全 文 ：相出峰时间较长, 浪费试剂。采用甲醇02% 磷酸
溶液( 8020)为流动相, 节约时间,精密度和重现性
较好。
63 中医传统理论认为,酒性大热,有活血通络、行
药效之功。虎杖以酒炙, 酒力有助于增大其有效成
分在血脉中运行的速度和力量, 以增强虎杖散瘀定
痛的功效。实验中酒炙品中大黄素含量增加较多,
可能是虎杖吸入酒有助于大黄素的溶出。醋有活血
化瘀,引药归经等功效,可协同药物发挥药效。实验
中醋炙品中大黄素含量有增加, 可能是由于醋的主
要成分为醋酸, 结合态的大黄素在稀酸的作用下易
水解成为游离大黄素, 利于大黄素的提取。但实验
结果与传统的炮制可改变药效达增效理论是否相
吻合还有待进一步研究。
64 本实验结果表明,虎杖经酒炙、醋炙、盐炙后并
不影响白藜芦醇及大黄素含量, 且有利于有效成分
的溶出。初步建立了薄层扫描法和高效液相色谱法
测定虎杖不同炮制品中大黄素含量测定方法,操作
较为简单,重现性好,为制定虎杖现代炮制标准提供
了实验参考依据。
References:
[ 1] Ch P (中国药典) [ S ] 2000 ed. Vol
[ 2] Zhang X Y. T he chemical const ituents and isolation of alkaloids
from Rhiz omaPolygoni Cuspidat i [ J] Tianj inPhar m (天津药
学) , 1999, 11( 3) : 13
[ 3] Jiang H Y, Cai S F, Pan Y. Experimental study on Rhizoma
Polygoni Cuspi clati of diff erent processed products [ J] Chin
A rch T radi t Chin Med (中医药学刊) , 2002, 20( 8) : 426
[ 4] Xiong Y, S hao Y D, Hu G X, et al . Comparison of emodin in
Rhiz oma Polygomi Cuspid atin of dif ferent processed products
[ J] Tianjin Phar m (天津药学) , 2000, 12( 4) : 79
[ 5] Zhong S C, Guo H Q, S un P C, et al . Determinat ion of emodin
of Yigan Qingre Jiedu Capsule by T LC scanning [ J] Northw est
Pharm J (西北药学杂志) , 1999, 14( 5) : 198
[ 6] Tang X B, Wu J E, Zhao X Y, et al . Determinat ion of emodin in
Rhiz oma Polygoni Cusp id ati by H PLC [ J] Pr imary J Chin
Mater Med (基层中药杂志) , 2000, 14( 4) : 1718
[ 7] Chen F K. Deter minat ion of A cti ve Composit ion in Common
T radit ional Chinese Medicine (常用中草药有效成分含量测定 )
[ M ] Beijing: People s Medical Publishing House, 1997
HPLC法测定火麻仁油中大麻二酚的含量
张 岗,郭江宁,毕开顺
(沈阳药科大学药学院,辽宁 沈阳 110016)
摘 要:目的 建立 HPLC 法测定火麻仁油中大麻二酚含量的方法。方法 固定相为 I rregularHC18柱( 250 mm
46 mm, 10 m) ,流动相为甲醇乙腈水冰醋酸( 2550250 4) ,流速为 08 mL / min, 检测波长为 220 nm, 柱温为
室温。结果 大麻二酚在 1 2~ 96 g / mL 呈良好的线性关系( r = 0 999 4) ,平均回收率为 94 6% , RSD= 19%
( n= 9)。结论 本方法简便、准确、重现性好。
关键词:火麻仁油; 大麻二酚;高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2003) 05 041503
Determination of cannabidiol in hemp seed oil by HPLC
ZHANG Gang, GU O Jiangning, BI Kaishun
( School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)
Abstract: Object To develop the analysis method to determine the content of cannabidiol in the hemp seed
oil by HPLC. Methods T he chromatographic condition w as IrregularHC18 column ( 250 mm 46 mm, 10
m) . A mixture of methanolacetonitrilewateracet ic acid ( 25502504) was used as the mobile phase with a
flow rate of 08 mL/ min and the detect ion w avelength w as 220 nm at room temperature. Results The calibra
t ion curve for cannabidiol show ed good linear correlat ion within the concentrat ion range of 12 96 g/ mL ( r
= 0999 4) . The average recovery and RSD was 946% and 19% ( n = 9) respect ively. Conclusion T he
method is convenient, reliable and w ith good reappearance.
