全 文 ：微波提取肉苁蓉中总黄酮和多糖的含量测定
孙 萍 1 ,兰 卫 2 ,李 艳 1 ,闫豫君 1 ,成玉怀 2
( 1. 石河子大学师范学院 ,新疆 石河子 832002; 2. 石河子大学药学院 ,新疆 石河子 832002)
肉苁蓉 Cistanche salsa ( C. A. Mey. ) Benth.
et Hook. f.别名大芸 ,多年生寄生草本 ,分布于戈
壁沙漠地区 ,多寄生于红柳、白刺的根上 ,是一味名
贵的补药。药用带鳞片的肉质茎 ,性味甘辛 ,温 ,具有
强肝肾、益精血、滑肠通便之功效 [ 1]。为提高药材利
用率 ,节约药材资源 ,本实验对微波提取的肉苁蓉中
总黄酮和多糖进行了测定。此法反应速度加快 ,收率
提高 ,结果令人满意。
1 仪器与材料
UV-2401型分光光度计 (日本岛津 ) , M CL-3
型连续微波反应器 (四川大学无线电系 )。 芦丁对照
品购自中国药品生物制品检定所。 (+ )葡萄糖 ( 105
℃干燥至恒重 ) ,苯酚、硫酸均为分析纯。
肉苁蓉采自新疆准葛尔盆地边缘石河子垦区 ,
经石河子大学药学院生药教研室成玉怀副教授鉴定
为 C. salsa ( C. A. M ey. ) Benth. et Hook. f.。春
季采挖 ,置沙土中半埋半露 ,晒干 ,破碎后备用。
2 方法与结果
2. 1 总黄酮测定 [2 ]
2. 1. 1 供试品溶液制备: 肉苁蓉细粉 ( 65目 )于 60
℃干燥 4 h,精密称取 1 g于烧瓶中 ,加入 85%乙醇
60 mL,将此烧瓶放入 MCL-3型连续微波反应器
中 ,调整功率 ,反应 20 min。将提取液转移到 100 mL
容量瓶中 ,用 85%乙醇定容 ,作为供试品溶液。
2. 1. 2 标准曲线制备:精密称取 120℃干燥至恒重
的芦丁对照品 10 mg ,加 85%乙醇溶解 ,定容至 50
m L容量瓶中 ,摇匀 ,制成 0. 2 mg /m L的对照品溶
液。分别取对照品溶液 0. 0, 0. 2, 0. 5, 1. 0, 2. 0, 3. 0,
4. 0 mL于 10 mL容量瓶中 ,加 5%亚硝酸钠 0. 4
m L,放置 6 min后 ,加 10%硝酸铝 0. 4 mL,放置 6
min,再加 4%氢氧化钠 4 mL,加水至刻度 ,摇匀 ,放
置 15 min。以浓度 (C )对吸光度 ( A )进行线性回归 ,
计算得方程 C= 79. 22A- 0. 466, r= 0. 997 8,线性
范围为 4～ 80μg。
2. 1. 3 稳定性试验:取同一供试液在 6, 12, 24, 36,
48 h测定吸光度。 结果 RSD= 2. 31% (n= 5) ,表明
吸光度值在 48 h内基本保持不变。
2. 1. 4 回收率试验:取已知总黄酮含量的供试品溶
液 1. 0 mL于 10 mL容量瓶中 ,再加入 0. 2 mg /mL
的芦丁对照品溶液 0. 5 mL,依法测定 ,结果平均回
收率为 103. 14% , RSD= 0. 95% (n= 6)。
2. 1. 5 样品含量测定:精密吸取供试品溶液 2. 0 mL,
置 10 m L容量瓶中 ,按 2. 1. 2项下方法显色测定。通过
标准曲线 ,计算出样品中总黄酮含量。 结果见表 1。
2. 2 多糖测定 [3 ]
2. 2. 1 供试品溶液制备:分别精确称取肉苁蓉粉末
0. 20 g,用 80%乙醇浸泡过夜 ,再于 MCL-3型连续
微波反应器中用 80%乙醇回流 20 min,调整功率。
残渣挥去溶剂后 ,再放入 MCL-3型连续微波反应
器中 ,继续以水回流提取 20 min,调整功率。反复洗
后置 250 mL容量瓶中 ,定容 ,摇匀后即得。
2. 2. 2 标准曲线绘制:精确量取 100. 8μg /mL葡萄
糖对照品溶液 0. 1, 0. 2, 0. 3, 0. 4, 0. 5, 0. 6, 0. 7 mL
置干燥试管中 ,分别加水至 1. 0 mL,再分别加入 5%苯
酚溶液 1. 6 mL,摇匀 ,然后加浓 H2 SO4 7. 0 mL,室温放
置 25 min,同时做一空白 ,以吸光度 ( A )对浓度 (C )进行
线性回归 ,回归方程: A= 0. 056 54C+ 5. 47× 10- 4 ,
r= 0. 999 8,线性范围: 10. 08～ 70. 56μg。
2. 2. 3 稳定性试验: 取同一供试品溶液在 6, 12,
24, 36, 48 h测定吸光度。结果 RSD= 2. 67% (n=
5) ,表明吸光度值在 48 h内基本保持不变。
2. 2. 4 回收率试验:精确称取肉苁蓉粉末 0. 15 g,
精密加入葡萄糖 7 mg ,按样品制备和葡萄糖测定方
法操作 ,测得葡萄糖平均回收率为 96. 88% , RSD=
0. 96% (n= 6)。
2. 2. 5 样品含量测定: 精确吸取样品液 1 mL,按
2. 2. 2项下方法测其吸光度值 ,按下式计算多糖含
量 ,多糖含量= CD f /W× 100(C为样品溶液的葡萄
糖的质量 , D为样品溶液的稀释倍数 , f为换算因
(下转附 15页 )
