全 文 ：固体脂质纳米粒降低雷公藤内酯醇肝毒性的实验研究
梅之南, 杨亚江,徐辉碧,杨祥良

(华中科技大学药物研究所,湖北 武汉　430074)
摘　要: 目的　探讨固体脂质纳米粒降低雷公藤内酯醇 ( T P) 对肝脏的毒性作用。方法　用雷公藤内酯醇固体脂
质纳米粒( T P-SLN )小鼠 ig 60 d 后,测定小鼠血清谷丙转氨酶 ( ALT )、谷草转氨酶 ( AST ) 和肝组织中的超氧化
物歧化酶 ( SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶 ( GSH-Px ) 的活性以及丙二醛 ( MDA ) 的含量。结果　与空白组相比 , TP-
SLN 对 ALT , AST , SOD , GSH-Px, M DA 的活性或含量差异无显著性;中、高剂量 ( 20, 30
g/ kg ) 的 T P 组则显
著降低 SOD 和 GSH-Px 的活性,并能显著提高 M DA, ALT 和 AST 的含量。结论　TP-SLN 能降低 T P 对肝脏
的毒性。
关键词: 固体脂质纳米粒; 雷公藤内酯醇; 肝毒性
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 09 0817 03
Experimental research on triptolide solid lipid nanoparticle
for decreasing liver toxicity of triptolide
MEI Zhi-nan, YANG Ya-jiang , XU Hui-bi, YA NG Xiang-liang
( Institute o f Mater ia Medica, Huazhong Univer sity of Science and T echnolog y , Wuhan 430074, China)
Abstract: Obj ect　T o study the mechanism o f t riptolide solid l ipid nanopart icle ( T P-SLN) for de-
creasing liver tox icity of t riptolide ( TP) . Methods　With ig three do ses of T P-SLN to mice fo r 60 d, the
ALT , AST act ivit ies in serum and superox ide dismutase ( SOD) , glutathione pero xidase ( GSH-Px ) ac-
tiv ites and malondialdehyde ( MDA ) contents in liver w ere determined. Results　The act ivit ies of ALT ,
AST , SOD, GSH-Px and content of MDA betw een experimental g roup and blank g roup did not have re-
markable dif ference. How ever , the act ivites of ALT , AST , SOD, GSH-Px for the middle- ( 20
g / kg ) and
high-dose ( 30
g / kg ) g roup w ere higher and the contents of MDA were low er than the experimental
gr oup. Conclusion　T P-SLN can decr ease the liver toxicity of T P .
Key words : t riptolide so lid l ipid nanopar ticle ( T P-SLN) ; tr iptolide ( TP) ; liver tox icity
　　雷公藤为卫矛科雷公藤属雷公藤 Tr ip tery-
gium w ilf or dii Hook. f .、昆明 山海棠 T . hy-
poglaucum ( Levl . ) Hutch. 以及苍山雷公藤 T .
f orrest ii Dials、东北雷公藤 T . regelli Sprague et
Takeda 等的根、叶、花。由于其生理活性强,具有显
著的抗炎、抗肿瘤 [ 1]、抗生育[ 2]及免疫抑制作用[ 3] ,
临床上应用广泛。据不完全统计,雷公藤已用于治疗
类风湿性关节炎、红斑狼疮、过敏性紫癜、皮肤病、肾
脏疾病等 50 多种疾病,外用还有镇痛作用。但其不
良反应很多, 主要发生在消化系统、泌尿系统、生殖
系统、心血管系统、骨髓及血液系统。还可以引起水
肿、血糖升高、复视等, 因此限制了该药在临床上的
应用[ 4]。研究表明,雷公藤的药理活性及毒性来源于
