全 文 ：表 3　方差分析表
Table 3　Variance analysis
参数 方差来源 自由度 离均差平方和 F值 P值
T50 组内 6 　 10. 617
组间 1 　 301. 351 170. 305 P < 0. 01
合计 7
Td 组内 6 　 2. 028
组间 1 2 771. 401 8 201. 43 P < 0. 01
合计 7
　　F 0. 01 ( 1, 6)= 13. 75
T50、 Td分别是供试品Ⅰ 的 2. 54倍和 2. 96倍。 可
见 ,经加压膨化工艺处理后的甘草 ,其中甘草酸铵的
溶出速度较未经此工艺处理的甘草快。 通过薄层色
谱鉴别 ,发现两者斑点一致。 表明在清音袋泡剂中 ,
将甘草进行加压膨化处理是可行的。
3. 2　与普通的水煎法相比 ,采用加压膨化技术处理
此类结构致密的根茎类药材具有工艺简单、省时节
能等优势 ,在实际生产中 ,有较好的应用前景。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed , VolⅠ .
[2 ]　 Zhang C H, Zh ou Y Z, Liu Y F. Stat isti cal Method s (数理统
计方法 ) [ M ]. Jinan: Shandong Universi ty Publi shing House,
1995.
反相离子对色谱法测定百艾洗液中苦参碱的含量
顾洪安 1 ,贾晶莹 1 ,许丁成 2 ,魏祥符 2 ,季　申 3 ,余　琛 1
( 1. 上海市徐汇区中心医院 ,上海　 200031; 2. 湖南守护神制药有限公司 ,湖南 长沙　 410329; 3. 上海市药品检验所 ,上海
200233)
　　苦参为豆科植物苦参 Sophora f lavescens Ait.
的干燥根 ,具有清热燥湿、杀虫、利尿的功效 [1 ]。其主
要化学成分为苦参碱 ( matrine)、槐定碱 ( sophori-
dine) [2 ]等。 以苦参、百部、黄柏、艾叶等为主要成分
的百艾洗液 ,具有良好清热解毒、燥湿杀虫、祛风止
痒的疗效。为了更好地对该制剂进行质量控制 ,本实
验建立了反相离子对色谱法测定百艾洗液中苦参碱
的含量 ,样品预处理采用微量提取法。
1　仪器与试药
Shimadzu LC— 10A T泵 , SPD— 10Avp紫外检
测器 ; Rheodyne 7125六通进样阀 ( Loop= 20μL) ;
杭州英谱 HS色谱工作站 V 4. 0+ fo r Windows 95。
　　苦参碱对照品 (中国药品生物制品检定所提供 ,
含量为 99. 23% )。百艾洗液由湖南守护神制药有限
公司研制。乙腈、三氟醋酸均为分析纯。水为二次重
蒸水。
2　方法与结果
2. 1　 色谱条件: 色谱柱 为 DiamonsilTM C18柱
( 250 mm× 4. 6 mm, 5μm) ,流动相为乙腈-0. 1%三
氟醋酸溶液 ( 7. 5∶ 92. 5) ,检测波长为 204 nm ,流速
为 1 mL /min。苦参碱在此色谱条件下的保留时间
为 11 min。色谱图见图 1。
2. 2　对照品溶液的配制: 取苦参碱对照品适量 ,精
密称定 ,加甲醇制成 1. 0 mg /mL的溶液 ,作为对照
品贮备液 A。精密吸取对照品贮备液 A 10. 0 mL置
100 mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,制成 100
μg /mL的溶液 ,作为对照品贮备液 B。 精密吸取对
照品贮备液 B 7 mL置 10 mL量瓶中 ,加流动相稀
释至刻度 ,摇匀 ,制成 70μg /mL的溶液 ,作为对照
品溶液。
2. 3　供试品溶液的制备:精密量取本品 1 mL,置
