全 文 ：·1646· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
峰以及可以确定归属。的3个色谱峰进行了比较研
究。从湖北恩施产何首乌采用黑豆汁蒸制不同时间各
饮片的HPLC图谱分析可以看出，随炮制时间的延
长，3种单体成分中大黄素、大黄素甲醚峰面积逐渐
升高，二苯乙烯苷峰面积逐渐降低，而炮制后保留时
间4．5～6．5min出现了一组新的色谱峰。并且随炮
制时间由12、24h延长32h，这组谱峰峰面积占总峰
面积的百分数逐渐增加，至48h不再增加。
从广东德庆产何首鸟采用黑豆汁燕32h、清蒸
32h和黑豆汁高压蒸12h前后各饮片的HPLC图
谱分析可知，炮制后保留时间介于4．5～6．5min也
有新的色谱峰产生。同时，大黄素、大黄素甲醚峰峰
面积占总峰面积的百分数升高，二苯乙烯苷降低。各
种炮制方法都显示类似的变化。提示与辅料黑豆汁
无关。
曾试用甲醇0．1％磷酸为流动相进行梯度洗
脱，但样品分析时基线不平，影响相对峰面积的准确
计算，且与甲醇一水系统比较，分离无明显改善。因此
选择甲醇一水梯度洗脱。在供试品溶液的制备中，曾
比较了醋酸乙酯、70％乙醇、甲醇回流提取，或甲醇
超声提取。结果显示以甲醇回流提取图谱重现性较
好，提供的色谱峰数量多，相应色谱峰峰面积大。因
此，采用甲醇回流提取制备供试品溶液。采用DAD
检测器确定检测波长为280nm。
试验结果显示，两个产地的何首乌经炮制后既
有已知成分量的变化，更存在内在成分质的改变。而
炮制后新产生组分的化学结构及其与功效改变的关
系，值得进一步研究。
References：
[1](、^P(中国药舆)Es]．VolI．2000
E23KimuraY．Effectofs ilbenecomponentsofrootsofPolygot
ssp，Onliverinjuryinperxidizedoil—fedrats口]Planta
Med，1983，49f1)：51—53
[3]QiAD．Studiesonextractiontechnologyof2，3，5，4-stilbene
glucosideandtheffectofprogressonitsCOD．tentfromP．muir班⋯[J]．ChinTraditHerbDrugsf中草药)，2002．
33fT)：6096i0．
[4]TianjinBureauofHealth．CutRegulationsofChineseMateria
Medica(中药戗片切制规范)[M]．Beijing：People7sMedical
PublishingHoHse．1975．
枳壳生饮片的HPLC指纹图谱研究
王少军1，曾君2，杨武亮2，龚千锋2，王跃生1，杨世林1
(1．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330077；2．江西中医学院，江西南昌330006)
枳壳为芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL．
及其栽培变种的于燥未成熟果实，具有理气宽中、行
滞消胀功效。枳壳生饮片作用较强，偏于行气宽中除
胀。目前我国市场上主流枳壳商品为江枳壳。湘枳
壳，川枳壳，分别产于江西、湖南、四川。枳壳来源复
杂，质量参差不齐，加之市场上不断出现伪劣枳壳药
材，有必要对枳壳饮片建立较全面的质量控制手段。
本实验对10批主流枳壳生饮片进行高效液相色谱
分析，建立了枳壳生饮片的特征峰，为枳壳饮片的鉴
别及质量进一步评价提供了一定的科学依据。
1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，Agilent1100柱
温箱，DAD检测器，Agilent1100色谱工作站，
MettlerAE240电子天平，KQ318T型超声波清洗
器。HPLC级甲醇购于Merck公司，甲醇、磷酸、醋酸
乙酯为分析纯，水为重蒸水。新橙皮苷对照品(自制，
面积归一化测得质量分数为99．34％)，柚皮苷对照
品(批号0722—200108)、橙皮苷对照品(批号0721—
200010)均购自中国药品生物制品检定所。枳壳原药
材分别购于江西新干、江西樟树、湖南连桥、四川荷花
池药材市场，经江西中医学院中药鉴定教研室刘庆华
鉴定为枳壳。枳壳生饮片为本课题组自制，见表1。
衰1枳壳生饮片名称殛产地
Table1 NamesandhabitatsofFructusA rantiirawdrugs
