全 文 ：3　讨论
3. 1　激素对苦皮藤组织培养的影响:在苦皮藤愈伤
组织的诱导、分化过程中,生长素有一定作用, 以 2,
4-D 为好, 细胞分裂素效果不明显。细胞分裂素 6-
BA 对苦皮藤愈伤组织的继代培养有良好作用。较
高浓度的 6-BA 与一定浓度的 NAA 配合有利于苦
皮藤愈伤组织的分化, 但与 2, 4-D 配合效果较差。
究其原因与激素的性质有关。巴尔茨[ 7]发现在石刁
柏的愈伤组织中, 当用 6-BA 与 NAA 结合使用时,
可以诱导出芽, 而 6-BA 与 2, 4-D 结合使用时则不
能发生,本实验结果与巴尔茨的结论基本一致。
3. 2　外植体的部位对苦皮藤组织培养的影响: 在苦
皮藤组织培养过程中发现,正确的选择外植体的部
位非常重要。本试验以其子叶和胚轴为外植体获得
了成功,而从野外采回的叶片外植体诱导效果较差,
究其原因可能是子叶和胚轴的分生细胞较多、分化
程度较低而成熟叶片细胞分化程度高,所以在苦皮
藤组织培养中应选择细胞分化程度较低的部位。
3. 3　影响苦皮藤生根的因素:一般认为生长素与细
胞分裂素高比例有利于根的发生, 本试验在此比例
的培养基上没有观察到根的发生, 而发现只有添加
了多效唑的培养基上才有根的生成,并且苗生长健
壮、叶片翠绿,移栽成活率高。多效唑在苦皮藤的组
培苗生根方面具有明显的促进作用,并且矮化植株
使植株生长健壮, 还可增加叶片的叶绿素含量。这与
文献报道的植物生长延缓剂多效唑对试管苗不定根
的形成及培育壮苗、室外移栽有良好的作用[ 8]的结
果一致。另外, 在实验中发现,低盐对苦皮藤根的生
长发育有利。在加入多效唑和 IBA 的 MS 培养基
中,无论是光培养还是暗培养均没有根的产生。而使
用 1/ 2M S 培养基后, 均有根的产生。暗培养是苦皮
藤生根的重要因素, 经暗培养后生根率提高了
80% ,其原因可能与某些生根基因受光调控有关。
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HPLC法测定杜仲仁中桃叶珊瑚苷的含量
杨小梅, 尚平平,刘建斌,孙文基

(陕西省生物医药重点实验室 西北大学, 陕西 西安　710068)
　　杜仲仁为杜仲科植物杜仲 Eucommia ulmoid es
Oliv. 成熟种子的种仁, 含有脂肪油、蛋白质、糖类
及桃叶珊瑚苷等多种化学成分。目前的利用价值仅
限于从杜仲仁提取油脂。关于杜仲仁的研究,未见报
道,笔者从中提取分离出桃叶珊瑚苷, 并用 HPLC
法进行含量测定,测得杜仲仁中的桃叶珊瑚苷有较
高的含量。
1　仪器与试药
Beckman Coulter 高效液相色谱仪, Sy stem
Gold 125 Solvent Module, System Gold 168 Detec-
tor ;桃叶珊瑚苷对照品: 自制, T LC 检查为单一斑
点。HPLC 检测为单一峰, 归一化法计算纯度为
99%以上, 其甲醇溶液的紫外扫描图谱中
max =
206. 4 nm, 红外扫描图谱数据与西安交通大学药学
　　　　　　　　中草药　Chinese T radit ional and Herba l Drugs　第 34 卷第 10 期 2003年 10 月　　　　　　·附 7·

收稿日期: 2002-10-12作者简介:杨小梅( 1962- ) ,女,陕西省武功县人,学士学位,副主任药师。Tel: ( 0917) 3573739
* 通讯作者　Tel: ( 029) 8303569
院王军宪教授赠 aucubin对照品对照一致。杜仲仁
为陕西略阳产杜仲种子临用前剥去外壳的种仁;其
余试剂均为分析纯。
2　色谱条件
预柱: U SE U L TRASPHERE ODS dp ( 4. 6
mm ×4. 5 cm×5 m ) ; 色谱柱: USA U L TRAS-
PHERS ODS dp ( 4. 6 mm×25 cm , 5
m) ;流动相:
乙腈-水( 3∶97) ; 检测波长: 206nm; 柱温(室温) : 25
℃;流速: 1. 0 mL/ min; 进样量: 20
L。分离结果见
图 1-A, B。
3　方法与结果
3. 1　线性关系考察:精密称取桃叶珊瑚苷对照品
8. 71 mg 置 50 mL 容量瓶中, 用 30%甲醇溶液定
容,精密吸取 0. 2, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0 mL,分别
置于 10 mL 量瓶中,用 30%甲醇溶液定容。将配制
成不同浓度的对照品溶液进样, 以峰面积为纵坐标,
对照品溶液浓度为横坐标, 进行线性回归, 得回归方
程为: Y = 2. 793×103X + 3. 758×103, r= 0. 999 4,
桃叶珊瑚苷的浓度与峰面积具有良好的线性关系,
线性范围为 3. 48～87. 10
g/ mL。
3. 2　精密度试验: 精密吸取浓度为 69. 68
g/ mL
的对照品溶液 20
L, 重复进样 5次, 记录峰面积,