中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 34卷第 6期 2003年 6月 · 附 1·
收稿日期: 2002-12-16
均不可擅动”。因此 ,今后川朴的产区将缩小到五峰、鹤峰、恩
施一线。同时这一线的种质资源全国最优。恩施种植厚朴的
历史具说已有 500年 ,以恩施市的双河乡较为集中 ,有上坝
村、下坝村、中岭村等 9个村办林场 ,另外还有太白庙林药
场、硝坡洞林药场、省中医药研究院长岭岗实验场等大型种
植基地。可惜的是在 1988年的大规模砍伐中所剩无几 ,其中
长岭岗基地已荡然无存。现有厚朴林 ,大多为 1990年以后营
造。但据统计 ,恩施每年出产厚朴 20万公斤。鹤峰县基本没
有大规模连片种植。 农民一般是在自己的山地小规模种植 ,
保护得力。 全县每年产出量不会少于 5万公斤 ,其中树龄达
到 12～ 15年的占 25%以上。
川朴的另一个产区是宜昌市的五峰县 ,与鹤峰接壤 ,县
内有原中国药材公司的一个川朴基地—— 香党坪林药场 ,品
种以厚朴为主 ,间有凹叶厚朴。 立地条件好 ,土层深厚 ;为棕
壤和棕黑壤。树龄 3～ 20年不等 ,树龄梯级分布合理 ,现存最
大树胸径 40 cm以上 ,皮厚 0. 8 cm(干货 )。五峰县产区比较
集中 ,大多在香党坪周边 ,年产厚朴 10万公斤 ,其中 15年以
上树龄的 20% ～ 25%。
湖北浠水厚朴多是计划经济时期湖北省的鄂东基地 ,来
源为凹叶厚朴 ,不属于“川朴”范围。四川都江堰等地也是 20
世纪 70年代以后开始发展的人工林 ,其来源为凹叶厚朴 ,也
同样不属于“川朴”范围。
2. 3 永道产区:以湖南永州地区道县为中心 ,产区包括永州
(冷水滩 )、零陵、道县、双牌、江华、江永、宁远等县、区。 商品
以“双牌”厚朴知名。品种是从广西引种的凹叶厚朴。是全国
厚朴资源最丰富的产区。而且近几年以每年几千亩的速度造
林。 道县为国家计划经济时代六大厚朴基地之一 ,产品号称
“道州—— 老山紫油厚朴”。保护工作很好 ,甚至在 1988年全
国滥伐厚朴的狂潮中 ,也未出现盗伐现象。 最高年份生产干
货 17万公斤 ( 1983年 )。 存土面积占全国的 10% ,整个产区
每年提供商品量超过全国的 25%。据产区介绍 ,该省出产的
厚朴 ,经湖南省有关部门检测 ,总酚含量比其他产区高出
1. 7% ～ 4. 89%。 习用经验认为 ,湖南省厚朴品质普遍偏差 ,
但永道地区厚朴树龄普遍较长 ,对品质起了一定弥补。
2. 4 其他产区: 厚朴的其他产区两广、江西等地受地理位置
及气候、海拔等多方面影响 ,商品在市场上和销区普遍不被
看好 ,认为品质最差 ,资源蕴藏量也较少。大规模商品货源基
地不容易形成。
3 采收及加工
川朴产区一般采用水绰发汗法 ,其他地区几乎均采用直
接发汗法。但受市场经济的影响 ,农民加工方法趋于简单化 ,
水绰发汗法几乎不用 ;直接发汗法往往也是时间、温度达不
到要求。是商品品质下降的另一个原因。值得一提的是 ,“厚
朴环剥技术”曾在湖北浠水鄂东基地试验成功。 但现在已废
弃不用。
4 结语
根据以上情况 ,解决目前厚朴商品质量普遍下降的问
题 ,可以从种质、生长年限和产地加工三方面着手。首先是优
化种质 ,优育并推广优良品种 ;其次 ,加强资源保护 ,各产区
在采收时应有计划地控制采收年限 ,避免树龄达不到年限的
厚朴林的砍伐 ;第三 ,开展产地加工方法对品质影响的研究 ,
因地制宜采用最适宜的加工方法 ,保证商品不会因加工不当
而降低质量。
References:
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[2 ] Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. V ol I.
[3 ] Si J P. Of f icinal Magnol ia (厚朴 ) [ M ]. Beijing: Chines e A-
griculture Press , 2000.
(上接附 1页 )
素 ,W为样品的质量 ) ,结果见表 1。
表 1 样品中总黄酮及多糖的含量 (n= 5)
Table 1 Detemination of total flavone and
polysaccharide in samples (n= 5)
检测项目 含量 /% RSD /%
总黄酮 2. 542 2. 637
多糖 11. 546 0. 719
3 讨论
微波技术应用于植物细胞破壁 ,大大地加快了反
应速度 ,有效地提高了收率 [4 ]。 本实验采用微波技术
从肉苁蓉中提取总黄酮和多糖 ,并对其含量进行了测
定 ,结果表明反应时间缩短 ,提取效率提高。可望在有
效成分提取方面发挥更大作用。
References:
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中草药 Chinese Traditiona l and Herbal Drug s 第 34卷第 6期 2003年 6月 · 附 15·