全 文 ：毛细管气相色谱法测定臭冷杉挥发油中柠檬烯含量
王　威 1 ,赵志兰 2 ,牛志多 1 ,苗艳波 1 ,闫喜英 1 ,师海波 1 ,张宪平 1
( 1. 吉林省中医中药研究院 ,吉林 长春　 130021; 2. 吉林省药品检验所 ,吉林 长春　 130062)
摘　要: 目的　建立臭冷杉挥发油中有效成分柠檬烯的毛细管气相色谱测定方法。 方法　色谱条件为 SE-54毛细
管色谱柱 ,程序升温 ,分流比为 40∶ 1, FID检测器 ,内标为萘。结果　柠檬烯浓度在 0. 601 32～ 1. 403 08 mg /m L呈
线性关系 ( r= 0. 999 6) ,平均加样回收率为 99. 62% (R SD= 2. 41% )。 结论　该法简便 ,灵敏 ,易操作 ,可用于臭冷
杉生药的质量评价。
关键词: 臭冷杉 ;挥发油 ;柠檬烯 ;毛细管气相色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 07 0605 02
Determination of limonene in volatile oil of Abies nephrolepis leaves by CGC
WANG Wei
1 , ZHAO Zhi-lan
2 , N IU Zhi-duo
1 , M IAO Yan-bo
1 ,
YAN Xi-ying
1
, SHI Hai-bo
1
, ZHANG Xian-ping
1
( 1. Academy o f Tr aditiona l Chinese Medicine and Ma teria Medica of Jilin Province, Changchun 130021, China;
2. Jilin Institute fo r Drug Cont rol, Changchun 130062, China)
Abstract: Object　 To develop a reliable method fo r determination of limonene in volatile oil of Abies
nephrolepis ( T rautv. ) M axim. leaves by capillary g as chroma tog raphy ( CGC) . Methods　 SE-54 qua rtz
capillary column w as used and the temperature of column w as prog rammed. The spli t ting ratio w as 40∶ 1.
The FID w as used as detector, and the naph thalene as interna l standard. Results　 The standa rd curv e w as
linea r in the concentraion range of 0. 601 32— 1. 403 08 mg /mL (r= 0. 999 6) . The average recovery w as
99. 62% with RSD = 2. 41% . Conclusion 　 The method can be used for quali ty assessment of A.
nephrolepis leav es and it is rapid, sensi tiv e, precise and has good reproducibi li ty.
Key words: Abies nephrolepis ( Trautv. ) Maxim. leaves; v ola ti le oil; limonene; capillary gas chro-
ma tog raphy ( CGC)
　　松科植物臭冷杉 Abies nephrolepis ( T rautv. )
Maxim.属常绿乔木 ,喜生于阴湿缓山坡及排水良好
的平湿地 ,常与其他针、阔叶树混生或有时成纯林 ,
称“臭松排子”。广泛分布于我国东北、华北及日本、
朝鲜和俄罗斯西伯利亚 [1 ]。现代药理学研究表明 ,臭
冷杉枝叶挥发油具有明显的抗炎作用 ,显著的镇咳、
祛痰、平喘作用 [ 2]。臭冷杉枝叶挥发油的主要成分为
柠檬烯 ( limonene)、醋酸龙脑酯 ( bornyl aceta te)、莰
烯 ( camphene)、α-蒎烯 (α-pinene) [3～ 4 ]。关于气相色
谱内标法测定其有效成分柠檬烯的含量未见文献报
道。因此本实验建立了以萘为内标 ,采用毛细管气相
色谱法测定臭冷杉挥发油中柠檬烯的含量 ,并对采
集于长白山不同地区的样品进行了测定 ,希望为臭
冷杉生药质量评价提供依据。
1　仪器与试药
日本岛津 GC-14C气相色谱仪 , SPL14C分流 /
不分流系统 , C-R6A数据处理机。 SE-54毛细管柱
(中国科学院大连化学物理研究所 )。药材分别采集
于长白山区白山、漫江和十九道沟 3个不同地区 ,经
吉林省中医中药研究院巴雪青博士鉴定为松科植物
臭冷杉 A. nephrolepis ( T rautv. ) M ax im.的新鲜枝
叶。 柠檬烯 ( Sigma公司 ,气相色谱峰面积归一化法
测得纯度为 100% ) ,萘 (色谱纯 ,天津市化学试剂二
厂 ) ,所用试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: SE-54毛细管柱 ( 0. 25 mm× 25
