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当归 HPLC指纹图谱研究( Ⅰ)
马华侨 ,邸多隆 ,邵士俊 ,刘 　霞 ,蒋生祥 Ξ
(中国科学院兰州化学物理研究所 西北天然药物研究发展中心 ,甘肃 兰州 　730000)
摘 　要 :目的 　建立甘肃当归药材 HPLC 指纹图谱。方法 　以联苯为参照物 ,采用 C18 (250 mm ×416 mm ,5μm)色
谱柱 ,以甲醇2水 (水中含体积比为 015 %醋酸)为流动相 ,梯度洗脱 ,体积流量 016 mL/ min ,检测波长为 275 nm ,参
比波长为 400 nm。结果 　精密度、重现性、稳定性试验中共有峰相对峰面积、相对保留时间的 RSD 均小于 510 % ;
不同产地当归相似度大于 9815 %。结论 　该方法简便、实用、可靠 ,可以作为评价当归药材的质量标准。
关键词 :当归 ;高效液相色谱 ;指纹图谱 ;联苯 ;质量控制
中图分类号 :R282171013 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2004) 08 0930 03
HPLC f ingerprint of Angelica sinensis ( Ⅰ)
MA Hua2qiao , DI Duo2long , SHAO Shi2jun , L IU Xia , J IAN G Sheng2xiang
(Research and Development Center of Northwest Natural Products , Lanzhou Institute of Chemical Physics ,
Chinese Academy of Sciences , Lanzhou 730000 , China)
Abstract : Object 　Reversed2phase high performance liquid chromatography ( RP2HPLC) fingerprint of
A ngelica si nensis (Oliv. ) Diels. grown in Gansu Province was established1 Methods 　Chromatographic condi2
tions were available as follows : Biphenyl as reference material , C18 column (250 mm × 416 mm , 5 μm) ,
methanol and water including 015 % acetic acid as mobile phase , flow rate 016 mL/ min , gradient elution , the
detection wavelength was set to 275 nm and 400 nm as reference wavelength1 Results 　The RSD of relative
peak areas and retention time of common peak in precision , repeatability , and stability has not reached 510 % ,
respectively1 Similarity was over 9815 % in A . si nensis collected from different habitats1 Conclusion 　All re2
sults above exhibited that this method is simple , practicable , and reliable as a standard method in controlling the
quality of A 1 si nensis1
Key words : A ngelica si nensis (Oliv1) Diels ; HPLC ; fingerprint ; biphenyl ; quality control
　　当归为伞形科植物当归 A ngelica si nensis
(Oliv1) Diels 的干燥根 ,作为临床中常用药材 ,已有
两千多年的药用历史。当归有活血化瘀 ,润肠止痛
之功效[1 ,2 ] ,是传统的名贵药材。产于甘肃岷县的
当归 (又称岷归)是《中华人民共和国药典》收载的正
品当归 ,其资源极为丰富 ,有资料显示 ,仅甘肃定西
地区 ,岷归种植面积和产量均占全国的 70 %左右。
当归化学成分复杂[3 ,4 ] ,单一成分的确认难以代表
其质量 ,为了控制当归药材质量 ,按照国家药典委员
会关于“中药注射剂指纹图谱研究的技术要求 (暂
行) 的通知”的要求 , 并参照相关文献 [5 ,6 ] , 采用
HPLC 方法对甘肃岷县等地种植的当归药材进行了
指纹图谱研究。实验证明 ,该方法简便、可靠、重现
性好 ,可作为当归药材及其制剂指纹图谱研究的基
·039· 中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 35 卷第 8 期 2004 年 8 月
