全 文 :表 3 可见, 经 5 m göL 青霉素溶液和 25 m göL 62BA
溶液处理后, 椭圆叶花锚种子平均发芽率有所提高,
但与对照无显著差异 (F = 1163< F 0105= 5114)。由
此可见, 这两种处理浓度虽可显著提高椭圆叶花锚
种子发芽率, 但对椭圆叶花锚种子在土壤中萌发影
响不大 (由于条件所限, 对其他处理未作详尽的室内
土壤播种研究) , 其原因有待进一步研究。
表 3 室温土壤播种椭圆叶花锚种子的发芽情况
Table 3 Germ ination of seeds sown in so il
a t room temperature
处理ö
(m g·L - 1)
平均发芽率ö%
重复 重复 重复
平均发芽率ö%
对照 4 8 6 6
青霉素 5 12 14 8 1113
62BA 25 14 4 14 1017
3 小结
青霉素 (5~ 40 m göL )、KCN (5~ 60 m göL )、
PEG26000 (5% )、GA 3 (20 m göL ) 溶液和 62BA (25、
75 m göL ) 的溶液可提高椭圆叶花锚种子发芽率、发
芽势; 而 15% 和 25% 的 PEG26000、80 m göL IAA、
160 m göL GA 3、100 m göL 62BA 溶液对椭圆叶花锚
种子萌发有抑制作用。综合效果来看, 25 m göL 62
BA 和 5 m göL 青霉素溶液处理种子效果较佳。室温
土壤播种试验中经药剂处理后的种子平均发芽率与
对照无显著差异。
致谢: 青海大学农牧学院的孙海群、杨国柱、李
希来、康守鑫、裴海 等老师参加了种子的采集工
作。
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三七药材中几种单体皂苷的含量测定
崔秀明1, 2, 徐珞珊1, 王 强13 , 陈中坚2Ξ
(11 中国药科大学中药学院, 江苏 南京 210009; 21 云南省文山州三七研究所, 云南 文山 663000)
三七药材为植物三七 P anax notog inseng
(Bu rk1) F1 H 1 Chen 的块根, 是五加科人参属名贵
中药材, 主要用于治疗冠心病、心绞痛等心脑血管系
统疾病[1~ 3 ]。三七的主要有效成分之一是三七皂苷
类成分, 其在三七中的含量最高, 有关药理活性研究
也较为系统和全面[1 ]。迄今为止, 从三七的不同部位
已经分离到了 30 余种单体皂苷成分[3~ 5 ]。三七皂苷
含量成为三七质量控制的主要依据。《中华人民共和
国药典》2000 年版规定了采用双波长扫描方法测定
三七中人参皂苷 R g1、R b1 的含量作为三七质量控
制指标[2 ]。近几年来, 采用H PL C 分析三七药材及
其制剂的皂苷含量的研究时有报道[6, 7 ]。但限于样品
来源的局限, 目前的报道仍缺乏全面系统的研究。笔
者采用 H PL C 方法, 系统分析了三七不同产地、不
同采收期、不同规格三七中单体皂苷R 1、R g1、R b1、
R d 的含量, 旨在为制定三七药材质量标准提供可靠
·8041· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004203219
基金项目: 云南省自然科学基金重点项目 (1999C0009Z)
作者简介: 崔秀明 (1963- ) , 男, 云南文山人, 云南省文山州三七研究所所长, 研究员, 中国药科大学在读博士研究生, 主要从事中药材
GA P 研究, 承担国家科技攻关项目, 成果转化项目及省级重大科技项目多项, 在国内外发表论文 40 余篇。
T el: (0876) 2141062 E2m ail: sanqi37@vip1sina1com3 通讯作者 T el: (025) 83316659 13851412275
的科学依据。
1 仪器、试剂与试药
111 仪器: W aters 600E 高效液相色谱仪,W aters
2487 UV 检测器,W aters M illenn ium 色谱工作站,
B rnason5200 超声仪器。
112 试剂与试药: 乙腈 H PL C 级, 甲醇分析级, 均
从 Sigm a 公司购买, 对照品人参皂苷R g1、R b1、R d
和三七皂苷R 1 (均购自中国药品生物制品检定所)。
三七药材不同采收期: 于文山州三七研究所试
验场定点定时采收三年生三七样品, 采收时期为 3
月至 11 月 (包含出苗期、展叶期、现蕾期、开花期、收
获期) , 每月采收 1 次, 每次采收 10~ 30 株。不同产
地: 于三七采收期 (10 月) 分别于云南文山、砚山、马
关, 广西靖西, 广东南雄采收; 所有样品均采收 30
株, 清洗干燥后取块根混合备用。不同规格: 于云南
文山同一块地采收, 每种规格 500 g。所有样品均经
云南省文山州三七研究所陈昱君研究员鉴定。
