全 文 ：贯叶连翘标准提取物体外抗氧化活性
邹彦平1 ,俞仁昌2 ,卢艳花1* ,魏东芝1X ,於洪建3
( 1. 华东理工大学生物工程学院 生物反应器国家重点实验室,上海　200237; 2. 山东新时代药业有限
公司,山东 临沂　273400; 3. 天津尖峰天然产物研究开发公司,天津　300402)
　　贯叶连翘 Hyp ericum p erf oratum L. 为藤黄科
金丝桃属植物, 又名千层楼、圣约翰草等, 地上部分
或全草入药, 其性平味涩,有清热解毒、收敛止血、利
湿之功效。其主要成分有苯并二蒽酮类、黄酮类、挥
发油类和间苯三酚类。贯叶连翘富含黄酮类化合物,
高达 11. 7%, 主要为金丝桃苷、槲皮素、槲皮苷及芦
丁[ 1]。研究表明, 黄酮类成分具有降低胆固醇、甘油
三酯及抗动脉粥样硬化的作用, 在心血管方面具有
独特的疗效。但迄今为止,贯叶连翘的应用还局限于
其甲醇提取物制剂用于治疗抑郁症,其富含的黄酮
类成分却未被开发利用。为进一步开发利用贯叶连
翘, 本实验对贯叶连翘标准提取物 ( EHP) 的体外
抗氧化活性作了初步研究。
1　材料
1. 1　药品与试剂:贯叶连翘标准提取物 ( EHP) ,棕
色粉末, 由天津尖峰天然产物公司提供 (含金丝桃
素约 0. 3%) , 以缓冲液配成不同质量浓度的供试
液。还原性辅酶Ⅰ( NADH)、酚嗪二甲基硫酸盐
( PM S)、四氮唑蓝 ( NBT )、1, 1-二苯基-2-苦基苯肼
( DPPH) 及维生素 E ( Vit E) 均为 Sigma 产品,特
丁基对苯二酚 ( T BHQ ) 为 Acros o rganics (美国)
产品, 硫代巴比妥酸 ( TBA)、三氯乙酸 ( TCA)、氯
化亚铁 ( FeCl2)、抗坏血酸 ( Vit C) 等均为国产分析
纯,中国医药集团上海化学试剂公司产品。
1. 2　动物:昆明种小鼠 18～22 g, 雄性,由上海西
普尔必凯实验动物有限公司提供。
2　方法与结果
2. 1　EHP 对 DPPH 自由基的清除作用: 参照
Nicole 等[ 2]方法略加修改。取 2. 5 mL DPPH 溶液
( 2×10- 4 mol/ L , 以 50% 乙醇溶液配制) 分别加入
到 2. 5 mL 终质量浓度为 5, 10, 25, 50, 100 Lg/ mL
的 EHP 溶液中, 混匀, 室温下静置 30 min,于 517
nm 波长处测定其吸光度 ( A ) 值,并以 Vit E (终质
量浓度为 6. 25、12. 50、25、50、100 Lg / mL ) 和
T BHQ (终质量浓度为 1、3、5、7、9 Lg/ mL) 作为阳
性对照药物。结果见图 1。EHP 能显著清除 DPPH
自由基,且呈量效关系, 其清除 DPPH 自由基的能
力随 EHP 质量浓度的增加而增大, IC50 (半数抑制
浓度) 为 10. 5 Lg/ mL,阳性对照天然抗氧化剂 Vit
E 的 IC50为 11. 2 Lg / mL, 合成抗氧化剂 TBHQ 的
IC50为 4. 2 Lg / mL。
DPPH 清除率= [ 1- ( A 2- A 3) / A 1]×100%
A 1 为未加药品溶液时 DPPH ( 2. 5 mL DPPH+ 2. 5 mL 溶
剂 ) 的吸光度值, A 2 为药品与 DPPH 反应后 ( 2. 5 mL
DPPH+ 2. 5 m L 药品溶液 ) 的吸光度值 , A 3 为药品溶液
( 2. 5 mL 药品溶液+ 2. 5 mL 50% 乙醇) 的吸光度值。
1-EHP　2-Vit E　3-T BHQ
图 1　EHP 对 DPPH 自由基的清除作用
Fig. 1　Scavenging eff ect of EHP on DPPH free radical
2. 2　EHP 对超氧阴离子自由基 ( O 2÷ ) 的清除作
用: 参照文献方法 [ 1]。O2÷由 NADA-PM S-N BT 系
统 ( 16 mmo l/ L pH8. 0 的 T ris-HCl 缓冲液, 内含
NADH 73 Lmol/ L、PMS 15 Lmol/ L、NBT 50
Lmol/ L ) 产生,空白管不加 PM S,对照管不加 EHP
溶液,均以等体积的缓冲液代替。EHP 溶液的终质
量浓度为 12. 5、25、50、100、200、300 Lg/ mL, 反应
总体积为 3 mL,室温下反应 5 m in 后于 560 nm 波
长处测定 A 值, 以 VitC 作为阳性对照物,并计算清
除率。结果见图 2。EHP 能够明显抑制 NADH-