Ξ 收稿日期 :2004202207
基金项目 :中国科学院 2001 年度“西部之光”资助项目 ;中国科学院兰州化学物理研究所 2000 年度知识创新领域前沿项目
作者简介 :马华侨 (1979 - ) ,男 ,安徽宿州人 ,硕士研究生 ,主要研究方向为中药色谱指纹图谱。3 通讯作者　Tel : (0931) 8275941 　Fax : (0931) 8277652 　E2mail :sxjiang @ns1lzb1ac1cn
础 ,也可为当归药材 GAP 生产基地建设提供技术和
理论依据。
1 　材料
111 　当归样品的采集 :当归试样分别在能够反映当
归当前种植水平的主产区 ,甘肃岷县、渭源县、漳县实
地采取[品种经甘肃省药品检验所宋平顺主任药师鉴
定为 A ngelica sinensis (Oliv1) Diels] ,按《中华人民共
和国药典》规定中药材取样法取样 10 批 ,具体如表 1。
表 1 　当归样品来源
Table 1 　Origin of A1 sinensis
样品批号 产　　地 　样品批号 产　　地
1 甘肃省岷县 　　　6 甘肃省渭源县
2 甘肃省岷县 7 甘肃省渭源县
3 甘肃省岷县 8 甘肃省漳县　
4 甘肃省岷县 9 甘肃省漳县　
5 　甘肃省渭源县 10 甘肃省漳县　
112 　仪器与试剂 :Agilent 1100 系列高效液相色谱
仪 ;水为二次蒸馏水 ,醋酸为分析纯 (天津化学试剂
厂) ,甲醇为色谱纯 (山东省禹王实业集团禹城化工
厂) ,联苯 (Aldrich 公司 ,美国) 。
2 　方法
211 　色谱条件 :C18反相色谱柱 (250 mm ×416 mm ,
5μm ,中国科学院兰州化学物理研究所色谱研究发
展中心) ,流动相为 015 %醋酸水溶液 (A)2甲醇 (B) ,
梯度洗脱 : 0 min A2B ( 70 %～ 30 %) , 20 min A2B
(30 %～70 %) ; 70 min A2B (0～100 %) ;紫外检测
波长为 275 nm ,参比波长为 400 nm ;进样体积 20
μL ;柱温 25 ℃。
212 　供试品的制备 :取当归干燥根粉碎 ,过 40 目
筛 ,准确称取 2100 g 于具塞三角烧瓶中 ,加 50 %甲
醇水溶液 40 mL ,超声提取 45 min ,离心 15 min ,
0145μm 膜滤过 ,备用。
213 　内标溶液的配制 :用联苯做内标 ,称取 519 mg
溶于 50 mL 甲醇中 ,备用。
214 　方法学的考察
21411 　精密度试验 :取 5 号供试品溶液 ,连续进样
5 次 ,测得各共有峰相对保留时间和相对峰面积的
RSD 均小于 5 % ,表明精密度良好。
21412 　稳定性试验 :取 7 号供试品溶液 ,分别在 0、
2、4、6、8、12 h 进样 ,测得各共有峰相对保留时间和
相对峰面积的 RSD 均小于 5 % ,表明样品溶液在 12
h 内稳定。
21413 　重复性试验 :取供试品 10 号样 6 份 ,精密称
量 ,按“212”项下方法制备供试品溶液 ,分别进样 ,测
得各共有峰相对峰面积的 RSD 小于 5 % ,表明其重
复性较好。
3 　结果与讨论
311 　共有峰的标定 :对上述条件下的液相色谱指纹
图谱分析比较和对已知化合物的确认 ,找出比较稳
定的色谱峰共 18 个 ,具体如图 1 ,表 2。
S2内标
S2internal standard
图 1 　3 种不同产地当归 HPLC指纹图谱
Fig11 　HPLC f ingerprint of A1 sinensis collected
from three different habitats
312 　相似度计算 :指纹图谱相似度的测定方法有多
种 ,文献[7 ]表明夹角余弦测度用于度量指纹图谱间
峰比例的波动较适宜 ,峰匹配测度可较灵敏地检测
小峰个数波动 ,夹角余弦测度更适于分析评价不同
批次间药品质量稳定性。本实验就是以供试品的各
峰平均值为对照模板 ,初步采用夹角余弦的方法来
计算当归指纹图谱相对峰面积的相似度 ,并计算相
关系数 ,结果如表 3。
313 　色谱条件的选取与优化 :以甲醇作为有机改性
剂用于流动相 ,并用不同的梯度方式考察了色谱分离
能力。以甲醇为流动相添加剂时 ,色谱峰容量大 ,分
离度较好 ,稳定性较高 ,最终选取以甲醇为有机改性
剂时的梯度洗脱方式 ,当归 HPLC分离结果如图 1。
314 　波长的选取 :在上述“212”提取条件和“211”色
谱分离条件下 ,对全当归药材提取物进行了 DAD 紫
外扫描 ,经分析研究 ,选定了 275 nm 为检测波长 ,400
nm 为参比波长时 ,色谱峰较为均匀 ,基线也较稳定。
315 　本研究中相对保留时间数据表明 ,当归有很好
·139·中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 35 卷第 8 期 2004 年 8 月
表 2 　当归药材指纹图谱共有峰的相对峰面积
Table 2 　Relative peak areas of common peak for f ingerprint of A1 sinensis
