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淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量的 HPLC测定
王旭东 1 ,姚　晨 2 ,鲁方平 1
( 1. 成都康弘制药有限公司 ,四川 成都　 610041; 2. 石家庄科迪药业有限公司 ,河北 石家庄　 050091)
　　淫羊藿药材为《中华人民共和国药典》 2000年
版收载品种 ,淫羊藿苷为其中有效成分。为了控制其
质量 ,本实验建立了 HPLC法测定淫羊藿提取物中
淫羊藿苷的含量 ,并在方法学考察过程中 ,对文
献 [1～ 6 ]报道的多种色谱条件进行了比较 ,建立了合
适的测定方法。
1　仪器与试剂
Waters ( 2690-996)高效液相色谱仪 , Sart-o-
riusBP211D型电子天平 , CQ-250超声波清洗仪。淫
羊藿提取物 (浸膏粉 )为本公司自制。 淫羊藿苷对照
品 (中国药品生物制品检定所提供 ,供含量测定用 ,
批号: 0737-200111)。乙腈为色谱纯 ,甲醇为分析纯 ,
水为重蒸水。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Inertsil ODS-3 C18柱 ( 150
mm× 4. 6 mm , 5μm);流动相: 乙腈-水 ( 28∶ 72) ;流
速: 1 mL /min;检测波长: 270 nm;柱温: 30℃ ;进样
量: 10μL。 理论塔板数以淫羊藿苷计算应不低于
2 000。
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取淫羊藿苷对照品
20. 94 mg ,用甲醇溶解定容至 100 mL,作为贮备液
( 209. 4μg /mL)。分别精密吸取此贮备液 ,加甲醇稀
释配 制成浓 度为 8. 376, 16. 75, 41. 88, 83. 76,
167. 5, 209. 4μg /mL的溶液。
2. 3　供试品溶液的制备: 取本品 50 mg,精密称定 ,
置 50 mL量瓶中 ,加甲醇 30 mL,超声处理 10 min,
放冷 ,再加甲醇至刻度 ,摇匀 ,用微孔滤膜 ( 0. 45
μm)滤过 ,取续滤液作为供试品溶液。按上述色谱条
件测定 ,绘制淫羊藿苷对照品和供试品的色谱图。在
供试品色谱图中 ,与对照品色谱图中相同保留时间
处有色谱峰 (图 1)。
2. 4　标准曲线与线性范围: 取上述各对照品溶液
* -淫羊藿苷
* -icariin
图 1　淫羊藿苷 ( A)和淫羊藿提取物 (B)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of icariin (A)
and Herba Epimedii extraction ( B)
10μL依次进样 ,每一浓度进样两次 ,记录色谱图。
以峰面积平均值为纵坐标 ,进样量为横坐标绘制标
准曲线 ,结果表明淫羊藿苷进样量在 0. 083 8～
2. 094 0μg与峰面积线性关系良好 ,回归方程为
Y= 2 283 512X - 36 382, r= 0. 999 9。
2. 5　精密度试验:精密吸取同一对照品溶液 ( 104. 7
μg /mL) 10μL,重复进样 6次 ,测定淫羊藿苷的峰
面积值 ,结果 RSD= 0. 20% 。
2. 6　重现性试验: 取同一批样品 ( 011001) 6份 ,分
别按供试品溶液制备法制备 ,测定其淫羊藿苷峰面
积 ,计算 ,样品中淫羊藿苷平均含量为 128. 2 mg /g,
RSD为 0. 85% 。
2. 7　加样回收率试验:取已知含量 128. 2 mg /g的
样品共 9份 ,每份 30 mg ,精密称定 ,分为 3个梯度 ,
分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液 ( 390. 6μg /mL)
各 2. 5, 5, 10 m L,配制成加样供试品溶液。按供试品
溶液制备方法制备 ,测定含量 ,计算 ,结果加样回收
率为 98. 46% , RSD= 1. 78% (n= 9)。
2. 8　样品测定:取 3批提取物 ,按上述供试品溶液
制备方法及色谱条件进行测定 ,以外标法计算含量 ,