2 方法
211 色谱条件: 分析柱N ova2Pak C18 (300 mm ×
319 mm ) , 流动相: CH 3CN 250 mmo löL KH 2PO 4 ·
H 2O (20∶80)。二元梯度洗脱; 体积流量: 110 mL ö
m in, UV 检测器, 检测波长 203 nm , 进样量 10 ΛL。
色谱图见图 1。
12三七皂苷R 1 22人参皂苷Rg1 32人参皂苷Rb1 42人参皂苷Rd
12no toginseno side R 1 22ginseno side Rg1
32ginseno side Rb1 42ginseno side Rd
图 1 三七主要皂苷对照品(A)及药材样品(B) HPLC 图谱
F ig11 HPLC chromatogram of sapon in reference
substance (A) and P 1 notog inseng (B)
212 对照品溶液的制备: 分别取人参皂苷 R g1、
R b1、R d 及三七皂苷R 1 对照品 1 m g, 用甲醇配成 1
m gömL 对照品溶液。
213 供试品溶液的制备: 取待测样品 5 g, 加 70%
甲醇溶液 50 mL , 超声提取 2 h, 4 000 röm in 离心,
重复提取 3 次, 取上清液合并, 过 012 Λm 滤膜, 续
滤液作为供试品溶液。
214 标准曲线的制备: 分别取三七皂苷R 1、人参皂
苷R b1、R g1 和R d 1 m g, 加 70% 甲醇制成 1 m gömL
对照品溶液, 分别吸取对照品溶液 5、10、15、20 和
25 ΛL 作 H PL C 分析, 以峰面积对进样量进行回归
处理, 得回归方程 (表 1)。表明三七皂苷R 1, 人参皂
苷 R b1、R g1 和 R d 在 5~ 25 Λg 与峰面积呈良好线
性关系。
215 稳定性试验: 取同一份样品溶液, 分别在 0、1、
2、4、8、12、24、36、48 h 进行测定, 色谱峰面积和保
留时间的 R SD 分别为 113% 和 012% , 表明试验方
法稳定。
216 精密度试验: 取同一份供试品溶液, 连续进样
5 次, 色谱峰面积和保留时间的R SD 分别为 115%
和 013% , 仪器的精密度良好。
217 重现性试验: 取 5 份样品, 按测定方法测定, 色
谱峰面积和保留时间的 R SD 分别为 114% 和
012% , 重现性好。
218 加样回收率试验: 取已知含量三七样品 1 g, 精
密加入三七皂苷R 1、人参皂苷R b1、R g1 和R d 1 m g,
提取并测定各皂苷含量, 计算加样回收率 (表 1)。
表 1 三七皂苷及人参皂苷测定的标准曲线
和加样回收率 (n= 5)
Table 1 Cal ibration of notog in senoside and g in senosides
and the ir recovery (n= 5)
标准品 标准曲线 r 回收率ö% 线性范围
三七皂苷R 1 Y = 547 904 X + 240 765 01998 8 96 5~ 25 Λg
人参皂苷R g1 Y = 388 057 X + 678 882 01999 1 93 5~ 25 Λg
人参皂苷R b1 Y = 240 491 X + 175 137 01999 8 97 5~ 25 Λg
人参皂苷R d Y = 127 725 X + 65 269 01999 3 103 5~ 25 Λg
3 结果
311 三七不同规格的单体皂苷含量: 三七主根按传
统分为 20、30、40、60、80、120、160、200 头等规格
(“头”系指质量为 500 g 的干燥三七主块根个数)。
笔者分析了三七不同规格的三七皂苷R 1、人参皂苷
R g1、R b1 和 R d 含量, 20~ 60 头的 4 种单体皂苷有
逐步递减的趋势, 80 和 160 头的含量较高, 60 和
120 头含量相当 (表 2)。
表 2 不同规格三七的皂苷及人参皂苷含量分析
Table 2 Con ten ts of notog in senoside and g in senosides
from differen t grades of P 1 notog inseng
规格ö头 R 1ö% Rg1ö% Rb1ö% Rdö% 合计ö%
20 0154 4130 2156 0184 8125
30 0182 3161 1172 0186 7103
40 0164 3116 1176 0171 6126
60 0137 2134 1150 0177 4197
80 0156 3187 1180 0164 6188
120 0145 2199 1117 0136 4197
160 0162 4100 1172 0173 7105
200 0143 312 1151 0164 5178
