全 文 ：2. 6　精密度试验: 精密吸取对照品溶液 20μL,重
复进样 5次 ,测得大黄素峰面积 RSD为 0. 97% ;大
黄酚峰面积 RSD为 0. 80% 。
2. 7　重现性试验:取同一批 (批号: 20030728)样品
5份 ,制备供试品溶液 ,精密吸取 20μL,测定 ,测得
大黄素质量分数为 0. 149 mg /g , RSD为 2. 25%
(n= 5) ;大黄酚质量分数为 0. 478 mg /g , RSD为
2. 33% (n= 5)。
2. 8　稳定性试验: 取同一供试品溶液 ,精密吸取 20
μL,分别于 0、 5、 13、 24、 28 h测定大黄素、大黄酚的
峰面积 ,计算得 RSD分别为 0. 78% 、 0. 29% 。说明
供试品溶液在 28 h内基本稳定。
2. 9　回收率试验:采用加样回收法。取本品 5份 (批
号: 20030728,含大黄素 0. 149 mg /g、大黄酚 0. 478
mg /g ) ,每份约 0. 4 g精密称定 ,分别精密加入大黄
素、大黄酚对照品溶液 (含大黄素 0. 076 mg /mL、大
黄酚 0. 167 mg /mL) 1 mL,按供试品溶液制备方法
制备 ,测定 ,计算回收率 ,结果大黄素回收率为
100. 2% , RSD为 1. 1% ;大黄酚回收率为 99. 4% ,
RSD为 0. 8% 。
2. 10　样品测定: 对 3批样品进行测定 ,结果见表
1。 本品以大黄素和大黄酚的总量计 ,不得少于 0. 5
mg /g。
表 1　开胸理气冲剂中大黄素和大黄酚
的含量测定结果 ( n= 3)
Table 1　 Contents of emodin and chrysophanol
in Kaixiong Liqi Granules (n= 3)
批号 大黄素
/ ( mg· g- 1)
大黄酚
/ ( mg· g- 1)
大黄素+ 大黄酚
/ ( mg· g- 1)
20030728 0. 149 0. 478 0. 627
20030809 0. 180 0. 469 0. 649
20030816 0. 163 0. 495 0. 658
3　讨论
　　《中华人民共和国药典》 2000版一部“大黄”项
下对大黄素、大黄酚的 HPLC定量所用检测波长为
254 nm,本实验使用检测时 ,结果干扰很大。 经摸
索 ,用乙腈 -0. 1%磷酸溶液 ( 70∶ 30)做流动相 ,检测
波长改为大黄素、大黄酚均有吸收峰的 287 nm ,避
开杂质干扰 ,大黄素、大黄酚分离效果好。
　　在样品处理时 ,若先用甲醇提取 ,再用氯仿回流
提取 ,杂质太多 ,干扰测定结果 ,后直接用氯仿回流
提取 ,再用 2. 5 mol /L硫酸溶液超声震荡提取 5
min,测量结果回收率高、重现性好 ,干扰小。
Reference:
[1 ]　 Chang J M , Gao H, Zhang X, et al . Determination of emodin
and ch rys oph nol in Rheum rhizastachyum Sch renk by HPLC
[ J ]. West China J Pharm Sci (华西药学杂志 ) , 2003, 18( 1):
57-58.
