全 文 ：测定熊胆中结合型的胆汁酸 [7 ]。
3. 3　本法首次在常规条件下一次性分离 9种结合
及游离型胆汁酸 ,仅基线在改变洗脱溶剂比例时会
抬高 ,但总的来说并不影响其定量的可靠性。
References:
[1 ]　 Muraca M, Ghoos Y. Glyco-7α-dihydroxy-5β-cholanic acid as
internal stand ard fo r high-p ressure liquid ch romatographic
analysi s of conjugated bi le acid s [ J] . J Lipid Res , 1985, 26:
1009-1011.
[2 ]　 Ghoos Y, Rutg eerts P, Vant rapp en G. Tauro-7α, 12α-dihy-
d rox y-5β-ch olanic acid as internal s tandard in the gas-liquid
ch romatograph ic analysi s of bi le acid m ethyl es ter acetates
[ J] . J Lipid Res , 1983, 24: 1376-1379.
[3 ]　 Zeng W G, Tian S J, Tu G S. Analysi s of bi le acids by HPLC
[ J ]. Ch in J Pharm Anal (药物分析杂志 ) , 1989, 9( 5): 284.
[4 ]　 Hofmann A. Thin-layer adso rp tion ch romatograph y of f ree
and conjugated bile acid s on silic acid [ J]. J Lipid Res , 1962,
3: 127-128.
[5 ]　 Nakayama F, Nak agaki M . Quan ti tive determinat ion of bile
acids in bi le w ith rev ers e-phase high-performance liquid ch ro-
matog raph y [ J ]. J Ch roma to gr , 1980, 183: 287-291.
[6 ]　 Reid A D, Baker P R. High performance liquid ch romatogra-
phy of bi le acids wi th a rev ers ed-ph ase radial comp ression
cloumn [ J] . J Ch romatog r , 1982, 247: 149-156.
[7 ]　 Zhang Q M, Yuan H N. Determination of conjug ated bile
acids in Fel Ursi b y HPLC [ J] . Ch in J Pha rm Anal (药物分
析杂志 ) , 1993, 13( 5): 321-323.
[8 ]　 Pat rick P H, El liot t W H. Analysi s of bi le acids s eerol s by
high-performance liquid chromatog raph y w ith a microbore col-
umn [ J] . J Ch romato gr , 1985, 347: 155-162.
RP-HPLC法测定芪参胶囊中丹参酮Ⅱ A的含量
李　钦 1, 2 ,韩　光 1, 2 ,许启太 1 ,贾天柱 2 ,程铁峰 1
( 1. 河南大学药学院 ,河南 开封　 475001; 2. 辽宁中医学院 ,辽宁 沈阳　 110032)
　　芪参胶囊主要由黄芪、丹参、人参、茯苓、三七、
玄参、水蛭等组成 ,具有益气活血、化瘀止痛功效 ,用
于冠心病稳定型心绞痛证属气虚血瘀者。 丹参为主
要君药 ,主要成分为丹参酮Ⅱ A、隐丹参酮、丹参素、
原儿茶醛等 ,其中丹参酮Ⅱ A为主要活性成分。丹参
酮Ⅱ A的测定方法有高效液相色谱法 [1～ 3 ]、超临界流
体萃取联用毛细管气相色谱法 [4 ]等。芪参胶囊原质
量标准中采用薄层扫描法测定丹参酮Ⅱ A的含量。
为了提高其标准 ,本实验采用 HPLC法测定丹参酮
Ⅱ A的含量 ,结果符合有关规定 ,可用于该制剂的质
量控制。
