全 文 ：三氯化铝络合分光光度法测定淫羊藿中总黄酮含量
赵大洲1, 2, 徐本明1, 刘 珂1Ξ
(11 烟台大学药学院, 山东 烟台 264003; 21 山东省天然药物工程技术研究中心, 山东 烟台 264003)
淫羊藿为 2000 年版《中华人民共和国药典》收
载品种, 具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功能。淫羊藿
总黄酮 (T FE) 是其主要活性成分, 目前常以 T FE
含量高低作为判断淫羊藿质量优劣和提取分离工艺
的指标。T FE 的含量测定方法采用紫外分光光度
法, 以淫羊霍苷为对照品, 在 270 nm 测定[1, 2 ]。笔者
认为上述测定方法存在一些问题, 即样品是否存在
270 nm 有吸收的非黄酮成分?通过对以上问题的研
究, 建立了 T FE 的含量测定方法: 样品经提取、三
氯化铝络合后, 采用分光光度法, 在 413 nm 处, 以
淫羊藿苷为对照品测定含量。
1 材料与仪器
UV —2401PC 型紫外分光光度计 (日本岛津公
司) ; 淫羊藿苷对照品, 中国药品生物制品检定所, 批
号为 0737—9910; 淫羊藿药材购自安国民生药材
行, 经刘珂教授鉴定为淫羊藿 Ep im ed ium brev icor2
num M ax im. 。试验所用其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
211 对照品溶液的制备: 精密称取淫羊藿苷对照品
适量, 加甲醇制成 011 m gömL 的溶液, 即得。
212 供试品溶液的制备: 取干燥的淫羊藿叶粉末
(过 40 目筛) 约 012 g, 精密称定, 置 50 mL 具塞锥
形瓶中, 精密加入稀乙醇 20 mL , 密塞, 称定质量, 超
声处理 1 h, 再称定质量, 用稀乙醇补足减失的质
量, 摇匀, 滤过, 取续滤液 1 mL , 置 10 mL 量瓶中,
加甲醇至刻度, 摇匀, 作为供试品溶液。
213 显色剂对紫外吸收光谱的影响: 精密量取淫羊
藿苷对照品溶液和供试品溶液各 110 mL , 置 10 mL
量瓶中, 加甲醇定容至刻度, 摇匀, 用甲醇作空白液,
按分光光度法, 在 200～ 500 nm 范围内进行扫描,
记录紫外吸收光谱, 见图 1。精密量取淫羊藿苷对照
品和供试品溶液各 310 mL , 置 10 mL 量瓶中, 加
1% A lC l3 (甲醇) 110 mL , 摇匀, 室温放置 15 m in,
同法制得空白液, 按分光光度法, 在 200～ 500 nm
范围内进行扫描, 记录紫外吸收光谱, 见图 2。
根据测定结果可看出, 通过显色后再采用紫外
分光光度法, 在 413 nm 处测定, 可以避开杂质的干
扰, 测定结果更合理。
12icariin 22samp le
12淫羊藿苷对照品溶液 22供试品溶液
图 1 络合前 (A)和络合后 (B)的紫外吸收光谱
F ig. 1 UV spectra before complex ing (A)
and af ter complex ing (B)
214 最大吸收波长及显色剂用量的确定: 精密量取
淫羊藿苷对照品溶液 310 mL 6 份和供试品溶液
310 mL 6 份, 分别置 10 mL 量瓶中, 各精密加入
1% A lC l3 (甲醇) 012, 015, 110, 210, 310, 410 mL ,
分别用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 室温放置 15 m in。同
法制得 6 份空白, 按分光光度法, 在 200～ 500 nm
波长范围内进行扫描。结果表明: 1) 1% A lC l3 (甲
醇) 的用量在 012～ 4. 0 mL 范围内不影响测定结
果; 2) 在 413 nm 处未经显色时几乎无吸收, 显色后
有吸收峰。为更好地避开干扰, 故选择在 413 nm 处
测定, 显色剂用量定为 1%A lC l3 (甲醇) 110 mL。
215 显色稳定性考察: 淫羊藿苷对照品溶液和供试
品溶液显色后, 放置不同时间测定吸光度。结果表
明, 淫羊藿苷对照品溶液和供试品溶液显色后 15～
120 m in 内显色稳定, 吸光度变化不大。
216 线性关系考察: 精密量取淫羊藿苷对照品溶液
110, 210, 310, 410, 610, 810 mL , 分别置 10 mL 量瓶
中, 精密加入 1% A lC l3 (甲醇) 110 mL , 用甲醇稀释
至刻度, 摇匀, 放置 15 m in。同法制得空白液, 按分
·312·中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
Ξ 收稿日期: 2003204219
作者简介: 赵大洲 (1971—) , 男, 湖北天门人, 执业药师, 中国海洋大学药化专业在职研究生, 主要从事天然药物研究。
T el: (0535) 6717618 Fax: (0535) 6717718 E2m ail: dazhou@ luye2pharm. com
光光度法, 在 413 nm 波长处测定吸光度, 以淫羊藿
苷对照品浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标, 绘制标准