RP-HPLC测定小儿感冒退热糖浆中连翘苷的含量
黄诺嘉 ,杨文红 ,郑剑红
(汕头市药品检验所 ,广东 汕头　 515041)
　　小儿感冒退热糖浆是由连翘、大青叶、紫苏叶、
桑枝等 7味中药制成的中药制剂 ,具有清热解毒、疏
风解表之功效 ,临床上用于治疗伤风感冒 ,畏冷发
热 ,咽喉肿痛 ,头疼咳嗽。原有的《广东省药品标准》
仅规定了 3个理化反应作为定性鉴别来控制质量 ,
尚未有定量指标。连翘是该制剂的主药 ,连翘中的有
效成分连翘苷具有较强的抗菌、抗炎作用。本实验以
连翘苷为该制剂的质量控制指标 ,建立了 RP-
HPLC法测定小儿感冒退热糖浆中连翘苷含量的方
法。该法简单、结果准确 ,重现性好 ,可用于该药的质
量控制。
1　仪器与试药
TSP— 2000A高效液相色谱仪 (美国 TSP) ,
UV— 6000检测器 , P— 2000泵 , PC— 1000色谱工
作站。连翘苷对照品由中国药品生物制品检定所提
供 ,批号: 0821-9602,供含量测定用。 小儿感冒退热
糖浆、缺连翘阴性对照均由汕头市时代制药厂提供。
乙腈为色谱纯 ,水为重蒸馏水 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: ODS柱 ( 150 mm× 4. 6
mm , 5μm,大连依利特科学仪器有限公司 ) ;流动
相: 乙腈 -水 ( 22∶ 78) ;体积流量: 1 mL /min;柱温:
·768· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 7期 2004年 7月
收稿日期: 2003-11-22作者简介:黄诺嘉 ( 1956— ) ,广东汕头人 ,副主任药师 ,主要从事药物分析和质量标准研究工作 ,发表论文 50余篇。 Tel: ( 0754) 8392240
室温 ;检测波长: 277 nm[1 ] ;进样量: 20μL。
2. 2　溶液的制备
2. 2. 1　供试品溶液的制备 [2, 3 ]:取本品 5支 ,混匀 ,
精密量取 20 mL,置锥形瓶中 ,加氯仿 ,水浴回流提
取 4次 ,每次 40 mL,回流 30 min,合并 4次氯仿液 ,
水浴蒸干 ,残渣加甲醇 1 mL使溶解 ,加中性氧化铝
1 g拌匀 ,加于已装好的中性氧化铝柱 ( 100～ 200
目 , 5 g ,内径 1～ 1. 5 cm)上 ,用 70%乙醇 100 mL洗
脱 ,收集洗脱液 ,浓缩至干 ,残渣用甲醇溶解后转移
至 5 mL量瓶中 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,用微孔滤膜
( 0. 45 mg )滤过 ,作为供试品溶液。
2. 2. 2　阴性对照溶液的制备: 取缺连翘的阴性样
品 ,按 2. 2. 1项下方法制备 ,作为阴性对照溶液。
2. 2. 3　对照品溶液的制备: 精密称取连翘苷对照品
( P2O5真空干燥 24 h) 27. 04 mg ,置 25 mL量瓶中 ,加
甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得 1. 082 mg /mL对照品溶液。
2. 3　色谱系统适应性试验: 分别取上述对照品溶
液、供试品溶液、阴性对照溶液各 20μL注入色谱
仪 ,记录色谱图 (图 1)。结果供试品溶液在与连翘苷
相同保留时间处有连翘苷色谱峰出现 ,且连翘苷与
其他组份分离完全 ,而阴性对照溶液无干扰。理论板
数按连翘苷峰计大于 3 000。
* -连翘苷
* -fors ythin
图 1　连翘苷对照品 (A)、小儿感冒退热糖浆 (B)
和缺连翘阴性对照 (C)的 HPLC图
Fig. 1　 HPLC of forsythin ( A) , Xiao er Ganmaotuire
Syrup (B) , and negat ive sample (C)
2. 4　线性关系的考察:分别吸取连翘苷对照品溶液
0. 06、 0. 12、 0. 25、 0. 50、 0. 75、 1. 00、 1. 50、 2. 00 mL
置 5 mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀。 结果连
翘苷在 12. 98～ 432. 8μg /mL与峰面积线性关系良
好 ,其回归方程为 Y = 2. 340 3× 105+ 6. 522 7×