1　仪器与试药
日本岛津 LC— 10A液相色谱仪 , CR— 3A记录
仪 , SPD— 10AV检测器 , SIL— 10A自动进样器。
丹参酮Ⅱ A对照品 (中国药品生物制品检定所 ,
批号: 0766-9909,供含量测定用 ) ,甲醇、乙腈为色谱
纯 ,水为重蒸馏水。芪参胶囊由新谊医药集团生产 ,
规 格: 0. 5 g /粒 , 批 号: 20031012、 20031015、
20031018)。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件:色谱柱: Shim pack CLC-O DS( 150
mm× 6. 0 mm );柱温: 40℃ ;流动相: 甲醇 -乙腈-水
( 35∶ 40∶ 25) ;体积流量: 1. 0 mL /min;检测波长:
270 nm。在上述色谱条件下 ,丹参酮Ⅱ A峰的保留时
间约为 18. 6 min,与共存的其他成分分离良好 ,以
丹参酮Ⅱ A峰计算色谱柱的理论板数为 6 263。
2. 2　对照品溶液制备: 精密称取丹参酮Ⅱ A对照品
适量 ,加甲醇溶解 ,制成每 4μg /mL的溶液 ,置棕色
量瓶中备用。
2. 3　供试品溶液制备: 取本品装量差异项下内容
物 ,研细 ,精密称取 3 g ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入
甲醇 25 mL,称重 ,超声处理 (功率 250 W ,频率 33
kHz) 20 min,取出 ,放冷 ,称重 ,补足减失的质量 ,摇
匀 ,滤过 ,取续滤液经 0. 45μm微孔滤膜滤过 ,溶液
置棕色瓶中备用。
2. 4　空白试验:按处方比例及工艺自制不含丹参的
阴性样品 ,按供试品溶液的制备方法处理 ,进样。 结
果处方中其他药材和辅料不干扰测定 ,见图 1。
2. 5　线性关系的考察: 精密称取丹参酮Ⅱ A对照品
10. 50 mg ,置 100 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀。精密吸取 1 m L置 25 mL量瓶中 ,加甲
醇稀释至刻度 ,摇匀 ,制成 0. 004 2μg /mL的溶液。
分别精密吸取 3、 5、 7、 9、 11μL溶液进样 ,测定色谱
峰面积。 以进样量为横坐标 ,色谱峰面积为纵坐标 ,
绘制标准曲线 ,回归得回归方程: Y= 1 022 773. 81
X - 8 525. 15, r= 0. 999 9。 结果表明丹参酮Ⅱ A在
·1257·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 35卷第 11期 2004年 11月
收稿日期: 2004-03-27作者简介:李　钦 ( 1965— ) ,男 ,河南中牟人 ,博士研究生 ,副教授 ,研究方向为中药质量标准及炮制工艺。
Tel: ( 0378) 5956970　 E-mail: liqin@ henu. edu. cn
* -丹参酮Ⅱ A
* -tanshinoneⅡ A
图 1　芪参胶囊 (A)、丹参酮Ⅱ A对照品 (B)
和阴性溶液 (C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatogram of Qishen Capsule ( A) ,
tanshinoneⅡ A (B) , and negative solution (C)
0. 012 6～ 0. 046 2μg与峰面积线性关系良好。
2. 6　精密度试验: 取供试品溶液 5μL,在上述色谱
条件下连续进样 6次 ,分别测定丹参酮Ⅱ A峰面积 ,
结果 RSD= 1. 52%。
2. 7　重现性试验: 取同一批号 ( 20031005)样品 5
份 ,分别研细 ,精密称取粉末 3 g,精密称定 ,分别依
法进行测定 ,测得丹参酮Ⅱ A的质量分数为 0. 045
mg /g , RSD= 2. 46%。
2. 8　稳定性试验: 取同一份供试品溶液 ,配制后置
棕色瓶中 ,分别在 0、 2、 4、 6、 8 h进样测定峰面积 ,结
果丹参酮Ⅱ A峰面积的 RSD为 1. 06% ,表明供试品
溶液在 8 h内稳定。
2. 9　回收率试验考察: 取同一批号 ( 20031005)样
品 ,内容物 5份 ,研细 ,取粉末 3 g,精密称定 ,精密加
入丹参酮Ⅱ A对照品溶液 ( 0. 011 7 mg /mL) 10. 0