作收者n筒fl介Wh；2王0少05辜：】笛9一)，男，陕西渭南人，硕士研究生．主要从事中药质量标准及天然药物化学研究。E硼i1；wang。j@】。jlcom
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月·1647·
2方法与结果
2．1液相色谱分析条件：色谱柱为HypersilC，。柱
(200mmx4．6mm，5pm)；检测波长为320nmf体
积流量为1．0mL／min；柱温为30℃}进样量为10
pL；流动相为A(甲醇)一13(磷酸水溶液，pH3)，梯度
洗脱0～25min，A—B(32l 68)；z5～60min，A由
32％升至58％；60rain以后，100％A。
2．2供试品溶液的制备；枳壳原药材浸润，切薄片。
取枳壳生饮片粉末(40目)约0．5g，精密称定，置
i00mL圆底烧瓶中，加醋酸乙酯50mL超声提取
30rain，趁热滤过，滤液置100mL蒸发皿中，加热
挥干，用甲醇溶解，药液置i0mL容量瓶中，加甲醇
至刻度，用0．45pm滤膜滤过，即得。
2．3参照物溶液的制各：精密称取柚皮苷对照品适
量，用甲醇溶液稀释成0．250mg／mL的溶液，作为
参照物溶液。另精密称取橙皮苷对照品适量，用甲醇
溶液稀释成0．109mg／mL的溶液，精密称取新橙皮
苷对照品适量，用甲醇溶液稀释成0．246mg／mL的
溶液，作定性用。
2．4方法学考察
2．4．1精密度试验：取江西新干生饮片一1制备供
试品溶液，连续进样5次，每次进样lo止，所得各
共有峰的相对峰面积的RSD均小于1．o％，各共有
峰的相对保留时间的RSD均小于0．5％。
2．4．2稳定性试验：取江西新干生饮片一1制备供
试品溶液，分别在0、6、12、24、36、48h测定，所得各
共有峰的相对峰面积的RSD均小于2．o％，各共有
峰的相对保留时问的RSD均小于1．0％。
2．4．3重现性试验t取江西新干生饮片一l5份，制
备供试品溶液，进样10皿，所得各共有峰的相对峰
面积的RSD均小于2．5％，各共有峰的相对保留时
间的RSD均小于1．0％。
2．5枳壳生饮片HPLC指纹图谱及技术参数：取
10批枳壳生饮片制备供试品溶液，进样，记录样品
在60min的色谱图。以柚皮苷对照品为参照峰，结
果 批药材有11个特征指纹峰，鉴定了3个特征
指纹峰，即1号为柚皮苷，2号为橙皮苷，3号为新橙
皮苷。参照峰标为S，其他峰依次为2、3⋯11。各特
征指纹峰的峰面积及相对峰面积积分值、保留时间
及相对保留时间均具有较好的重现性。特征指纹峰
的平均相对保留时间依次为1．000、1．064、1．147、
1．510、1．977、2．470、3．185、3．293、3．497、3．712、
5．265，RSD均低于0．5％，符合《中药注射剂指纹图
谱研究的技术要求》(暂行)中关于药材部分的要求。
特征指纹峰的相对峰面积积分值及相对保留时间见
表2、表3，色谱图见图1。
3讨论
考察了超声提取法、加热回流法、索式提取法3
种提取方法的提取效果，结果表明超声提取法提取
时间短，各特征指纹峰的相对丰度较好，故选用超声
提取法。考察了甲醇，醋酸乙酯，氯仿提取效果，结果
发现醋酸乙酯的提取效果摄好。然后考察了醋酸乙
酯超声提取15、30、45rain的提取效果，分析比较后
发现超声提取30rain相对丰度为好。
用DAD检测器检测220、260、280、300、320、
360nm波长，结果表明枳壳提取液在320nm波长
下吸收强度大，相对丰度合适，故选用320nm为指
纹图谱的测定波长。考察了60、80、120rain图谱，结
果表明，所有的指纹峰在60rain内出现，故确定时
间为60min。根据对柱温在20、25、30℃的色谱图
进行比较，发现没有明显差异，为保持一致性选用
30℃。分别进样5、10、20儿，由于枳壳提取液紫外
吸收较强，进样10pL峰高合适，基本可满足分析要
求。考察了体积流量0．8、1．OmL／min，发现体积流
囊2特征指纹嶂的相对蟑面积积分僵
Table2 RelativepeakIurcaintegralv uesofcharacteristicf ngerprinteaks
藉号
特征指纹峰峰面积相对积分值
S
1．000
1．000
】．OOO
1．000
1．000
1．000
1．000
1．000
1．000
1．000
0．050
0．048
n359
0．364
O．360
0．085
0．087
0．081
0．076
0．078
0．705
0．699
m915
0．907
