全 文 ：·1492‘ 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第io期2005年lo月
2．6喜果苷晶体的制备：喜果苷的收集液经旋蒸浓
缩至析出少量固体。放置冷却析出大量针状晶体，滤
过。针晶用50％乙醇溶液超声溶解，滤过，滤液旋蒸
浓缩，多次重结晶后，晶体由淡黄色变为无色。最后
将无色针晶晾干，50c真空抽干至恒重。收率为
0．03％，质量分数达99％。
3讨论
ME一1树脂可有效除去喜树果提取液中的杂
质，使喜果苷的质量分数由1．524％提高至
21．52％，再经ME一3树脂吸附，喜树碱及其类似物
也被有效去除，喜果苷的质量百分数可进一步提高到
60％左右，最后经重结晶得到喜果苷晶体。此法提取
工艺简单，收率较高(90％以上)，利于工业化生产。
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高速逆流色谱分离茶叶中咖啡因和茶碱
陆向红1，王定海1，
(1．浙江工业大学化学工程与材料学院，浙江杭州
计建炳1，任其龙2．昊平东2
310014l2，浙江大学材料与化学工程学院，浙江杭州 310027)
高速逆流色谱(high—speedcountereUrrent
chromatography，HsCCC)是利用多层螺旋管行星
式运动形成的特殊离心力场来实现两溶剂相在管柱
里的单向性流体动力学分布状态，以使流动相在高
速穿过管拄时保证固定相在管柱里达到较高的保留
值，同时促进了两相间的充分混合和逆流传递。这种
分离体系对不同物理性质的广泛溶剂系统具有较强
的适应性，能够采用多样的体系条件和操作方式，因
此逆流色谱在稀有金属、天然药物以及蛋白质的分
离、纯化等很多方面有广泛的应用“”]。本实验采用
HSCCC对茶叶中咖啡因和茶碱实现分离，同时考察
相关因素的影响。
1仪器与材料
IV型同步行星式高速逆流色谱仪，浙江大学二
次资源国家专业实验室自制。色谱柱采用多层内径
为2mm的聚四氟乙烯螺旋管，色谱柱容量为270
mL，仪器的半径为10cm，p一0．5～1．5，仪器的转
速为o～1500r／min。HPuV一8452型紫外分光光
度计，高压平流计量泵(杭州前进石油机械厂)。
咖啡因和茶碱均为生化级别，购自于Sigma公
司；氯仿为分析纯，水由NAN0pureultrapure
watersystem(BarmsteasUSA)制备。
收稿日期：2004—12-21
2方法与结果
2．1标准曲线制备：各称取20mg咖啡因和茶碱
对照品，分别用水溶解并转移到2个100mL量瓶
中，加水至刻度。分别稀释成10、15、20、25、30、45、
50、60、80、90、100、120、160、180、200pg／mL的溶
液，在254nm下测定吸光度。以质量浓度(c)对吸
光度(A)作图，得到咖啡因和茶碱的标准曲线，通过
最小二乘法关联实验数据，得到咖啡因和茶碱的标
准曲线方程。咖啡因：C一54．44A，R2—0．9993。茶
碱：c一45．07A，R2—0．9990。
2．2溶剂系统的配制t将等体积的氯仿和水在分液
漏斗中剧烈振荡摇匀，使两相达到平衡，静置分层，
下相(氯仿相)为流动相，上相(水相)为固定相。
2．3样品溶液的配制：准确称取咖啡因和茶碱对照
品各100mg，并用等体积的上下两相溶解，配制成
50mg／mL的混合溶液。
2．4逆流色谱分离咖啡因和茶碱的操作：用计量泵
将固定相注满螺旋管后开启直流电机，并调至某一
转速，以一定流量从首端泵人流动相，在色谱柱尾端
用量筒接受流出的固定相；待色谱柱尾端不再有固
定相流出时，表明系统已稳定，量出流出的固定相体
积，计算在此条件下的固定相保留率，进样0．7mL，
万方数据
中草药ChineseTraditianalandHerha!Drugs第36卷第10期2005年10月·1493-
记录时间并以一定的时间间隔收集流出液，并采用
紫外分光光度计测定254D．m处的吸光度；待分离
过程结束，关闭输液泵及电机，用氮气将柱子中的残
留物推出，然后用甲醇冲洗色谱柱。
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2．5洗脱曲线的制备：通过咖啡因和茶碱的标准曲
线，计算HSCCC分离后流出液中咖啡因和茶碱的
质量浓度，并对时间作图，得到不同条件下HSCCC
的洗脱曲线，见图1、2。