10 mL量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀。精密量取稀释液
1 mL置 10 mL玻璃试管中 ,加入 100μL浓氨水混
匀碱化 ,加 5 mL三氯甲烷 ,经旋涡振荡 -超声处理-
离心分层 (旋涡振荡 1 min,超声处理 1 min, 4 000
r /min离心分层 2min) ;取下层三氯甲烷置 10 mL
玻璃试管中 ,同法再提取一次 ,合并二次有机相 ,氮
气吹干 ,用 1. 0 mL流动相重组 ,高速离心 ( 12 000
r /min) 1 min,即得。
2. 4　空白试验: 取不含苦参的模拟洗液 ,按 2. 3项
下方法操作 ,即得。 精密吸取 20μL注入液相色谱
仪 ,测定分析 ,结果显示无干扰。色谱图见图 1。
2. 5　线性关系考察: 精密量取对照品贮备液 B
( 100μg /m L) 4. 0, 5. 0, 6. 0, 7. 0, 8. 0, 9. 0 m L置 10
mL量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀。 精密量取
20μL注入色谱仪。 以峰面积 ( A )为纵坐标 ,加入量
(C )为横坐标 ,进行线性回归 ,得回归方程 A=
1 755. 1+ 690. 8C , r= 0. 9999。结果表明 ,苦参碱在
·1001·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
收稿日期: 2003-02-28
* -苦参碱
* -matrin e
图 1　苦参碱对照品 (A)、空白 (B)和百艾洗液 ( C)的 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromatograms of matr ine (A) , blank (B) and Baiai Lotion (C)
40. 0～ 100. 0μg /mL线性关系良好。
2. 6　精密度试验: 精密量取对照品贮备液 B ( 100
μg /mL) 5. 0, 7. 0, 9. 0 mL置 10 mL量瓶中 ,加流动
相稀释至刻度 ,摇匀。 精密量取 20μL注入色谱仪 ,
重复进样 5次。 计算苦参碱峰面积 RSD分别为
0. 92% , 0. 35% , 0. 44% 。
2. 7　稳定性试验: 将供试品溶液室温放置 ,分别在
0, 2, 4, 8, 12, 24, 48 h精密量取 20μL注入色谱仪 ,
测定峰面积。 计算得苦参碱峰面积的 RSD为
0. 85% 。
2. 8　回收率试验
2. 8. 1　空白回收率试验: 取不含苦参的模拟洗液 ,
精密量取 1 mL置 10 mL量瓶 ,分别精密加入一定
量的苦参碱对照品 ,加水至刻度 ,混匀 ,按 2. 3项下
方法操作。 精密吸取 20μL,注入液相色谱仪 ,测定
分析 ,计算回收率。结果见表 1。
2. 8. 2　加样回收率试验: 取已知含量的百艾洗液
(批号为 20000703,含量为 1. 193 mg /mL) ,精密量
取 1 mL置于 10 mL量瓶 ,分别精密加入一定量的
苦参碱对照品 ,加水至刻度 ,混匀。按 2. 3项下方法
操作 ,加入流动相 2. 0 mL,经旋涡振荡及高速离心。
精密吸取 20μL,注入液相色谱仪 ,测定分析 ,计算
回收率。结果见表 1。
表 1　回收率试验结果 ( n= 3)
Table 1　Results of recovery test ( n= 3)
加入
量 /mg
空白回收率
平均回收率 /% RSD /%
加样回收率
平均回收率 /% RSD /%
1. 00 98. 2 0. 73 101. 6 1. 61
1. 20 101. 3 1. 21 101. 0 1. 38