m L,按样品含量测定项下方法操作 ,测定 ,结果平均
回收率为 96. 8% , RSD= 1. 53% (n= 5)。
2. 10　样品测定: 分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 5μL,注入液相色谱仪 ,测定 ,计算 ,结果 3
批样品 (批号: 20031005、 20031008、 20031011)中丹
参酮Ⅱ A质量分数分别为 0. 23、 0. 31、 0. 38 mg /粒
(n= 3)。
3　讨论
3. 1　流动相的选择: 考察了甲醇-水、甲醇 -乙腈 -水
系统 ,结果表明以甲醇 -乙腈-水 ( 35∶ 40∶ 25)为流
动相时 ,丹参酮Ⅱ A的分离效果及峰形最好。
3. 2　检测波长的选择: 取丹参酮Ⅱ A对照品的甲醇
溶液在 200～ 400 nm波长测定紫外吸收光谱 ,结果
丹参酮Ⅱ A在 268. 4、 223. 0 nm波长处有最大吸收 ,
其中 268. 4 nm处的吸收系数较大 ,参考有关文
献 [5 ] ,故选择 270 nm为检测波长。
3. 3　提取溶剂的选择: 根据丹参酮Ⅱ A的化学性
质 ,实验中以乙醇和甲醇为溶媒 ,丹参酮Ⅱ A的提取
量为指标加以考察 ,结果两种溶媒提取效率基本相
同。 鉴于乙醇提取液中其他组份较多 ,易污染色谱
柱 ,故选用甲醇为提取溶剂。
3. 4　超声时间的考察:对超声处理制备供试品溶液
进行了考察。结果显示 ,超声提取 20 min和 30 min
时丹参酮Ⅱ A的提取率相近。为保证提取完全 ,确立
超声处理时间为 30 min。
References:
[1 ]　 Xiao X F. Determination of tan shinon e Ⅱ A in Ganzhikang
Granule [ J ]. J Tianjin Coll Tra dit Ch in Med (天津中医学院
学报 ) , 2002: 21( 2): 34.
[2 ]　 Liang X Y, Hou A G, Qian Z G. et al . Study on determina-
tion of tanshin on eⅡ A b y HPLC [ J ]. J Yunnan Col l Tradi t
Ch in Med (云南中医学院学报 ) , 2000, 23 ( Suppl): 20.
[3 ]　 Chen B, Zhu M, Xing W X, et a l. Quant itative determination
of tanshinone Ⅱ A in Salvia m il tiorrhiza Bge. b y SFE-CGC
[ J ]. Acta Pharm Sin (药学学报 ) , 2001, 36( 1): 55-57.
[4 ]　 He H. Determination of cryp totanshin one and tanshinoneⅡ A
in Xiaoyankun by HPLC [ J ]. Chin J Tra dit Vet Sci (中兽医
学杂志 ) , 2003, ( 5): 37.
[5 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. Vol Ⅰ . 2000.
敬　告　读　者
　　《中草药》杂志编辑部尚存部分过刊合订本 ,包括: 1974-1975年 , 1976年 , 1979年 , 1985～ 1994
年 ( 80元 /年 ) ; 1995～ 1997年 ( 110元 /年 ) , 1998年 ( 120元 ) , 1999年 ( 135元 ) , 2000年 ( 180元 ) ,
2001年 ( 200元 ) ; 2002年 ( 200元 ) ; 1996年增刊 ( 50元 ) , 1997年增刊 ( 45元 ) , 1998年增刊 ( 55元 ) ,
1999年增刊 ( 70元 ) , 2000年增刊 ( 70元 ) , 2001年增刊 ( 70元 ) , 2002年增刊 ( 65元 ) , 2003年增刊
( 65元 ) , 2004年增刊 ( 65元 )。 欢迎订购 ,电话: ( 022) 27474913; ( 022) 23006821(传真 )。
·1258· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 35卷第 11期 2004年 11月