批号
相　　对　　峰　　面　　积
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 S 17 18
　1 01439 01324 01113 01556 01064 01416 01096 01115 01052 01058 01057 01090 01436 31558 01286 01077 11000 01063 01089
2 01648 01320 01152 01832 01090 01513 01147 01190 01092 01076 01097 01175 01526 41411 01358 01116 11000 01092 01120
3 01591 01212 01128 01713 01075 01482 01100 01132 01050 01053 01065 01115 01443 31874 01377 01076 11000 01075 01100
4 01692 01229 01055 01534 01038 01293 01073 01063 01081 01021 01032 01216 01425 51635 01194 01174 11000 01392 01197
5 01453 01330 01125 01631 01059 01412 01099 01132 01053 01060 01043 01075 01412 31123 01271 01084 11000 01071 01068
6 01509 01145 01123 01575 01081 01371 01100 01096 01040 01064 01053 01018 01331 11084 11199 01093 11000 01062 01098
7 01572 01241 01097 01502 01067 01528 01129 01124 01059 01077 01078 01271 01365 31083 01292 01173 11000 01393 01205
8 01463 01259 01150 01862 01062 01555 01119 01151 01070 01065 01074 01025 01421 41932 01411 01081 11000 01177 01083
9 01300 01266 01205 01438 01118 01720 01154 01147 01136 01115 01110 01737 01518 31497 01448 01128 11000 01075 01106
10 01474 01101 01125 01114 01734 01049 01461 01109 01093 01057 01071 01063 01417 51381 01349 01077 11000 01180 01082
表 3 　不同产地当归相似度比较
Table 3 　Comparison of similarity of A1 sinensis
collected from ten habitats
批　号 夹角余弦 相关系数
1 01995 4 01994 4
2 01998 5 01998 5
3 01999 0 01998 9
4 01992 6 01994 1
5 01997 7 01997 4
6 01986 0 01985 1
7 01987 5 01987 9
8 01997 7 01997 9
9 01985 0 01984 0
10 　 01994 7 01997 0
的指纹性。虽然不同产地的当归共有指纹峰面积是
有差异的 ,有的相差还很大。但三地当归相似性很
好 ,说明三地当归总体上是没有差异的。有关当归
质量控制与评价方面的进一步研究工作将另文报
道。
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黄花乌头体细胞胚胎发生及其植株再生
于荣敏1 ,3 ,徐秀泉2 ,赵 　昱3 Ξ
(11 暨南大学药学院 ,广东 广州 　510632 ; 　21 江苏大学生物与环境工程学院 ,江苏 镇江 　212013 ;
31 浙江大学药学院 ,浙江 杭州 　310031)
摘　要 :目的 　对不同植物激素及其配比对黄花乌头体细胞胚胎诱导及植株再生进行研究 ,为药用植物黄花乌头
的资源开发提供理论依据。方法 　以黄花乌头的茎、叶、胚轴、胚根和子叶为外植体考察不同植物激素对黄花乌头
愈伤组织诱导、体细胞胚胎发生及植株再生的影响。结果 　外植体接种于 MS + 2 ,42D 1 mg/ L + 62BA 015 mg/ L的
培养基上愈伤组织诱导率最高 ,愈伤组织在 MS + 2 ,42D 012 mg/ L + 62BA 015 mg/ L
·239· 中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 35 卷第 8 期 2004 年 8 月
Ξ 收稿日期 :2004202207
作者简介 :于荣敏 (1955 - ) ,男 ,教授 ,博士 ,研究方向为中药生物技术、创新药物的研制开发。