1. 40 100. 7 0. 70 101. 5 1. 77
2. 9　样品的测定:取不同批号的百艾洗液按 2. 3项
下方法进行制备。 分别精密量取供试品溶液和对照
溶液各 20μL,注入色谱仪 ,测定峰面积。按外标法
计算各批的样品含量 ,结果见表 2。
表 2　百艾洗液中苦参碱含量 ( n= 3)
Table 2　Content of matr ine in Baiai Lotion (n= 3)
批　号 苦参碱 /( mg· mL- 1 ) RSD /%
010412 1. 033 2. 05
010414 1. 059 0. 78
010506 1. 055 2. 43
3　讨论
3. 1　色谱条件的优化:苦参碱属喹喏里西定类生物
碱 ,在中性和偏酸性的条件下易解离为阳离子。在目
前广泛使用十八烷基硅烷键合相 ( C18 )为固定相的
反相色谱系统中 ,其分离效果不佳 ,故在早期的文献
中报道用氨基键合相 [3 ]或硅胶 [ 4]为固定相进行分
离 ,但其效果亦不太理想 (塔板数仅约为 1 000～
1 200) ,其原因可能是由于苦参碱的极性较大的缘
故。国外文献报道 [5 ]可采用以 SDS作离子对的离子
对色谱法分离中药中的苦参碱。鉴于 SDS在低波长
处干扰较大 ,故考虑试以三氟醋酸为离子对试剂 ,对
本品的色谱分离条件进行实验。结果显示 ,以十八烷
基硅烷键合相为固定相 ,以乙腈 -0. 1%三氟醋酸溶
液 ( 7. 5∶ 92. 5)为流动相 ,苦参碱的保留时间为 11
min左右 ,其理论塔板数大于 5 000,拖尾因子小于
0. 7,分离度等情况远优于常规的反相色谱法 ,完全
符合《中华人民共和国药典》要求。
3. 2　样品预处理:文献 [3 ]报道采用氨碱性情况下 ,
氯仿超声提取 -柱分离 -挥干定容法 ,氯仿用量大且
预处理时间较长 ;本实验以百艾洗液为样品 ,用浓氨
试液碱化后 ,比较了氯仿静置过夜与超声提取法 ,结
果测得苦参碱含量一致 ,均无内源性杂质的干扰。采
用微量法样品用量少 ,且所需的有机试剂量比文
献 [3 ] ( 30 mL)明显减少 ,污染少 ,便于操作。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅠ .
[2 ]　 Wang M Z, Ch en Y H, Xiang H Y, et al . The HPLC Analy -
·1002· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
sis for Common Chinese Herbal Medicine (常用中草药高效液
相色谱分析 ) [M ] . Beijing: Science Press , 1999.
[3 ]　 Jin L X, Cui Y Y, Zhang G D, et al . Determinat ion of alk a-
loid in Rad ix Sophorae Flavescent is by HPLC [J ]. Acta
Pharm S in (药学学报 ) , 1993, 28( 2): 136-139.
[4 ]　 Xu L, Sha S Y, Zeng J Y, et al . The Analysical Methods of
Ef fective Components in Ch inese Herbal Med icine [M ]. Part
B. Beijing: People s Medical Publishing House, 1984.
[5 ]　 Ping S. Determinat ion of alkaloids in Sophora root by HPLC
[ J ]. Nat Med , 1995, 49: 317.