其复杂的化学成分及生理活性成分,主要含有生物
碱(如雷公藤碱戊)、二萜类(如雷公藤内酯醇, 即雷
公藤甲素、雷公藤乙素)、五环三萜类(如雷公藤内酯
甲)、倍半萜类、脂肪油、挥发油、蒽醌类、木脂素类、
卫矛醇、鞣质等。其中二萜类和生物碱类是主要活性
成分。为了提高雷公藤的药效,降低其毒性, 本实验
以雷公藤内酯醇 ( T P) 为模型药物, 研制了雷公藤
内酯醇固体脂质纳米粒 ( T P-SLN) ,探讨其对肝脏
的毒性作用。
1　材料
1. 1　药品: TP 为福建省医学科学院提供, 含量为
99. 98%, 用时配成所需浓度溶液; T P-SLN 为本所
研制; ALT , A ST , SOD, GSH-Px 及 MDA 等试剂
盒均由南京建成生物工程研究所提供。
1. 2　动物: 雄性昆明种小鼠,体重 ( 20±2) g ,由湖
·817·中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 34 卷第 9 期 2003年 9月

收稿日期: 2002-11-31基金项目:“十五”国家科技攻关项目 ( 2001BA310A)作者简介: 梅之南( 1970—) ,男,博士生,讲师, 1997年毕业于中国药科大学,获硕士学位,先后工作于武汉大学、中南民族大学, 主要从事药物的研究和开发。T el : ( 027) 87543532　E-mail : gly1971@ 263. n et
* 通讯作者
北省预防医学科学研究院实验动物中心提供。
2　方法
2. 1　分组及处理: 雄性昆明种小鼠 70 只,每组 10
只,随机分为:对照组,每天 ig 生理盐水; T P 低、中、
高 3个剂量组,分别 ig 10, 20, 30
g/ kg, 每天给药
1次; T P-SLN 组给药方法、剂量同 T P 组。连续 ig
60 d,自由进食和饮水,末日隔夜禁食不禁水,次日
晨眼眶取血后处死小鼠, 分离血清测定 ALT,
AST ,并取所需器官进行各项测定。
2. 2　ALT , AST 的测定: 采用赖氏法测定,按试剂
盒说明书操作方法测定。
2. 3　SOD 活性的测定[ 5] :用黄嘌呤及黄嘌呤氧化
酶反应体系产生的超氧阴离子自由基氧化羟胺形成
亚硝酸盐,检测亚硝酸盐的量计算 SOD 活性, 按试
剂盒说明书操作方法测定。以每毫克肝脏蛋白质在
1 mL 反应液中 SOD 抑制率达 50% 时所对应的
SOD 量为 1个亚硝酸盐单位,单位为 NU / mg。用考
马斯亮蓝法平行测定相应小鼠肝脏中蛋白质含量。
2. 4　GSH-Px 活性测定 [ 5, 6] : 以催化 GSH 的反应速
率来表示酶活性。取肝脏匀浆液 0. 2 mL, 按试剂盒
说明书操作方法测定。规定每毫克肝脏蛋白质, 扣除
每分钟非酶促反应的作用,使反应体系中 GSH 浓
度降低 1
mol/ L 为 1 个酶活力单位 ( U ) , 单位为
U / mg。考马斯亮蓝法测定蛋白质含量。
2. 5　MDA 的含量测定[ 7] :取肝脏匀浆液 0. 1 mL,
分别加入 3 mL 15% TCA 和 1 mL 6. 7% TBA,于
沸水浴中显色 15 min,冷却后离心,于 532 nm 处测
上清液吸光度 ( A ) 值。另用考马斯亮蓝法平行测定
相应小鼠肝脏匀浆液中的蛋白质含量。
2. 6　数据处理:数据以 x±s 表示,组间用 t 检验。
3　实验结果
3. 1　TP-SLN 对肝功能的影响:结果见表1。ALT ,
AST 均属非特异性细胞内功能酶,正常时血清内含
量很低; 当肝细胞受损, 肝细胞膜通透性增加时, 其
活性迅速增强。低剂量 TP-SLN 组和 TP 组对肝脏
无明显的损伤作用。TP-SLN 能显著降低 TP 对肝
脏的毒性损伤, 同 TP 组相比差异有显著性。
表 1　TP-SLN 对血清 ALT, AST 活性的影响
Table 1　TP-SLN ef fect on activities
of ALT, AST in mice serum
组　别 动物
/只
剂　量
/ (
g·kg- 1)
ALT
/ ( U·mL - 1)
AST
/ ( U·mL- 1)
对照 　10 　- 17. 4± 3. 92 26. 9± 2. 32
TP 10 10 19. 3± 4. 58 30. 4± 3. 90
9 20 88. 8± 9. 43* * 110. 5± 9. 03* *
7 30 109. 9±10. 39* * 132. 7±13. 98* *
TP-SLN 10 10 18. 9± 4. 73 28. 5± 4. 52
10 20 20. 7± 5. 48 30. 7± 3. 36
9 30 21. 3± 6. 24 32. 1± 7. 00
　　与对照组比较: * * P < 0. 01
　　* * P < 0. 01 v s cont rol group
3. 2　T P-SLN 对 SOD, GSH-Px 活性及 MDA 含