·1031·中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 35 卷第 9 期 2004年 9月
X 收稿日期: 2004-01-05作者简介:邹彦平( 1972—) ,男,湖北云梦人,在读博士研究生,研究方向为天然产物活性成分的提取分离研究。
E-mail: zypjmd@ 163. com
* 通讯作者　
PM S-NBT 系统产生的 O 2÷, 且抑制作用随 EHP 质
量浓度的增加而增大。其 IC50为 38. 0 Lg/ mL, 远远
低于阳性对照药物 VitC ( IC50为 782 Lg / mL)。
O 2÷清除率= [ 1- ( A 2- A 3) / A 1]×100%
A 1为加入药品后的吸光度值, A 2 为空白管的吸光度值, A 3
为对照管的吸光度值。
图 2　EHP 对超氧阴离子自由基的清除作用
Fig. 2　Scavenging eff ect of EHP on superoxide
f ree radical
2. 3　对小鼠肝微粒体膜脂质过氧化的抑制作用:参
照文献方法[ 3]。选用 18～22 g 雄性小鼠,饥饿过夜,
颈椎脱臼处死,迅速取出肝脏放入冰浴的 PBS 缓冲
液中, 洗净剪碎, 然后加入 3 倍的 PBS 缓冲液进行
匀浆,匀浆后,于 9 800 r/ min、4 ℃ 离心 20 min,取
上清液以 PBS 缓冲液配制成 5% 肝脏匀浆液, 4 ℃
保存备用。1. 95 mL 肝脏组织匀浆中加入 0. 25 mL
EHP 溶液 (终质量浓度分别为 6. 25、12. 5、25、50、
100 Lg/ mL) ,再加入 4 mmol/ L FeCl2溶液 0. 1 mL,
最后加入 6 mmol/ L 的 VitC 溶液 0. 2 mL 引发反
应。并以 TBHQ (终质量浓度为 1. 56、3. 13、6. 25、
12. 5、25 Lg/ mL) 作为阳性对照物。37℃ 下水浴振
荡 90 min 后,加入 1 mL 20% TCA 结束反应,再加
入 1. 5 mL 0. 67%T BA, 于沸水浴中显色 10 m in,
冷却后离心,于 532 nm 波长处测定上清液的 A 值。
结果见图 3。EHP 能够抑制 Fe2+ -VitC 系统引起的
小鼠肝微粒体脂质过氧化,其 IC50为 19. 3 Lg/ mL,
弱于阳性对照物 TBHQ ( IC50为 4. 5 Lg/ mL)。
抑制率= [ 1- ( A 2- A 3) / A 1]×100%
A 1为未加药品的反应液 ( 1. 95 mL 肝脏匀浆+ 0. 25 mL
PBS + 0. 1 mL 4 mmo l/ L FeCl2+ 0. 2 m L 6 mmol/ L V it C)
的吸光度值, A 2为加 EHP 后的吸光度值 ( 1. 95 mL 肝脏匀
浆+ 0. 25 mL EHP 溶液+ 0. 1 mL 4 mm ol/ L FeCl2+ 0. 2
m L 6 mm ol/ L V itC) , A 3 为样品的空白 ( 1. 95 mL 肝脏匀
浆+ 0. 25 mL EHP 溶液+ 0. 3 mL PBS) 的吸光度值。
1-T BHQ　2-EHP
图 3　EHP 对小鼠肝微粒体脂质过氧化的抑制作用
Fig. 3　Inhibitory eff ect of EHP on mice liver
microsome lipid peroxidation
3　讨论
　　近年来,从植物中寻找清除自由基的药物已引
起国内外的广泛重视。植物中酚类、黄酮类化合物等
多种活性成分的抗氧化活性的研究越来越广泛, 富
含金丝桃苷等黄酮类化合物的山楂提取物已被开发
成治疗心血管疾病的药物。本实验利用 DPPH 自由
基产生体系、NADH-PMS-NBT 系统产生 O 2÷、
Fe
2+ -VitC 系统产生羟自由基 ( OH·) 诱导小鼠肝
微粒体膜脂质过氧化来研究 EHP 清除自由基、抗
氧化活性。结果表明 EHP 体外可有效地清除
DPPH 和 O 2÷ ,抑制小鼠肝微粒体脂质过氧化。研究
结果证明了 EHP 具有清除自由基和抗氧化的作
用, 为进一步开发和利用贯叶连翘总黄酮提供一定
的理论依据。
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保 护 植 被 　 造 福 人 类
·1032· 中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 35 卷第 9 期 2004年 9月