0．915
1．044
1．050
1，050
0．829
0．831
1，291
I．303
0，227
0．227
0．227
O．698
0．?01
0．705
O．791
O．792
0．430
0．431
0。118
0．115
0．118
0．263
0．Z67
0．268
0．281
0．283
0．410
0．392
m237
0．236
0．277
0．159
0．162
0．163
0．322
0．325
1．584
1．610
O。309
0．307
0．309
0．674
0．671
0．674
0．650
0．647
0．218
0．223
0．148
0．144
0．143
0．097
0．096
0．095
0 060
0．059
0．525
0．525
n370
0．363
0．356
0。219
0．219
0．217
0．286
0．281
1．657
lt665
0．503
0 50l
0．509
0，606
仉612
0．615
0．504
0．474
0．346
0．346
0．348
0．347
0．348
0．107
0．104
0．105
0．080
0．079
万方数据
·1648· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
表3特征指纹峰的相对保留时间
Table3 Relativeret nttimeofcharacteristicfingerprinteaks
．。扇l
捌叟
～—J
制藕 一， ，一。囱▲ 一 ． l．．． I—雾l氡嘲蝴㈣
r／mln
圈1枳壳生饮片共有模式及重叠圈
Fig．1Commondeandoverlappeddiagrams
ofFructusA rantiirawdrugs
量1．0mL／min为好。本实验考察了乙腈一磷酸水、
甲醇一磷酸水，甲醇一磷酸水峰形好。研究过等度洗脱
的可行性，结果分离度、峰形等均不如梯度洗脱理
想，因此选用梯度洗脱。甲醇一磷酸水先后用40多个
不同梯度洗脱，结果本实验中所用的梯度最佳。
本实验建立了枳壳生饮片液相指纹图谱，系统
地反映了其黄酮类成分的全貌，可作为枳壳生饮片
的质量控制方法之一。对枳壳主流产地生饮片进行
了10批分析，色谱图的整体相貌是相同的，但是不
同产地枳壳药材的指纹图谱在非共有峰及特征指纹
峰的相对比较大小上还是有较大差别的。如2号特
征峰橙皮苷相对峰面积积分值在四川枳壳3批生饮
片中高达0．359以上，而江西樟树、江西新干、湖南
生饮片则低于0．087；4号特征峰相对峰面积积分值
在湖南2批生饮片中达到1．291以上，江西樟树、新
干产地在0．700左右，而四川产地则在0．220左右；
7号特征峰相对峰面积积分值在湖南产地达到
1．580以上，江西樟树、新干产地在0．650左右，四
川产地则低于0．310。说明枳壳产地不同，其药材指
纹图谱也有较大差异。但特征指纹峰的相对保留时
间一致，这样可根据相对保留时间鉴别枳壳生饮片。
用药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度
评价系统2004A版1．0版通过对10批样品的数据
处理，得到了相关系数，按样品编号用平均数表示依
次为0．936、0．936、0．841、0．845、0．844、0．975、
0．977、0．975、0．982、0．974，用中位数表示依次为
0．904、0．904、0．827、0．832、0．830、0．957、0．961、
0．957、0．993、0．991。说明选用的特征指纹峰是恰当
的。据此，制定了真伪鉴别相似度值的标准，即相关
系数用中位数和均值表示不得低于0．800，特征指
纹峰的相对保留时间RSD小于2％。但特征指纹峰
的相对峰面积积分值差异较大，建议在临床应用中
根据具体适应症选用固定产地药材。
万方数据
枳壳生饮片的HPLC指纹图谱研究
作者： 王少军， 曹君， 杨武亮， 龚千锋， 王跃生， 杨世林
作者单位： 王少军,王跃生,杨世林(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西,南昌,330077)， 曹
君,杨武亮,龚千锋(江西中医学院,江西,南昌,330006)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
被引用次数： 1次

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