C120
；100
墓嚣
卜咖啡因2一荣碱
卜caffeine2-theophylline
A-294T／mlnB一308r／rainC一339r／mlnD一553r／rnln
田l转速对HSCCC分离咖啡园和茶碱的洗脱的影响
Fig．1Effectofrevolutionspeedonelutlonofcaffeinea dtheophylllnebyHSCCC
O ∞100155200250
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1一咖啡因2一茶碱
1一caffeine2-theophylline
A一4．0mL／minB一6．4mL／minC一8，4mL／minD-10．0mL／mln
圈2流量对HSCCC分离咖啡因和茶碱的洗脱的影响
Fig．2Effectofflowrateonelutionofcaffeinea dtheophyllinebyHSCCC
结果显示，在流量为10．0mL／min时，随着转
速的增加，咖啡因和茶碱的分离情况逐渐好转。在转
速为294r／rain时，咖啡因和茶碱两峰部分重叠，转
速增加至308r／rain时，咖啡因和荣碱两峰刚好达
到基线分离，而转速达到339和553r／min时，咖啡
因和茶碱的分离程度进一步提高。在转速为308r／
rain时，在实验的流量范围内，咖啡因和茶碱均能达
到基线分离。
2．6逆流色谱分离茶叶水提取物中的咖啡因和茶
碱：称取50．0g茶叶，加1000mI．去离子水，80℃
下浸泡5h。滤过，滤液浓缩至约5mI，，进样，并使其
在氯仿一水(1·1)(上相为固定相)，流量为10mL／
rain，转速339r／min条件下运行，收集馏份，稀释后
测定吸光度(A)，以A对时间作图，见图3o分别收
集10～22min馏份和55～84rain馏份，并采用
HPLC分析。结果显示，HSCCC可以直接用于分离
茶叶水提取液中的咖啡困和茶碱，咖啡因在收集到
的10～22rain馏份中，并且此馏份基本不含茶碱；
茶碱在收集到的55～84rain馏份中，此馏份也基本
不含咖啡因。
田3 tlSCCC分膏茶叶承摄取液的洗脱曲线
Fig·3ElutloncurveofwaterXtractsolution
ofteaisolatedbyHSCCC
2．7分离条件的优化：一个好的分离条件，不仅要
考虑有好的分离度，还要考虑完成一个分离所需的
时间和所耗费的溶剂。为了对分离条件进行优化，实
验综合考虑转速、流量对分辨率、洗脱体积、洗脱时
间的影响。计算方法分别见式(1)、式(2)。
VR一“×F(1)Rs=气；i；里三击型(2)’’b2t⋯b2
式中VR(Vxt、VR：)表示咖啡因和茶碱的保留体积；“表示咖
啡因和茶碱的保留时间；WL．、Wbz表示咖啡因和茶碱两色谱
峰的峰宽；，表示流量IRs表示咖啡因和茶碱两峰的分辨率
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万方数据
·1494· 中草药ChineseTraditionalarmHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月
在10mL／min流量下，转速对分辨率、洗脱体
积的影响见图4。在308r／mln的转速下，流量对分
辨率、洗脱体积的影响见图5。结果表明，在10mI。／
rain流量下在实验的转速范围内，随着转速的增加，
洗脱体积增加，分辨率先增加后下降，转速为339r／
min时，分辨率达到最大；在实验流量范围内，随着
流量的增加，分辨率下降，茶碱的洗脱体积降低，在
流量为10．0mL／min时，既能保证咖啡因和茶碱的
基线分离，又能使完成分离所需的溶剂用量最小，此
时完成分离所需的时间也最短。
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1一茶碱2一咖啡因
卜theophylline2-caffeine
围4转速对咖啡因与茶碱分辨辜(A)和洗脱
体积(B)的影响
Fig．4Effectsofrevolutionspeedonresolution(A)
andelutionv lumn(B)ofcaffeinea d
theopyiline
综合以上，选择氯仿一水(1：1)，流量10mL／
min，转速339r／min作为分离咖啡因、茶碱的色谱