量的影响:结果见表 2。低剂量 T P 对 SOD, GSH-Px
活性及 MDA 含量变化无明显影响,而中、高剂量雷
公藤内酯醇不同制剂, 二者差异存在显著性, TP 组
中 SOD, GSH-Px 活性明显低于 TP-SLN 组, 而
MDA 含量则高于 T P-SLN 组。
表 2　TP-SLN 对肝组织 SOD, GSH-Px 活性及 MDA 含量的影响
Table 2　TP-SLN ef fect on activities of SOD, GSH-Px and contents of MDA in liver tissue
组　别 动物/只 剂量/ (
g·kg- 1) SOD/ ( NU·mg- 1) GSH-Px/ ( U·mg- 1) M DA/ ( nmol·mg- 1)
对照 　　10 　　　　- 　　　75. 00± 5. 64 　　　67. 40± 5. 32 　　　6. 85±0. 54
T P 10 　　　　10 70. 50± 8. 49 60. 32±10. 54 7. 44±0. 38
9 20 46. 42± 7. 00* * 36. 87± 4. 77* * 10. 39±0. 97* *
7 30 35. 26± 9. 27* * 31. 35± 9. 49* * 13. 31±1. 02* *
T P-SLN 10 10 70. 42± 9. 69 66. 75± 7. 95 7. 27±0. 49
10 20 68. 77± 7. 57 57. 24± 9. 02 7. 79±0. 78
9 30 65. 22±10. 03 59. 02± 8. 12 8. 10±1. 38
　　　与对照组比较: * * P < 0. 01
　　　* * P< 0. 01 v s cont rol group
4　讨论
　　雷公藤提取物及其二萜内酯类、生物碱具有明
显的药理活性,同时还有明显的毒性。目前,临床使
用的雷公藤主要用其抗炎和免疫抑制活性, 该类制
剂在治疗类风湿性关节炎和红斑狼疮等自身免疫性
疾病的疗效是非常肯定的,但也存在明显的不良反
应。本研究从降低 T P 肝毒性的角度出发, 将纳米技
术应用到中药领域。初步结果表明, TP-SLN 提高药
物疗效的同时能显著降低 T P 对肝脏的损伤。
在实验过程中, T P 组有 4 只(中剂量组 1 只,
高剂量组 3只) , T P-SLN 高剂量 1只小鼠死亡。尸
检发现。肾脏病变较肝脏明显,除肾小管上皮细胞变
性、坏死外,肾小管管腔内出现蛋白管型。说明 T P
对小鼠的肾损害可能是亚慢性中毒者的主要死亡原
·818· 中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 34 卷第 9 期 2003年 9月
因之一[ 8]。因此在临床使用时必须严格掌握用药的
剂量。有关 T P-SLN 对肾及其他组织的毒性尚在进
一步的研究中。
药物通过多种途径进入机体后在不同水平上引
发各种各样的毒性效应。其中许多毒性同自由基与氧
化损伤有关。生理条件下, 体内自由基的产生和清除
存在着动态平衡; 但在某些病理条件下,自由基生成
过多, 超过清除的能力时就会造成组织损伤。本研究
表明,固体脂质纳米粒能减少 T P 在小鼠体内 MDA
的产生,说明固体脂质纳米粒可减少 TP 在小鼠体内
脂质过氧化反应的发生[ 5～7, 9]。这应与 T P-SLN 对小
鼠体内 SOD 和 GSH-Px 活性影响较小有关。
References:
[ 1]　Gao X P, L i B G, Zhou J , et al. Ant itumor act ivit ies and in-
duct ion of apoptosis by t riptol ide [ J] . N at P rod R es Dev (天
然产物研究与开发) , 2000, 12( 1) : 18-21.
[ 2]　Huynh P N , Hikim A P, Wang C, et al . L on g-term ef fect s
of t riptolide on spermatogenesis, epid idymal sperm function ,
an d fert il ity in male rat s [ J] . J A nd rol, 2000, 21( 5) : 689-
699.
[ 3]　Chan E W , C heng S C, S in F W , et al . T riptolide induced
cytotoxic ef fect s on human prom yelocytic leu kem ia, T cel l
l ymphoma and human hepatocellular carcinoma cel l l ines [ J] .
T ox icol L et t, 2001, 122( 1) : 81-87.