Key words: hemp seed oil; cannabidiol; HPLC
火麻仁为桑科植物大麻 Cannabis sat iva L. 的 干燥成熟果实, 有润燥滑肠通便之功效[ 1]。其中油
415中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
收稿日期: 20020809作者简介:张 岗( 1965 ) ,男,辽宁沈阳人,硕士研究生,研究方向为中药质量控制。 Email: gangzhang99@ sohu. com
脂成分含量较高, 某些地区用此榨油以供食用。但
食用过量常有中毒现象发生, 其主要毒性成分为大
麻酚类化合物[ 2] ,而大麻二酚是其中最重要的生理
活性成分之一, 具有致幻等毒性作用[ 3]。目前, 国
内外有关火麻仁油中大麻二酚含量测定, 主要采用
气相色谱法,但操作烦琐,对仪器要求较高。本实验
建立了测定火麻仁油中大麻二酚含量的 HPLC 方
法,该方法简便快捷,分离度、重现性均较好, 适用于
大麻二酚的定量分析, 同时也为评价火麻仁油的质
量提供了可靠保证。
1 仪器与试药
日本岛津 LC10AD高效液相色谱仪, SPD10A
紫外检测器,岛津 CR6A数据处理机; CSF1B超声
波清洗仪(上海超声仪器厂)。甲醇、乙腈(色谱纯,
山东禹王实业总公司化工厂) , 冰醋酸为分析纯试
剂;大麻二酚对照品( 1 mg/ mL, 中国药品生物制品
检定所)。火麻仁油为黑龙江省肇东市新城乡提供。
2 方法与结果
21 色 谱条件: 色谱 柱为 IrregularHC18 柱
( 250 mm 46 mm, 10 m) , 流动相为甲醇乙腈
水醋酸( 25502504) ,流速为 08 mL/ m in,检测
波长为 220 nm,进样量为 20 L,柱温为室温, 纸速
为 1 mm/ min。按外标法以峰面积定量。
22 溶液的制备
221 对照品溶液的制备:精密吸取大麻二酚对照
品03 mL( 1 mg / mL) ,置 5 mL 量瓶中,用甲醇洗涤
4次并转移至量瓶中, 用甲醇定容至刻度。摇匀得
对照品溶液,备用。
222 样品溶液的制备:取火麻仁油约 10 g,精密
称定, 置 10 mL 量瓶中, 加入 5 mL 甲醇, 超声提取
15 min,放冷至室温, 离心, 取上清液。同法提取两
次,合并上清液, 将溶剂挥干, 残留物用甲醇分次溶
解并定容至10 mL 量瓶中, 摇匀, 045 m 微孔滤膜
过滤后,取续滤液即得。
23 线性关系考察:分别精密量取对照品溶液 02,
03, 04, 05, 06, 07, 08 mL 置 5 mL 容量瓶中,加
甲醇至刻度,摇匀,用 045 m的微孔滤膜过滤, 取续
滤液按上述色谱条件进行分析。以峰面积为纵坐标
( Y ) ,浓度为横坐标( X )作图,大麻二酚的回归方程为
Y= 49 943X - 9 1066, r = 0999 4。结果表明, 大
麻二酚在 12~ 96 g/ mL 呈良好线性关系。
24 稳定性试验:取大麻二酚对照品溶液 06 mL
置于 5 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀。用 045
m 微孔滤膜过滤,取续滤液, 室温放置。在上述色
谱条件下,分别于 0, 2, 4, 8, 12 h 进样 20 L 进行分
析,测定峰面积几乎无变化, 其 RSD 为 18%。结
果表明,大麻二酚于甲醇溶液中 12 h内稳定。
25 精密度试验:精密量取对照品溶液 06 mL 置
5 mL 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用 045 m 的
微孔滤膜过滤,取续滤液连续进样 6次,大麻二酚峰
面积的 RSD 为 14%。
26 重现性试验:精密称取一定量火麻仁油 6份,
按 222 项下方法制备供试液, 在上述色谱条件下
吸取续滤液 20 L, 进样分析,大麻二酚含量的 RSD
为 19%, 表明分析结果重现性较好。
27 回收率试验:精密称取已知含量的火麻仁油 9
份,分别精密加入一定量的大麻二酚对照品溶液,按
222项下方法操作,进行回收率测定, 结果见表 1。
表 1 回收率试验( n= 9)
Table 1 Recovery test ( n= 9)
编号加入量/ g 实测量/ g 回收率/ % 平均回收率/ % R SD / %
1 15. 96 15. 03 94. 2
2 15. 96 15. 18 95. 1
3 15. 96 14. 75 92. 4
4 23. 04 21. 50 93. 3
5 23. 04 21. 40 92. 9 94. 6 1. 9
6 23. 04 24. 02 94. 8
7 37. 44 36. 39 97. 2
8 37. 44 34. 82 93. 0
9 37. 44 36. 73 98. 1
28 样品测定:取 6份样品溶液按上述色谱条件进
行分析, 根据标准曲线回归方程计算大麻二酚的含
量。黑龙江产火麻仁油中大麻二酚含量为 1521
g/g ( n = 6)。火麻仁油与大麻二酚对照品的
HPLC色谱图见图 1。
* 大麻二酚
* cannabidiol
图 1 大麻二酚( A)和火麻仁油( B)的 HPLC图谱
Fig. 1 HPLC chromatograms of cannabidiol ( A)
and hemp seed oil ( B)
416 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