107 X , r= 0. 999 8。
2. 5　精密度试验: 精密吸取同一供试品溶液 ,重复
进样 5次 ,测定连翘苷峰面积 ,计算得 RSD为
0. 87% (n= 5) ,色谱峰保留时间的 RSD为 0. 79%
(n= 5)。
2. 6　重现性试验:取同一批样品 5份 ,制备供试品
溶液 ,按上述色谱条件进行测定 ,结果连翘苷质量分
数为 0. 29 mg /支 , RSD为 0. 90% (n= 5)。
2. 7　稳定性试验:取连翘苷对照品溶液 ,于室温下
0、 1、 2、 3、 6、 10 h各进样 1次 ,测定峰面积 ,结果
RSD为 0. 70% (n= 6)。取同一供试品溶液 ,于室温
下 0、 1、 2、 3、 6、 10 h各进样 1次 ,测定连翘苷峰面
积 ,结果 RSD为 1. 14% (n= 6)。表明连翘苷对照品
溶液和供试品溶液在 10 h内稳定。
2. 8　加样回收率试验:精密量取已知含量的样品适
量 (含连翘苷 0. 148 4 mg ) ,各准确加入连翘苷对照
品 0. 162 3 mg ,依法提取测定 ,记录色谱图 ,计算连
翘苷含量 ,结果平均回收率为 99. 62% , RSD为
0. 74% (n= 4)。
2. 9　样品含量测定: 取各批号样品 ,制备供试品溶
液 ,分别精密吸取连翘苷对照品溶液与供试品溶液
各 20μL,注入液相色谱仪 ,按上述色谱条件测定 ,
结果见表 1。
表 1　小儿感冒退热糖浆中连翘苷测定结果 (n= 6)
Table 1　 Forsythin in Xiao er Ganmaotuire Syrup (n= 6)
批号 连翘苷 / ( mg· 支 - 1) 批号 连翘苷 /( mg· 支 - 1 )
990408 0. 81 020322 0. 29
990608 0. 74 020323 0. 28
020321 0. 37 020822 0. 29
3　讨论
3. 1　小儿感冒退热糖浆为中药复方制剂 ,各种成份
相互干扰 ,采用乙腈 -水不同比例为流动相 ,结果表
明当乙腈与水的体积比为 22∶ 78时 ,分离效果较
好 ,且阴性对照无干扰。
3. 2　在供试品溶液的制备时取样品直接上 D101型
大孔树脂柱 ,收集 70%乙醇洗脱液 ,蒸干后定容测
定 ,结果色谱图中连翘苷基线抬高。取样品于室温下
用氯仿直接萃取 ,氯仿液蒸干后定容测定 ,结果连翘
苷的分离度差。 采用氯仿加热回流提取或氯仿于室
温下振摇萃取 ,氯仿液浓缩后上中性氧化铝柱的方
法。结果表明:加热回流比室温振摇萃取完全。对加
热回流的次数进行比较 ,前 3次回流的提取率约为
95. 8% ,第 4次回流的提取率约为 4. 2% ,故提取 4
次为佳。对上柱后的 70%乙醇洗脱液的洗脱量进行
考察 ,洗脱液量分别为 50、 100、 150 mL,结果当洗脱
液量为 100 mL时 ,洗脱的效果较 50 mL洗脱的为
佳 ,且与 150 mL洗脱的结果相一致 ,故选用洗脱液
量为 100 mL。
3. 3　从测定结果来看 ,不同批号之间 ,连翘苷的含
量差异较大 ,这可能与药材质量不稳定有关 ,因而有
·769·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 7期 2004年 7月
必要在质量标准中增加对连翘苷含量的控制。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [ S] . VolⅠ . 2000.
[2 ]　 Zhang W , Zh ang H M, Guo M L. Determination of forsythin
in Fructus Forsythiae and Ganmaotui re Granu les by RP-HPLC
[ J ]. Ch in Trad it Pat Med (中成药 ) , 1999, 21( 9): 452-453.
[3 ]　 Zhang G G, Xu S X, Wang X Y. Quan ti tativ e determination
of ph ylli rin in th e Antivi rotic Oral Liquid b y HPLC [ J] . J
Shenyang Pharm Univ (沈阳药科大学学报 ) , 1998, 15 ( 2):
90-93.