[ 4]　Su X, Zh ang S M , T ian C H, et al . S afety of Trip t eryg ium
w i lf or dii [ J ] . Chin N ew Drug s J (中国新药杂志) , 2001,
10( 7) : 539-543.
[ 5]　Weis s C, Mak er H S, Lehr er G M. Sensit ive f luorometr ic
ass ays for glutathione peroxid as e and red uctas e [ J ] . Anal
B iochem, 1980, 106: 512-516.
[ 6]　Beyer W F, Fridovich I. Phosph ate, not sup eroxide dismu-
tase, facilit ates elect ron t ransfer from ferrous s al ts to cy-
tochr om e C [ J ] . A rch B iochem Biophys, 1999, 285( 1) : 60-
63.
[ 7]　Nebot C , Moutet M , Hu et P, et al. Spect roph otomet ric as-
say of superoxid e dismutaseact ivity based on th e act ivated au-
toxidation of a tet racycl ic catechol [ J] . A nal B iochem, 1993,
14( 4) : 442-451.
[ 8]　Liu L , Wang Z Y, Huang G Z, et al . Th e inf luence of t rip-
tolide sub-chronic in tox ication on k idney and tes t icle in mice
[ J ] . A cta Univ Med T ongj i (同济医科大学学报) , 2001, 30
( 3) : 214-217.
[ 9]　Ray S D, Fariss M W. Role of cellular energy s tatus in toco-
pheryl hemisuccinate cytoprotection against eth yl meth ane-
su lfonate-induced tox icity [ J] . Ar ch B ioch em Biophys, 1994,
311( 3) : 180-190.
四逆汤对高钾和去氧肾上腺素收缩主动脉环效应的影响
邵春红,王晓良

(中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 药理室,北京　100050)
摘　要: 目的　研究四逆汤对高钾和去氧肾上腺素 ( Phe) 收缩大鼠离体主动脉血管环效应的影响。方法　观察四
逆汤在主动脉环上拮抗 KCl ( 60 mmol/ L ) 和 Phe ( 1×10- 9～1×10- 4 mmol/ L ) 的收缩血管作用,分别用普萘洛尔
( P ro , 3×10- 6 mmo l/ L ) 和 Bay K8644 ( BK , 1×10- 5 mmo l/ L ) 干预探讨其机制。结果　四逆汤减弱累积浓度的
Phe 收缩血管的效应 ,最大值 ( T max) 减小, P ro 不影响四逆汤的拮抗作用; 四逆汤减小高钾刺激血管的最大收缩效
应, BK 不能恢复这种效应。结论　四逆汤使 Phe 的量效曲线右移, 并减小其最大效应值,表现为非竞争性拮抗作
用; 减小高钾收缩血管的作用, Ca2+开放剂 BK 不能恢复四逆汤的抑制作用。四逆汤能阻断
1受体, 其减弱高钾刺
激引起的血管收缩可能和钙通道无关。
关键词: 四逆汤; 去氧肾上腺素; 普萘洛尔; Bay K8644
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 09 0819 03
Effect of SINI TANG
*
on contraction of aortic rings induced by high K
+
and phenylephrine
SHAO Chun-hong, WANG Xiao-liang
( Depart ment of Pharmacolo gy , Insitute o f Mater ia Medica, CAM S & PUM C, Beijing 100050, China)
Abstract: Object　T o study the ef fects of SINI TANG ( SNT ) on the rat aort ic ring s pre-contracted
by high K
+
and phenylephrine ( Phe) . Methods　The effects o f SNT on the aort ic ring s in the presence of
60 mmol/ L KCl and Phe ( 1×10- 9—1×10- 4 mmo l/ L ) w ere observ ed and their mechanisms were studied
after t reatment with Propranolol ( Pro , 3×10- 6 mmol/ L ) and Bay K 8644 ( BK, 1×10- 5 mmol/ L ) as to ol
dr ug s. Results　SNT inhibited the contract ion induced by cumulat ive Phe and decreased the max imum ten-
sion ( Tmax ) ; Pro couldnt influence the ef fects of SNT . SNT at tenuated the amplitude of cont ract ile effect
·819·中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 34 卷第 9 期 2003年 9月

收稿日期: 2002-12-28基金项目:北京市自然科学基金项目 ( 7011002)作者简介:邵春红( 1972—) ,女,浙江人,博士后,研究方向为心血管药理学。