3 讨论
31 火麻仁油中化学成分复杂,主要含有几种高级
脂肪酸及其甲酯,大麻二酚与其性质相近,其他方法
不易分离提取。本实验所用方法简便快速, 提取效
率高,同时比较了提取时间、提取次数及所用溶剂量
对提取的影响。结果表明:采用 5 mL 甲醇,提取 15
min,提取两次的效果最好。
32 紫外扫描结果显示,大麻二酚在 258 nm 有一
最大吸收峰, 但在 220 nm 处仍有较强吸收, 因此,
本实验根据参考文献[ 4, 5]选择 220 nm 作为检测波
长,灵敏度高,干扰小。
33 目前国内外对火麻仁油中大麻酚类化合物的
分析多采用气相色谱法, 但操作烦琐,因此本实验采
用HPLC 法对其主要活性成分大麻二酚进行分析。
结果证明本方法简便易行, 结果准确可靠,适宜测定
火麻仁油中大麻二酚的含量。
References:
[ 1] Ch P (中国药典) [ S ] 2000 ed. Vol
[ 2] Li F C. Clinical analysis of 15 cases on hemp seed oil poisoning
[ J] Shanxi Med J (山西医药杂志) , 1978, 6: 33
[ 3] Feriol V, Rust ichelli C, Pavesi G, et al . Analyt ical characterisa
tion of hashish samples [ J] Chromatographia, 2000, 52: 39
44
[ 4] Ndjoko K, Wolfender J L, Hostettmann K. Analysis of cannabi
noids by liquid chromatography thermospray mass spectromet ry
and l iquid chromatographytandem mass spect romet ry [ J] Chro
matographia , 1998, 47( 12) : 7276
[ 5] Rust ichelli C, Ferioli V , Vezzalin i F, et al . Simultaneous separa
tion and ident ification of hashish const ituents by coupled liquid
chromatographymass spectromet ry ( HPLCMS ) [ J] Chro
matographia , 1996, 43( 34) : 129134
生物化学发光法测定酸枣仁的抗氧化活性
王少敏, 李 萍* ,赵明强
(中国药科大学 生药教研室, 江苏 南京 210038)
酸枣仁能养肝宁心、敛汗生津,具有养心安神、催
眠的功能。主要含有脂肪油、黄酮和皂苷等物质[ 1]。
现代药理研究表明酸枣仁对内毒素诱发发热小鼠超
氧化物歧化酶(SOD)的降低具有保护作用[ 2] ,提示酸
枣仁可能具有抗氧化活性。为进一步确证酸枣仁的
抗氧化活性及其有效部位, 本实验采用化学发光方
法,应用邻苯三酚鲁米诺( Luminol)碳酸盐缓冲液,
邻菲罗啉Cu2+ 抗坏血酸H2O2,H2O2鲁米诺碳酸盐
缓冲液 3个产生自由基的体系和中国科学院生物物
理研究所改进的 BPCL4微弱发光测定仪,检测了酸
枣仁的乙醇提取物、总黄酮和总皂苷部位清除 O2 ,
OH,H2O2自由基的能力,为从酸枣仁类中药中寻找
和筛选自由基清除剂提供参考依据。
1 材料与仪器
酸枣仁采自河北邢台, 经中国药科大学生药教
研室李会军博士鉴定为酸枣 Ziz iphus j uj uba var.
sp inosa ( Bge) Hu ex H . F . Chou的干燥种子。
BPCL4 微弱发光测定仪及 BPCLAPP26 数
据处理工作站(中国科学院北京生物物理研究所) ;
焦性没食子酸(邻苯三酚, 遵义第二化学厂, 分析
纯) , 3氨基邻苯二甲酰肼(鲁米诺, Lum inol, Sigma
公司) , 邻菲罗啉(上海试剂三厂,分析纯) ,其他试剂
均为国产分析纯。
2 实验方法
21 样品制备: 实验所用药材粉碎后, 精密称取约
50 g,石油醚索氏提取法除脂后,用 70%乙醇热回流
( 1 h 2次) ,提取液浓缩得到半液体状稠膏,用适当
体积蒸馏水溶解稠膏得相当于 06 g 生药/ mL 的原
液,作为酸枣仁醇提物的样品,使用时用蒸馏水稀释。
另取粉碎药材 200 g, 按上述方法进行操作, 所
得稠膏用适当体积蒸馏水溶解后,用正丁醇萃取;用
5%氢氧化钾溶液洗涤正丁醇层,正丁醇层蒸干得总
皂苷部位;碱液层用稀盐酸中和至中性后用乙酸乙
酯萃取, 乙酸乙酯层蒸干得总黄酮部位。用蒸馏水
稀释得总黄酮部位原液( 1 g 生药/ mL)和总皂苷部
位原液( 1 g 生药/ mL) , 使用时用蒸馏水稀释。
22 O2 清除能力检测[ 3] :取待测样品各 10 L 于
测量管中 (以蒸馏水做空白对照 ) , 加入 20 L 1
417中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
收稿日期: 20020802作者简介:王少敏( 1978 ) ,女,安徽滁州人,中国药科大学 2000级生药学在读硕士, 2000年毕业于沈阳药科大学药学系,获理学学士学位。研究方向为天然药物活性成分的研究。
* 通讯作者 T el: ( 025)5322256 Fax: ( 025) 5322448 Email: lipingli@ publicl. pt t. js. cn