曲 线, 进 行 线 性 回 归, 得 回 归 方 程 为:
Y = 010 144 X - 01000 9 相关系数: r= 01999 9, 结
果表明, 淫羊藿苷对照品在 10104～ 80132 ΛgömL
线性关系良好。
217 精密度考察: 取供试品溶液 310 mL , 置于 10
mL 量瓶中, 对同一供试品溶液连续测定 5 次,
R SD = 0. 37% , 结果表明该方法精密度良好。
218 回收率试验: 取淫羊藿样品 5 份, 每份约 012
g, 精密称定, 置 50 mL 具塞锥形瓶中, 分别精密加
入淫羊藿苷对照品约 15 m g, 按供试品溶液制备方
法制备供试品溶液, 取供试品溶液 310 mL , 置于 10
mL 量瓶中, 测定含量, 计算得平均回收率为
99194% , R SD = 1142%。
219 重现性试验: 取同一批淫羊藿样品 5 份, 分别
按供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液, 测
定 含 量, 结 果 分 别 为 7158% , 7143% , 7162% ,
7156% 和 7166% , R SD = 1174%。
2110 两种方法测量的结果比较: 将 219 中的 5 份
供试品溶液按《中华人民共和国药典》方法测量, 结
果分别为 10114% , 9197% , 10103% , 10111% 和
10107% , 平均值为 10106%。219 项下测量结果的
平均值为 7157%。
3 结论
通过比较淫羊藿苷、淫羊藿提取液经 1% A lC l3
(甲醇) 试液显色前后的紫外吸收光谱, 认为淫羊藿
提取液经 1% A lC l3 (甲醇) 试液显色后, 采用分光
光度法, 以淫羊藿苷为对照品, 在 413 nm 处测定药
材中 T FE 含量更合理。
References:
[ 1 ] M a H P, J ia Z P, X ie J W , et a l. Studies on ex traction and
separation of to tal flavono id of H erba Ep im ed ii [J ]1 W est
Ch ina J P harm S ci (华西药学杂志) , 2002, 17 (1) : 1231
[ 2 ] Ch P (中国药典) [S ]1 2000 ed. V o I1
新疆党参总黄酮和多糖的含量测定
李 艳1, 兰 卫2, 孙 萍1, 刘 霞3, 谢建新3Ξ
(11 石河子大学师范学院, 新疆 石河子 832003; 21 石河子大学药学院, 新疆 石河子 832003;
31 石河子大学医学院, 新疆 石河子 832003)
新疆党参Cod onop sis clem a tid ea (Sch renk) C.
B. C larke 为桔梗科党参属多年生草本植物, 药用根,
其性甘、平, 补脾胃、益气血、生津止渴, 是重要传统补
益药, 民间用于治疗功能性子宫出血、体虚无力、胃下
垂、风湿性心脏病等[1 ]。据报道, 新疆党参含 12 种生
命必需微量元素; 含 37 种挥发油[2 ] , 含糖类、皂苷、生
物碱等[1 ]。新疆党参在新疆均有分布, 且储量丰富, 但
并未得到充分开发利用。本实验首次运用超声技术[3 ]
从新疆党参中连续提取总黄酮、多糖并测定其含
量[4, 5 ] , 为正确评价新疆党参质量提供依据。
1 仪器、试剂及样品
111 仪器: 岛津UV —2401PC 紫外可见分光光度
计,DL 2360 超声波仪 (35 kH z, 浙江象山县石浦海天
电子仪器厂) , T G328B 分析天平, D ZKW —C 电子
恒温水浴 (北京光明医疗仪器厂) , R 2201 旋转蒸发
器 (上海申胜生物技术有限公司) , 索氏提取器。
112 材料与试剂: 新疆党参: 采自新疆天山, 经石河 子大学药学院生药教研室成玉怀副教授鉴定为新疆党参C. clem a tid ea (Sch renk) C. B. C larke。秋季挖取, 洗净, 阴干, 粉碎后过 65 目筛, 细粉于烘箱中60 ℃干燥 4 h 待用。芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所。其余试剂均为分析纯。2 新疆党参中总黄酮、多糖含量测定211 供试品溶液制备: 精密称取党参粉约 2 g, 置索氏提取器中, 用石油醚 (60 ℃～ 90 ℃) 水浴回流脱脂 2 次 (每次 2 h)。残渣挥干溶剂后, 置锥形瓶中, 加85% 乙醇 50 mL 浸泡 12 h, 超声提取 2 次, 每次 30m in。滤过, 另用少量 85% 乙醇多次洗涤滤渣, 并入提取液, 并转入 100 mL 量瓶中, 用 85% 乙醇定容,即得测总黄酮的新疆党参供试品液É。 将提尽黄酮后的党参残渣置 100 mL 锥形瓶中, 加 80% 乙醇 50 mL 超声提取 20 m in, 以除去单糖及一些苷类。残渣挥干乙醇后, 加水 50 mL 超声提取 30 m in 后滤过, 再加水 50 mL 重复超声提取 1
·412· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
Ξ 收稿日期: 2003205218