效液相图谱的变化
作者： 刘振丽， 李林福， 宋志前， 吕爱平
作者单位： 中国中医研究院基础理论研究所,北京,100700
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 8次

参考文献(4条)
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4.Tianjin Bureau of Health 中约饮片切制规范 1975

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引证文献(8条)
1.刘振丽.宋志前.巢志茂.吕署一.王淳.李林福 何首乌炮制后新产生成分含量分析[期刊论文]-中国中药杂志
2008(20)
2.刘振丽.宋志前.巢志茂.王淳.吕署一.李林福 何首乌生品与炮制品薄层层析鉴别方法研究[期刊论文]-中国中医
药信息杂志 2009(3)
3.刘振丽.李林福.宋志前.王淳.张玲.巢志茂 何首乌炮制后新产生成分的分离和结构鉴定[期刊论文]-中药材
2007(12)
4.梁永枢.段启.方丽华.胡海云.刘喜纯.王维利 广东德庆何首乌药材HPLC指纹图谱方法学研究[期刊论文]-广东药
学院学报 2006(3)
5.刘振丽.巢志茂.李林福.宋志前.王淳.吕署一 HPLC-ELSD测定何首乌炮制过程中单糖和双糖含量的变化[期刊论文
]-中国实验方剂学杂志 2008(5)
6.刘振丽.李林福.宋志前.张玲 何首乌药材质量评价研究[期刊论文]-中药材 2007(3)
7.李林福.刘振丽.宋志前.王淳.巢志茂 何首乌炮制研究进展[期刊论文]-中国药房 2007(30)
8.俞捷.谢洁.赵荣华.蔡少青.陈真 何首乌肝脏不良反应研究进展[期刊论文]-中草药 2010(7)


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