条件。另外在此选定的色谱条件下，高速逆流色谱仪
对咖啡因和茶碱的分离有很强的分离能力，从色谱
图上咖啡因和茶碱的分离情况看，进样量还可以大
2
02 4 6 8 J0
流量／(mL·min2)
8001 B．
童600l
：蚓 2 4 6 8 10 12
流量／(mL·mI一)
1茶碱2咖啡因
1一theoph纠line2-caffeine
圈s流量对咖啡困与茶碱分辨率(A)和
洗脱体积(B)的影响
Fig．5Effectofflowrateonresolution(A)andelutlon
volumn(B)oftheophyillneandcaffeine
大提高，这是其他色谱所不能及的。
3讨论
高速逆流色谱作为新型的分离技术，对天然产
物有效成分的分离具有很大的优势，它具有处理量
大、适应性强、产品损失小等优点。
Refereneesf
[1]PukhovskayaVM，M ryutlnaTA，GrebnevaON，et口f．
Inductivelycoupledplasmaatomicemissionspectroscopic
determinationofrarearthelementsingeologicalsamples
afterD econcentratIonbycountercurTentchromatography[J3．
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安宫胶囊的成型工艺研究
刘艳菊，李水清
(湖北中医学院，湖北武汉430061)
安宫胶囊由益母革、香附等中药组成。益母草活
血调经、利尿消肿，香附能行气解郁、调经止痛。该处
方是临床使用多年的经验方，具活血化瘀、调经止痛
的作用，疗效确切可靠。通过对该方药物提取制得干
浸膏和挥发油的包合物，制得安宫胶囊原料药。为了
制备出质量稳定，满足大生产需要的制荆，对其成型
工艺作了进一步研究。笔者根据临床给药量。以吸湿
峻藕日期{2004—06—18
率，休止角为指标筛选不同辅料，并对其流动性和临
界相对湿度进行进一步评价。
1仪器与材料
sHH一150恒温恒湿培养箱(重庆华茂仪器有
限公司)，分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)。
安官胶囊原料由湖北中医学院制剂实验室制备，各
辅料均符合药用标准。
^
6
5
4
3簪{Ij}隶
万方数据
高速逆流色谱分离茶叶中咖啡因和茶碱
作者： 陆向红， 王定海， 计建炳， 任其龙， 吴平东
作者单位： 陆向红,王定海,计建炳(浙江工业大学化学工程与材料学院,浙江,杭州,310014)， 任其龙
,吴平东(浙江大学材料与化学工程学院,浙江,杭州,310027)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(10)
被引用次数： 5次

参考文献(3条)
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5. 郑高利 葛根异黄酮对骨质疏松症的防治作用及其机理研究[学位论文]2002
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9. 陆向红.苏云.任其龙.吴平东 从桑白皮中提取药物成分桑根酮D[期刊论文]-天然产物研究与开发2002,14(1)
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引证文献(5条)
1.黄海滨.成莉.吴玉强.张悦晗 近十年高速逆流色谱法在中药分离制备方面的应用概况[期刊论文]-广西中医学院
学报 2006(4)
2.王磊.魏芸.袁其朋 高速逆流法分离纯化五味子中的五味子酚[期刊论文]-北京化工大学学报（自然科学版）
2009(2)
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4.雷建飞.贾莉萍 新技术分离纯化六大类天然有效成分的研究进展[期刊论文]-中医药导报 2006(11)
5.齐元英.孟兆玲.柳仁民 高速逆流色谱技术及其在天然产物研究中的应用进展[期刊论文]-化学分析计量 2006(6)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200510021.aspx