计算 RSD为 1. 1% ( n= 5)。
3. 3　稳定性试验: 取该对照品溶液在 0, 4, 8, 20,
26, 48 h,分别进样20
L, 记录峰面积,计算RSD为
1. 5% ( n= 6) ,表明桃叶珊瑚苷 30%甲醇溶液在 48
h 内是稳定的。
3. 4　重复性试验:取同一供试样品 5份,精密称定,
按样品测定项下的方法进行含量测定, 结果平均含
量为 2. 98% , RSD为 2. 7%( n= 5)。
3. 5　回收率试验:精密称取已测定含量的同一供试
样品 5份,再精密加入桃叶珊瑚苷对照品 1. 00 mg ,
按样品测定项下的方法操作, 平均回收率为
94. 8%, RSD= 1. 9% ( n= 5)。
3. 6　提取条件的选择
3. 6. 1　提取溶剂的选择: 桃叶珊瑚苷易溶于水、甲
醇, 故选用 30%, 50%甲醇溶液及甲醇为溶剂进行
提取,结果甲醇的浓度越高,与桃叶珊瑚苷成分色谱
峰相邻的杂质峰含量越高, 而且两个峰不能很好分
离。30%甲醇提取,色谱中无此杂质峰,见图 1。故选
用 30%甲醇溶液为溶剂。
3. 6. 2　实验中用乙醚去油脂,再用冷浸法提取,结
A-桃叶珊瑚苷对照品　B-30%甲醇提取样品　C-50%甲醇提取样品　D-甲醇提取样品
A-au cubin　B-samp le ex tr acted by 30% MeoH　C-sample ext racted by 50% M eoH　D-sam ple ext racted by M eoH
图 1　对照品(A)及样品(B,C, D)色谱图
Fig. 1　Chromatograms of chemical reference substance (A) and samples (B,C,D)
果桃叶珊瑚苷成分损失很大,回收率只有 73%左右。
3. 6. 3　超声处理与冷浸法比较:超声处理的样品杂
质成分增大很多, 即影响滤过, 又使色谱峰分离不
好,用冷浸法比较理想。
3. 6. 4　用 30%甲醇溶液提取过程中,室温放置,溶
液的颜色发生变化,室温越高变化越快, 15℃放置6
h 颜色加深, 25℃放置 1 h后颜色即发生变化。提取
时将样品置冰箱中放置过夜,样品溶液颜色不变,再
放置,也无变化。故以 30%甲醇溶液冷浸提取, 样品
溶液稳定。
3. 7　样品测定: 杜仲仁研细,精密称取细粉 0. 1 g,
置 50 mL 容量瓶中,加 30%甲醇溶液 40 mL,振摇5
min,置冰箱中过夜。取出,放至室温,再振摇 10 min
加 30%甲醇溶液至刻度, 摇匀, 过滤, 弃去初滤液,
取续滤液用滤膜滤过后进样检测。结果见表 1。
表 1　样品测定
Table 1　Samples determination
样品 桃叶珊瑚苷的含量/ % RSD/ %
1 2. 98 2. 7( n= 5)
2 0. 87 2. 1( n= 3)
　　另外用同样的方法测定杜仲植物不同部位桃叶
珊瑚苷的含量情况, 结果见表 2(干皮: 宝鸡市药检
所中药标本, 皮厚 0. 3 cm, 胶丝致密; 干皮(鲜) : 四
月初采于陕西陇县, 皮厚 0. 5 cm ,胶丝较疏;枝皮:
市售品,皮厚 0. 1 cm, 胶丝致密; 嫩叶: 四月初采于
陕西陇县。)
4　讨论
4. 1　用 30%甲醇提取时, 室温放置发生颜色变化,
·附 8·　　　　　　　中草药　Chinese T raditiona l and Herbal D rugs　第 34 卷第 10期 2003 年 10 月　　　　　　
表 2　植物杜仲中各部位桃叶珊瑚苷的含量(按干燥品计算)
Table 2　Content of aucubin in dif ferent parts
of E . ulmoides ( for dried samples)
部位 含量/ % 部位 含量/ %
干皮 0. 43 嫩叶 0. 53
干皮(鲜) 0. 27 种仁 2. 98
枝皮 0. 38 种子外壳 未检出
置冰箱中冷藏却稳定, 推测杜仲仁中可能有酶存在,
在室温下发生了水解及聚合反应。
4. 2　杜仲仁中含有大量的脂肪油,影响桃叶珊瑚苷
成分的浸出。因此, 杜仲仁的粒度会影响含量测定,
测定时最好研成细粉。
4. 3　样品溶液的稳定性:在样品提取过程中已经发现
它的不稳定性, 所以将滤液保存于冰箱中,在测定前取
出放至室温,用滤膜滤过进样, 1 h 内基本稳定。
4. 4　从样品测定结果发现,杜仲仁中桃叶珊瑚苷的
含量差异很大, 这是否与其干燥的条件、采收时间等
因素有关;另外,能否用桃叶珊瑚苷的含量大小来衡
量杜仲仁的质量,有待于进一步研究探讨。
HPLC法测定五味子茎藤中木脂素的含量
于俊林1 ,秦　 1 ,胡彦武1,赵宏宇2,宿艳霞2,高　巍2

( 1. 通化师范学院 药学系, 吉林 通化　134002; 2. 吉林修正药业集团股份有限公司, 吉林 通化　134001)
　　五味子 S chisandra chinensis ( T urcz. ) Baill.