强力枇杷露的质量标准研究
朱长福 ,同利琪 ,由会玲 ,丁　宁
(河北医科大学 ,河北 石家庄　 050091)
　　强力枇杷露属《中华人民共和国卫生部标准》中
药成方制剂二册收载品种 ,标准中仅有两项试管反
应鉴别 ,无法控制成药质量。该处方由百部、枇杷叶、
罂粟壳、薄荷脑等 7味中药组成。本实验对罂粟壳、
薄荷脑、百部采用 TLC法鉴别 ,并对罂粟壳中吗啡
采用 HPLC法进行了含量测定。
　　吗啡的含量测定方法报道较多 ,有气相色谱
法 [1, 2 ]、高效液相色谱法 [3～ 5 ]等。高效液相色谱法选
择性强、结果准确。因此 ,本实验采用高效液相色谱
法测定吗啡的含量。
1　仪器与试药
美国 Waters高效液相色谱仪 ,包括 515泵 ,
2478双通道 UV检测器 , 717自动进样系统 , Mil-
lennium
32色谱工作站。UV 2100分光光度计 (日本岛
津 )。 KQ— 250DE型医用数控超声波清洗器 (上海
昆山 ) ;甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯 ;吗啡对
照品 (供含量测定用 ,批号 1201-200016)、薄荷脑对
照品 (供含量测定用 ,批号 0728-20005)和百部对照
药材 ,均由中国药品生物制品检定所提供 ;强力枇杷
露 (自制 )。
2　薄层鉴别
2. 1　薄荷脑:取本品 40 mL置分液漏斗中 ,加石油
醚 ( 30℃～ 60℃ ) 40 mL,振摇提取 ,分取石油醚液 ,
自然挥干 ,残渣加乙醇 1 mL使溶解 ,作为供试品溶
液。缺薄荷脑阴性对照供试液同法制备。 另取薄荷
脑对照品 ,加乙醇制成 1 mg /mL的对照品溶液。分
别吸取供试品溶液、阴性对照溶液各 10μL,对照品
溶液 5μL,点于同一硅胶 G薄层板上 ,以石油醚 ( 30
℃～ 60℃ )-醋酸乙酯 ( 5∶ 1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,
晾干 ,喷以 4%香草醛乙醇 -浓硫酸 ( 100∶ 6)溶液 ,
加热至斑点显色清晰 ,见图 1-A。
2. 2　罂粟壳:取本品 40 mL,置分液漏斗中 ,加水
20 mL,加氨试液调至 pH 11～ 13,用氯仿 40 mL振
摇提取 ,分取氯仿液 ,蒸干 ,残渣加乙醇 1 mL使溶
解 ,作为供试品溶液。缺罂粟壳对照供试液同法制
备。 另取吗啡对照品 ,加乙醇 -0. 1 mol /L盐酸 ( 1∶
1)溶解 ,制成 0. 02 mg /mL的溶液 ,作为对照品溶
液。分别吸取供试液、阴性对照液、对照品溶液各 10
μL,点于同一硅胶 G薄层板上 ,以甲苯 -丙酮 -乙醇-
浓氨水 ( 20∶ 20∶ 3∶ 1)为展开剂 ,展开 ,取出晾干 ,
喷以碘化铋钾试液。 见图 1-B。
2. 3　百部: 取本品 30 mL,加正丁醇 30 mL萃取 ,
正丁醇液蒸干 ,残渣加甲醇 1 mL溶解 ,作为供试品
溶液。缺百部阴性对照供试液同法制备。另取百部
对照药材粉 2 g ,加正丁醇 30 mL浸泡过夜 ,滤过 ,
正丁醇液蒸干 ,残渣加甲醇 1 mL溶解 ,作为对照药
材溶液。 分别吸取上述溶液各 5μL,点于同一高效
硅胶 G薄层板上 ,以甲苯-丙酮 -乙醇 -氨水 ( 20∶
20∶ 3∶ 1)为展开剂 ,展开 ,取出晾干 ,喷以改良碘化
铋钾试液。见图 1-C。
3　吗啡的含量测定
3. 1　色谱条件与系统适应性试验:用十八烷基
硅烷键合硅胶为填充剂 ;流动相 A: 醋酸-醋酸钠缓
冲溶液 ( 0. 1 mol /L醋酸钠溶液用冰醋酸调 pH
4. 3) ,流动相 B:甲醇 , 0～ 25 min, A-B( 15∶ 1) , 25～
40 min, A-B( 80∶ 20) , 40～ 55 min, A-B( 15∶ 40)。
检测波长为 286 nm。理论板数按吗啡峰计算 ,应不
低于 2 500。
·1003·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
收稿日期: 2003-02-12基金项目:石家庄市科技攻关基金 ( 0330611)作者简介:朱长福 ( 1955— ) ,男 ,天津人 ,高级工程师 , 1981年毕业于北京中医学院中药系 ,分配到石家庄乐仁堂药厂任技术厂长 , 1992年调入卫生部机关事务服务中心 ,任华卫实业总公司总经理助理 , 1995年应聘任河北医科大学中医学院药植鉴定教研室主任 ,从事中药资源利用方面研究及中药新药开发研究工作。