全 文 ：葛根中葛根素提取工艺的优化
丰理象 1 ,洪小军 1 ,庄林芳 2⒇
( 1. 浙江尖峰药业有限公司 ,浙江 金华 321003; 2. 杭州三九医药连锁有限公司 ,浙江 杭州 310003)
葛根始载于《神农本草经》 ,味甘、辛 ,性平 ,有解
表退热、生津止渴、止泻的功能 ,用于表症发热、无
汗、口渴、头痛项强、麻疹不透、泄泻、痢疾等。现代医
学证明葛根黄酮能降低血压和脑血管阻力。现在市
场上出现了许多以葛根为主药的新药 ,如葛根素葡
萄糖注射液、愈风宁心滴丸等。本实验以葛根素为指
标对葛根的提取方法进行了正交优化。
1 仪器与试药
Waters 515型高效液相色谱仪 , UV 2840紫外
分光检测器。 野葛 Pueraria lobata ( Willd. ) Ohw i
购于金华市医药公司 ,葛根素对照品 (中国药品生物
制品检定所 ) ,甲醇 (色谱纯 )。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件: 色谱柱: Wa ters C18柱 ( 150 mm×
4. 6 mm , 5μm);流动相: 甲醇-水 ( 25∶ 75) ;流速:
1. 0 mL /min;检测波长: 250 nm;进样量: 20μL。在
此条件下葛根素保留时间约在 11 min。
2. 2 正交试验设计: 取野葛药材适量 ,磨粉 ,过 40
目筛 ,备用。 根据野葛中葛根素的理化性质 ,影响因
素主要有乙醇浓度、溶剂量、提取时间 ,故以 L9 ( 34 )
正交表进行设计 ,因素水平见表 1,结果见表 2,方差
分析见表 3。
表 1 试验因素水平表
Table 1 Factors and levels
水 平 因 素
A乙醇浓度 /% B乙醇倍量 C加热时间 /h
1 85 13 5, 3, 3
2 90 11 4, 3, 3
3 95 9 3, 3, 3
可见各因素对提取效果影响程度依次为 A>
B> C,因素 A影响差异具有显著性 ,对提取影响最
大。实验分析得最佳条件为 A2 B2 C3 ,即用 90%乙醇
11倍量回流提取 3次 ,提取时间依次为 3, 3, 3 h。
验证试验: 精密称取同一葛根粉末 2. 0 g按最
佳提取工艺处理 ,试验结果与表中数据基本吻合。
2. 3 含量测定:
2. 3. 1 线性关系的考察:精密称取葛根素对照品适
量 ,加流动相制成 2. 0 mg /mL的溶液。吸取该溶液
1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0, 6. 0 mL分别置于 100 mL
量瓶中 ,用流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,取 20μL进样。
以峰面积为纵坐标 ,对照品浓度为横坐标 ,计算得回
归方程 Y= 74 218. 0X+ 1 025 270. 1, r= 0. 996 8。
结果表明葛根素在 20～ 120μg /mL。
表 2 正交试验方案和结果
Table 2 Results of L9 ( 34) orthogonal test
试验号 A B C 葛根素含量 / ( mg· g- 1)
1 1 1 1 5. 60
2 1 2 2 5. 68
3 1 3 3 5. 62
4 2 1 2 5. 80
5 2 2 3 5. 90
6 2 3 1 5. 86
7 3 1 3 5. 82
8 3 2 1 5. 88
9 3 3 2 5. 84
K 1 16. 90 17. 22 17. 34
K 2 17. 56 17. 46 17. 32
K 3 17. 54 17. 32 17. 34
R 0. 66 0. 24 0. 02
表 3 方差分析表
Table 3 Variance analysis
方差来源 方差平方和 自由度 均方 F值 P
A 0. 095 2 0. 047 5 95 P < 0. 05
B 0. 010 2 0. 005 0 10
C 0. 001 2 0. 000 5 1
D(误差 ) 0. 001 2 0. 000 5
F0. 05 ( 2, 2)= 19. 0 F0. 01 ( 2, 2)= 99. 0
2. 3. 2 溶液的制备 [1 ]: 精密称取葛根素对照品适
量 ,加水制成 2 mg /mL溶液。取该溶液适量用流动
相稀释成 80μg /mL溶液 ,摇匀 ,即得对照品溶液。
精密称取各产地葛根药材粉末 (过 40目筛 ) 2. 0 g,
按最佳工艺提取 ,取滤液于 100 mL量瓶中加流动
相稀释至刻度 ,过滤 ,取续滤液 2. 0 mL置 10 mL量
瓶用流动相定容至刻度 ,摇匀即得供试样品溶液。
2. 3. 3 样品含量测定: 取各样品溶液 20μL进样 ,
结果见表 4。
3 讨论
·812· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 34卷第 9期 2003年 9月
⒇ 收稿日期: 2002-12-13
表 4 各产地葛根中葛根素含量测定
Table 4 Content of puerarin in root of P .
lobata f rom diff erent regions
产地 葛根素 /% 产地 葛根素 /%
吉林 6. 43 河北 5. 26
陕西 6. 27 四川 4. 17
安徽 3. 26 江西 3. 23
福建 1. 67
3. 1 葛根经过醇提取后再加适量水使其沉淀 ,除去
水溶性杂质 ,进一步提高葛根素的纯度。
3. 2 各产地葛根中葛根素的含量差别很大。为了保
证产品质量 ,保障人民用药安全 ,应该制定葛根中葛
根素含量标准。
Reference:
[1 ] Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅠ .
穿琥宁在 7种输液中的稳定性考察
张韩清 1 ,王如伟 2⒇
( 1. 浙江省金华市中心医院 ,浙江 金华 321000; 2. 浙江省中药与天然药物研究院 ,浙江 杭州 370007)
穿琥宁 (脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐 ,
potassium dehydroandrog rapholide succina te,
PDS)是以穿心莲内酯为原料的半合成药物 ,具有抗
炎解热作用 ,对病毒性肺炎、病毒性上感及急性细菌
性痢疾等有较好疗效 [1 ]。笔者根据我院临床应用处
方对该药在 7种输液中的稳定性进行了研究。
1 仪器与试药
日本岛津 LC— 3A液相色谱仪 , SPD— 1型紫
外检测器 , C— R1A型色谱数据处理机 ;美国 Rheo-
dyne 7725型液相色谱进样器。
穿琥 宁对照 品 (四川 宜宾制 药厂 , 含量
99. 98% ) ,穿心莲内酯对照品 (中国药品生物制品检
定所 ) ,穿琥宁原料及其注射剂 (四川宜宾制药厂 )。
实验用水为重蒸馏水 ,其余试剂均为分析纯。葡萄糖
注射液、葡萄糖氯化钠注射液、氯化钠注射液、低分
子右旋糖酐注射液、甘露醇注射液均为北京双鹤制
药厂生产。复方醋酸钠注射液由 (中国人民解放军第
23医院提供 )。
2 方法与结果
2. 1 色谱柱: μBondapak C18柱 ( 250 mm× 4. 6
mm, 10μm);流动相: 甲醇 -水 ( 70∶ 30) ;流速: 1. 0
m L /min;检测波长: 250 nm;柱温:室温。
2. 2 线性范围考察:精密称取穿琥宁对照品适量 ,
用 50%甲醇溶解并稀释成 500μg /mL的贮备液 ,冰
箱内 4℃保存 ;精密量取该贮备液适量 ,用 50%甲
醇配成 25, 50, 100, 200, 300, 400μg /mL的溶液。各
进样 20μL,测定。以穿琥宁峰面积对对照品溶液浓
度进行线性回归 ,得回归方程: Y= - 25+ 912. 6X , r
= 0. 999 9。线性范围为 25～ 400μg /mL。检测限为
0. 1μg (S /N= 3)。
2. 3 精密度试验: 精密称取穿琥宁原料适量 ,用
50%甲醇溶解并配成高、中、低 3种浓度的溶液 ,同
法测定后代入当日标准曲线求出其含量 ,考察日内
及日间 ( 10 d)精密度。结果日内 RSD < 1. 15% , (n=
5) ,日间 RSD < 2. 44% (n= 11)。
2. 4 回收率试验: 精密称取已知含量 ( 99. 96% )的
穿琥宁原料适量 ,用 50%甲醇溶解并配成一定浓度
的溶液 ,加入不同量的穿琥宁对照品 ,依法进行测
定。 结果平均回收率为 100. 9% ～ 101. 8% , RSD为
1. 17% ( n = 5)。 精密量取 已知标示量含 量
( 90. 18% )的穿琥宁注射剂适量 ,用 50%甲醇配成
一定浓度的溶液 ,加入不同量的穿琥宁对照品 ,依法
进行测定。 结果平均回收率为 99. 45% , RSD为
1. 59% (n= 5)。
2. 5 配伍稳定性试验:穿琥宁注射液模拟临床常用
浓度与 7种输液配伍 (各配伍液含穿琥宁 1. 6
mg /mL)制成贮备液 ,在常温下放置 ,分别在 0, 1, 2,
4, 6, 9, 12, 24 h取各贮备液 1. 0 m L于 100 mL量瓶
中 ,加水至刻度 ,精密量取注射剂 (规格: 20 mg /
mL) 1 mL,置 100 mL量瓶中 ,用 50%甲醇稀释至
刻度 ,摇匀。精密量取 20μL注入色谱仪 ,记录色谱
图 ,求出穿琥宁含量。以 0 h含量为 100% ,不同时间
各供试品中穿琥宁注射液含量和贮备液的 pH测定
结果见表 1。
3 讨论
(下转第 843页 )
·813·中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 34卷第 9期 2003年 9月
⒇ 收稿日期: 2002-12-15