m ) ,程序升温: 60 ℃ ( 2 min ) 4℃ /min 80 ℃
6℃ /min
140℃ 10℃ /min 220℃ ( 5 min) ,分流比:
40∶ 1,氢火焰离子化检测器 ( FID) ,检测器温度 260
℃ ,进样口温度 260℃ ,氮气压力 130 k Pa ,氢气压
力 60 k Pa,空气压力 50 kPa。 色谱图见图 1。
2. 2　样品的提取: 取臭冷杉药材 40 g ,精密称定 ,置
挥发油提取器中 ,加水 400 mL,提取 6 h,得挥发油。
·605·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
收稿日期: 2002-10-05
1-柠檬烯　 2-内标物萘
1-limonen e　 2-internal s tandard naph th alen e
图 1　柠檬烯对照品 (A)和供试品 ( B)的 GC图谱
Fig. 1　 GC chromatograms of limonene reference
substance (A) and sample (B)
2. 3　对照品溶液的配制: 取柠檬烯对照品适量 ,精
密称定 ,加无水乙醇制成约 2 mg /mL的溶液 ,作为
对照品溶液。
2. 4　内标溶液的配制:取萘适量 ,精密称定 ,加无水
乙醇制成约 2 mg /mL的溶液 ,作为内标溶液。
2. 5　供试品溶液的配制: 取挥发油 60 mg,精密称
定 ,置 10 mL量瓶中 ,加无水乙醇稀释至刻度 ,摇
匀。精密量取该溶液 1 m L和内标溶液 1 m L,摇匀 ,
作为供试品溶液。
2. 6　定量校正因子测定: 精密量取对照品溶液
( 4. 008 8 mg /mL) 4. 0, 5. 0, 6. 0 m L分别置于 10
m L量瓶中 ,加无水乙醇稀释至刻度 ,摇匀。 分别精
密量取 1 mL,精密加入内标溶液 1. 0 mL,摇匀。分
别进样测定 3次 ,每次 1μL,测得定量校正因子为
1. 035 7。
2. 7　标准曲线绘制:精密量取对照品溶液 ( 4. 008 8
mg /mL) 3. 0, 4. 0, 5. 0, 6. 0, 7. 0 mL分别置于 10
m L量瓶中 ,加无水乙醇稀释至刻度 ,摇匀。 分别精
密量取 1 mL,精密加入内标溶液 1. 0 mL,摇匀。分
别进样测定 ,每次 1μL。以柠檬烯浓度为横坐标 ,柠
檬烯与内标峰面积之比为纵坐标进行线性回归。结
果表明柠檬烯在 0. 601 32～ 1. 403 08 mg /mL呈良
好的线性关系 ,其线性回归方程为 Y= 0. 955 6X -
0. 020 3, r= 0. 999 6。
2. 8　精密度试验 : 对同一供试品溶液连续测定 6
次 ,结果柠檬烯含量为 0. 375 2 g /g, RSD= 0. 94% 。
2. 9　重现性试验:对同一来源样品 ,独立测定 6次 ,
结果柠檬烯的平均含量为 0. 383 3 g /g , RSD=
1. 29%。
2. 10　加样回收率试验:取已知含量的样品约 300
mg ,精密称定 ,置 50 mL量瓶中 ,加无水乙醇稀释至
刻度 ,摇匀。分别精密吸取 5 mL 5份 ,精密加入对照
品溶液 5 mL,摇匀。依法测定 ,测得平均加样回收率
为 99. 62% , RSD= 2. 41%。
2. 11　样品测定: 依法测定 3个不同地区的臭冷杉
样品 ,挥发油出油率和柠檬烯含量见表 1。
表 1　不同地区臭冷杉挥发油出油率
与挥发油中柠檬烯含量
Table 1　 Yield and limonene content of volatile oil
in A. nephrolepis leaves from diff erent zones
地　　区 出油率 / ( mL· g- 1) 柠檬烯 / ( g· g- 1 )
白　　山 0. 038 2 0. 388 0
漫　　江 0. 035 9 0. 297 7
十九道沟 0. 037 6 0. 189 7
3　讨论
3. 1　分别选用萘、正十五烷和正十九烷为内标进行
优选 ,结果萘峰位于柠檬烯峰附近 ,且与相邻组份峰
完全分离。
3. 2　臭冷杉挥发油成分复杂 ,传统填充柱不能使各
成分完全分离 ,采用毛细管色谱柱进行测定 ,各成分
峰形及分离效果好。
3. 3　测定结果表明产于长白山不同地区的臭冷杉
样品中柠檬烯含量存在着差异 ,是否与植被分布的
生态环境因素有关 ,有待进一步探讨。
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志 ) [M ] . Beijing: People s Medical Pu blishing House, 1997.
[2 ]　 Liu W , Zhou Z C, Shi H B, et a l. Actions of relieving cough ,
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[3 ]　 Yang Z Y, Jiang Z T, Gu JX, et al . Studies on th e ch emical
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保　护　环　境　　造　福　子　孙
·606· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月