HPLC法测定升血灵片中大黄素的含量
王曙东 ,费建红 ,腾英博 ,谢虞 ,陈安兰
(南京军区南京总医院 ,江苏 南京　 210002)
　　升血灵片是我院制剂科与血液科共同研制的用
于升血小板的中药制剂。本方由牛西西、黄芪、黄精、
生地、熟地、肿节风等 10味中药组成 ,具有益气生
血、补肾摄血 ,用于血小板减少及其引起的紫癜、皮
肤、黏膜、牙龈出血等症。方中牛西西具有活血止血
之功效 ,主治血小板减少症、内出血、跌打损伤等症。
临床有较好的疗效。大黄素为牛西西中活性成分。为
更好地控制药品质量 ,本实验采用 HPLC法对大黄
素进行了含量测定。
1　仪器与试剂
1525— 2996高效液相色谱分析仪 (美国 Waters
公司 ) ,大黄素 (中国药品生物生物品检定所 ,批号:
0756-200110) ,所用试剂除甲醇为色谱纯外均为分
析纯 ,升血灵片 (本院制剂科提供 ,批号: 001212、
010702、 020309)。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱 Lich ro spher C18 ( 150 mm×
4. 6 mm , 5μm);流动相:甲醇-0. 1%磷酸溶液 ( 85∶
15) ;检测波长: 439 nm;体积流量: 1. 0 mL /min;进
样量: 10μL。
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取大黄素对照品适
量 ,加甲醇溶解并稀释成 0. 5 mg /mL溶液 ,备用。
2. 3　供试品溶液的制备:取供试品 20片 ,去糖衣 ,
烘干 ,研细 ,精密称取约 4 g ,加乙醇 100 mL,加热回
流 1 h ,放冷 ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加水 40 mL,氯仿
40 m L,盐酸 ( 1∶ 1) 6 m L,加热回流 1 h,冷却 ,分取
氯仿液 ,水溶液再用氯仿萃取 3次 ( 20、 15、 15 mL) ,
合并氯仿液 ,蒸干 ,残渣加甲醇至 1 m L,摇匀 ,备用。
2. 4　阴性对照溶液的制备: 按处方称取除牛西西以外
的药材相应量。 加水煎煮 2次 ,每次 100 mL,煎煮 1
h,合并煎煮液 ,浓缩至 30 mL,加乙醇至 100 mL,放
置过夜 ,滤过 ,滤液挥至约 4 mL,余同供试品溶液的制
备项下“加水 40 mL,氯仿 40 mL……”操作 ,即得。
2. 5　干扰试验:取供试品溶液、大黄素对照品溶液
和缺牛西西的阴性对照溶液各 10μL分别进样 ,记
录见图 1。可见 ,升血灵片中其他成分对大黄素的含
量测定无干扰。
* -大黄素
* -emodin
图 1　大黄素对照品 ( A)、升血灵片 (B)和缺
牛西西阴性对照 ( C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC of emodin (A) , Shengxueling
Tablet (B) , and negative sample (C)
2. 6　线性关系考察:精密量取大黄素对照品溶液适
量 ,加甲醇制成 0. 5、 0. 4、 0. 2、 0. 1、 0. 05 mg /mL的
系列溶液 ,在选定的色谱条件下 ,取 10μL进样 ,记
录。 以峰面积 ( A )对质量浓度 (C )进行线性回归 ,得
线性方程: A = 2. 43× 107 + 6. 06× 104 C , r =
0. 999 7。可见大黄素在 0. 5～ 0. 05 mg /mL与峰面
积线性关系良好。
2. 7　稳定性试验: 取供试品溶液 ,室温下连续 3 d
测定峰面积 ,结果大黄素峰面积 RSD为 1. 24%
(n= 3)。
2. 8　精密度试验:取同一供试品液进行 6次进样 ,
测定峰面积 ,结果大黄素峰面积 RSD为 0. 87%
(n= 6)。
2. 9　回收率试验: 精密称取已知大黄素含量 (含大
黄素约 0. 09 mg /g )的样品 2 g,分别加 0. 108 mg /
mL大黄素对照品溶液 1. 4、 1. 6、 1. 8、 2 mL,按供试
·770· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 7期 2004年 7月
收稿日期: 2003-11-13