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312 三七不同采收期的单体皂苷含量: 采收期对药
材的质量有重要影响, 是研究药材质量控制必须重
点考察的因素之一。根据三七的生长规律, 于三七生
长的第 3 年, 分不同时期采集样品, 并进行了单体皂
苷的含量分析。结果在三七不同的采收时期, 其皂苷
含量却有明显的变化。在三七生长的前期 (出苗期)
皂苷含量最高, 中期 (开花期)减少, 后期 (收获期)增
加, 与曾报道[8 ]过的研究结果一致 (表 3)。
表 3 不同采收期三七皂苷及人参皂苷含量分析 (n= 3)
Table 3 Con ten ts of notog in senoside and g in senosides from
differen t harvest times of P 1 notog inseng (n= 3)
采收时间ö月 R 1ö% Rg1ö% Rb1ö% Rdö% 合计ö%
3 0162 4159 2165 0196 8182
4 0170 4186 3147 0193 9198
5 0173 5104 2177 0192 9145
6 0163 3192 1190 0161 7106
7 0135 3144 1176 0173 6128
8 0172 3140 1162 0166 6141
9 0150 3183 2121 1109 7165
10 0155 4139 2116 1100 8109
11 0172 4101 1170 0181 7124
313 三七不同产地的单体皂苷含量: 三七的产地范
围分布较小, 目前仅有云南、广西和广东种植, 其中
云南文山三七种植占全国总面积的 90% 以上, 是公
认的地道三七产地。结果表明, 产地不同, 4 种单体
皂苷含量有一定差异, 同一产地的不同地区单体皂
苷含量也有不同 (表 4)。
4 讨论
411 《中华人民共和国药典》2000 年版中规定了三
七主根中R b1、R g1 的总量不低于 318% [2 ]。笔者认
为, 三七皂苷R 1 为三七特有的皂苷成分, R d 在三七
中的含量也较高, 应在评价指标中体现。通过对不同
产区三七根茎皂苷含量的测定, 三七根茎中R b1、
R g1、R 1、R d 的总量应不低于 5% 为宜。
412 H PL C 方法分析三七单体皂苷含量具有快速、
稳定、重现性好的特点, 可作为三七的质量控制方法。
413 云南是三七的道地产区, 分析结构表明, 总体
上云南三七单体皂苷含量比非道地产区的广西和广
东要高, 但云南产区之间也有差异; 不同采收期三七
单体皂苷的变化也是明显的, 提示固定产地和采收
期确实是保证三七药材质量的有效途径。至于不同
规格三七单体皂苷的含量, 其差异是明显的, 总体上
大规格三七含量较高, 小规格的较低, 但没有明显的
表 4 不同产地三七皂苷及人参皂苷含量分析 (n= 3)
Table 4 Con ten ts of notog in senoside and g in senosides from
differen t habita ts of P 1 notog inseng (n= 3)
产 地 R 1ö% Rg1ö% Rb1ö% Rdö% 合计ö%
W S3 2193 3 0122 4131 2116 1103 7171
W S222 0149 4104 2120 1103 7176
W S224 0180 4129 2193 1124 9126
W S225 0173 3165 2132 1109 7179
W S229 0172 4128 3109 1163 9172
W S231 0162 4146 2166 1146 9119
W S236 0169 4133 2178 1112 8192
W S239 0168 4121 2144 1157 8190
W S246 0165 4123 2163 1130 8180
W S257 0168 4139 2167 1107 8179
W S258 0143 4102 2150 1107 8103
GX201 0162 3181 2139 0176 7107
GX203 0161 3160 2154 1103 7118
GD 280 0146 3142 3100 0180 7168
3 W S 指文山; GX 指广西; GD 指广东。3 3 为样品编号3 W S m eans th is specim en co llected from W enshan, GX co l2
lected from Guangx i, GD co llected from Guangdong; 3 3 m eans se2
ries num ber of specim en
规律性, 有待进一步研究。
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