·717·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2002-11-29作者简介:王旭东 ( 1969— ) ,男 ,四川三台县人 ,分析工程师 ,主要从事药品研发与质量标准研究工作。 Tel: ( 028) 85831474-196
结果见表 1。
表 1　淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量 (n= 3)
Table 1　 Content of icariin in Herba Epimedii
extraction (n= 3)
批号 淫羊藿含量 / ( mg· g- 1) RSD /%
010411 135. 5 0. 52
010613 131. 3 0. 23
011022 128. 2 0. 89
3　讨论
　　本实验进行流动相选择时 ,曾试验了条件Ⅰ 乙
腈 -水 ( 28∶ 72) ,Ⅱ甲醇 -水 ( 60∶ 40) ,Ⅲ甲醇 -乙腈 -
水 ( 45∶ 10∶ 45)和Ⅳ甲醇-水 -冰醋酸 ( 60∶ 40∶
0. 5) 4种流动相体系。经比较发现 ,流动相Ⅰ条件下
样品中的淫羊藿苷主峰与杂质峰分离度最佳 ,且与
其他条件下色谱图有较大差异。 相同供试液分别在
前述 4种条件下测定 ,最终提取物中淫羊藿苷的含
量出入甚大 (含量分别为 128. 2, 219. 0, 220. 4,
224. 6 mg /g )。 从图谱和计算的结果来看 ,参考文
献 [7 ]所述 ,条件Ⅱ ,Ⅲ ,Ⅳ测定结果偏高的原因推测
为未能将 epimedin C与淫羊藿苷有效分离 ,故计算
值实际为两者的总和 ;而条件Ⅰ则有效分离 ,所测值
为淫羊藿苷单体含量。因此 ,在作淫羊藿苷测定时 ,
应注意流动相体系的选择 ,以求获得准确结果。
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导数光谱法测定疏风定痛丸中士的宁的含量
张云哲 ,李云霞
(承德中药集团有限责任公司 ,河北 承德　 067000)
　　疏风定痛丸是由马钱子、麻黄、乳香、没药、千年
健、自然铜、杜仲等 15味中药制成的复方蜜丸制
剂 [1 ]。具有祛风散湿、活血止痛的功效。由于君药马
钱子中含有毒性较大的士的宁 ,因此《中华人民共和
国药典》规定了士的宁的含量范围。疏风定痛丸中士
的宁的分析测定方法很多 ,药典采用了高效液相色
谱法代替以前一直沿用的薄层 -比色法 ,然而在实际
应用中 ,该方法存在着提取过程烦琐等缺点。本实验
针对上述问题采用导数光谱法直接测定样品中的士
的宁含量 ,结果较为满意。
1　仪器、药品与试剂
岛津 UV-2401型紫外分光光度计 ;士的宁对照
品由中国药品生物制品检定所提供 ;疏风定痛丸样
品由本公司生产 ;不含马钱子的疏风定痛丸阴性样
品由乳香、没药、杜仲等 14味中药按《中华人民共和
国药典》规定粉碎、混合、加蜜制成丸 ;正己烷、二氯
甲烷、无水甲醇为色谱纯 ,其余均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　供试液的制备 [2 ]:取疏风定痛丸样品和硅藻土
( 2∶ 1)研匀的粉末 3份 ,每份 5 g ,精密称定 ,置具塞
锥形瓶中 ,精密加入氯仿 20 mL和浓氨水 0. 3 mL,
摇匀 ,放置过夜。滤过 ,精密吸取滤液 10 mL,置分液
漏斗中 ,用 0. 5 mol /L硫酸液振摇萃取 4次 ,每次
10 mL,将酸水层滤入 50 mL容量瓶中 ,并稀释至刻
度 ,摇匀。再精密吸取稀释液 10 mL,置 50 mL容量
瓶中 ,加 0. 5 mol /L硫酸液至刻度 ,摇匀 ,得供试液。
2. 2　士的宁对照液的配制:精密称取士的宁对照品
适量 ,置 100 mL容量瓶中 ,用 0. 5 mol /L硫酸液溶
解 ,制成 0. 182 mg /mL的对照液。
2. 3　不含马钱子粉的疏风定痛丸阴性液的配制: 取
不含马钱子粉的药丸和硅藻土 ( 2∶ 1)的研匀粉末
5 g ,置具塞锥形瓶中 ,按 2. 1项下方法制成阴性液。
2. 4　测定波长的选择 [ 2]:将不含马钱子的疏风定痛
阴性液、疏风定痛供试液分别进行紫外光谱测定 ,结
·718· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2003-01-01