主产于东北的东部山区,其成熟果实称北五味子,是
著名的长白山道地药材, 具有益气生津、补肾养心、
收敛固涩的作用。五味子的主要有效成分为木脂素
类成分,以五味子甲素、五味子乙素为代表, 有明显
的促进肝糖元生成、降低肝炎患者血清谷丙转氨酶
水平、保护肝细胞的作用, 是预防和治疗肝炎的要
药。近来还发现五味子中的木脂素成分有抗癌、抗艾
滋病和 PAF 拮抗等多种生物活性[ 1]。
北五味子作为常用的中药主要来源于野生资
源,由于森林面积的减少,加之人们对五味子果实的
掠夺性采收, 致使北五味子的产量逐年减少,为了扩
大药源,我们参考《中华人民共和国药典》的方法[ 2]
对五味子茎藤中的木脂素成分进行了定性检识和含
量测定。
1　实验材料
五味子果实: 2001年 9月采自吉林省通化市左
安,阴干备用。五味子茎藤: 2002年 4月采自吉林省
通化市左安, 按生长节区分并分离 1～6年生长以上
枝条,选 6年生以上的茎藤分离韧皮部和木质部,阴
干,粉碎过 3号筛粉末,备用。以上材料均经通化师
范学院药学系于俊林研究员鉴定。
2　仪器与药品
日本岛津 CLASS- VP; 五味子甲素、五味子乙
素购于中国药品生物制品检定所;色谱用甲醇, 天津
四友化学试剂厂, 色谱纯; 硅胶 GF254, 青岛海洋化
工厂;其他试剂为分析纯。
3　方法与结果
3. 1　对照品液和供试品液的制备:精密称定五味子
甲素、乙素对照品各 5 mg , 分别用甲醇定容至 20
mL,作五味子甲素和乙素的对照品溶液。精密称定
各实验材料约 0. 5 g ,分别置于 20 mL 容量瓶中, 加
甲醇 18 mL,超声处理20 min,取出,加甲醇至刻度,
摇匀,滤过,作供试品溶液。
3. 2　薄层色谱:用定量毛细管分别吸取 2种对照品
溶液和 8种供液品溶液各 5
L,分别点于同一块自
制的硅胶 GF254- CMC-Na 薄层板上, 以石油醚
( 30 ℃～60 ℃) -甲酸乙酯-甲酸( 15∶5∶1)的上层
溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 在紫外灯 ( 254
nm )下检视, T LC图谱如图 1所示。
3. 3　HPLC定量分析
3. 3. 1　色谱条件: YWG- C18柱; SPD- 10A VP 紫
外检测器, 检测波长 254 nm; 流动相为甲醇-水
( 13∶7) ; 流速 1. 8 mL/ min; 室温。
3. 3. 2　线性关系考察:分别准确吸取五味子甲素和
乙素对照品溶液各 2, 6, 10, 14, 18
L, 进样,分别以
五味子甲素和乙素的量为横坐标,以峰面积为纵坐
标, 进行线性回归, 得回归方程为: 五味子甲素
Y = - 24 232+ 1 351 033X , r= 0. 999 4; 五味子乙
素Y= - 28 965+ 1 025 618X , r= 0. 999 6; 五味子
　　　　　　　　中草药　Chinese T radit ional and Herba l Drugs　第 34 卷第 10 期 2003年 10 月　　　　　　·附 9·

收稿日期: 2003-03-04作者简介:于俊林( 1962- ) ,男,吉林省长春市人, 1982年毕业于吉林农业大学中药材学院,现任通化师范学院药学系研究员, 主要从事药用植物学及资源开发利用的教学与研究工作。Tel: ( 0435) 3976161　E-mail : yujunlin 1962@ 163. com