全 文 ：4　结论
研究表明 ,碱提山茱萸多糖 PFCCⅠ 是由木糖
和葡萄糖以 18. 8∶ 81. 2的摩尔比聚合而成的杂多
糖 ,其水溶性较好。对油脂抗氧化性能实验表明 ,该
多糖具有较好的抗氧化能力 ,是一种较好的天然抗
氧化剂: 对猪油的抗氧化能力接近于 V C,稍弱于
TBHQ;对植物油的抗氧化能力与 V C及 TBHQ接
近。以· OH清除剂苯甲酸和甘露醇为对照 ,用 Fen-
ton反应检测 PFCCⅠ对· OH的清除作用 ,三者对
· OH的清除率达 50%所需浓度为 18, 330, 80μg /
m L,说明该多糖对 Fenton体系产生的羟基自由基
有较强的清除作用 ; PFCCⅠ 对邻苯三酚体系产生
的 O÷2 有一定的清除作用 ,但清除率低于相同条件
下 V C对超氧阴离了自由基的清除率 ,二者达 50%
清除率所需浓度分别为 35. 0μg /mL和 22. 7μg /
mL。
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长柄梭罗细胞毒活性部位的化学成分研究
朱　慧 1 ,屠鹏飞 1* ,陈　琪 2 ,徐安龙 2
( 1. 北京大学药学院中医药现代研究中心 ,北京　 100083;　 2. 中山大学生命科学院 ,广东 广州　 510275)
摘　要: 目的　对长柄梭罗 Reevesia longipetiolata树皮具细胞毒活性的醋酸乙酯部分化学成分进行研究。 方法　
采用常压、加压硅胶柱色谱、 Sephadex LH-20凝胶柱色谱、高效液相色谱进行分离和纯化 ,通过理化和波谱分析方
法鉴定化合物结构。结果　从其醋酸乙酯部分分离得到 5个化合物 ,分别鉴定为 β -谷甾醇 (β -sito stero l,Ⅰ )、胡萝卜
苷 ( daucoster ol,Ⅱ )、白桦脂酸 ( betulinic acid,Ⅲ )、羽扇豆醇 ( lupeol,Ⅳ )和 (+ ) -儿茶素 [(+ ) -catechin,Ⅴ ]。结论　
5个化合物均为首次从该属植物中分得 ,并分别讨论了它们的细胞毒活性。
关键词: 长柄梭罗 ;细胞毒 ;化学成分
中图分类号: R284. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0976 03
Studies on chemical constituents of cytotoxicity portion in bark of Reeves ia longipet iolat
ZHU Hui
1 , T U Peng-fei
1 , CHEN Qi
2 , XU An-long
2
( 1. School of Pharmaceutical Sciences, Modern Resea rch Center o f TCM , Peking Univ er sity , Beijing 100083, China;
2. Schoo l o f Life Science, Sun Yat-sen Univ er sity , Guang zhou 510275, China )
Abstract: Object　 To study the chemical consti tuents of cy to tox icity portion in the bark of Reevesia
longipetiolata Mer r. et Chun. Methods　 The consti tuents w ere iso la ted and purified by various chro-
ma tog raphic methods, such as gel column chroma tog raphy under no rmal pressure and increased pressure,
Sephadex LH-20 column ch romatog raphy and HPLC, and the st ructures w ere identified by phy sicochemi-
cal properties and spect ral analysis. Results　 Five compounds w ere obtained in the ethyl aceta te f ractions
and identified as β -si tostero l (Ⅰ ) , daucosterol (Ⅱ ) , betulinic acid (Ⅲ ) , lupeol (Ⅳ ) and (+ ) -ca techin
(Ⅴ ) . Conclusion　 All above compounds are obtained from the plants o f Reevesia Lindl. fo r the fi rst time,
and thei r cy to toxicity is discussed.
Key words: Reevesia longipetiolata Merr, et Chun; cytotoxici ty; chemical consti tuent
·976· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
收稿日期: 2002-10-24
* 通讯作者　 Tel: ( 010) 82802750　 E-mai l: pengfei tu@ bim u. edu. cn
　　长柄梭罗 Reevesia longipetiolata Mer r. et
Chun为梧桐科梭罗树属植物 ,分布于海南、广东、广
西 ,生密林中 [1 ]。该属共有 14种 2变种 ,化学成分研
究皆未见报道。海南民间曾有中医将长柄梭罗树皮
用于癌症治疗。笔者对其树皮 70%乙醇提取物的石
油醚、醋酸乙酯、正丁醇及水 部分进行了体外抗肿
瘤实验初筛。 肿瘤细胞采用 96孔板培养噻唑蓝
( M TT)染色法 ,酶联免疫检测仪测定 490 nm吸光
度值 ,计算肿瘤细胞生长的半抑制浓度 ( IC50 )值。结
果发现醋酸乙酯部分对人肝癌 Hep-G2细胞株 IC50
值为 50μg /mL;正丁醇部分对人胃癌 Mgc细胞株
IC50值为 40μg /mL,对人肝癌 Hep-G2细胞株 IC50
值为 85μg /m L。 鉴于上述结果 ,本实验对其树皮
70%乙醇提取物的醋酸乙酯部分进行了化学成分研
究 ,分离得到 5个化合物 ,分别为 β-谷甾醇 (β-si to s-
terol,Ⅰ )、胡萝卜苷 ( daucostero l,Ⅱ )、白桦脂酸
(betulinic acid,Ⅲ )、羽扇豆醇 ( lupeol,Ⅳ )和 (+ ) -
儿茶素 [ (+ ) -ca techin,Ⅴ ]。以上化合物均为首次从
该属植物中分得。
1　仪器、试剂与材料
ELX800酶联免疫检测仪。熔点用 X T- 4A型
显微熔点仪 (未校正 )测定。 AA- 10R自动旋光仪。
1
H-NMR和 13 C-NM R用 JEOL JEM - AL300
( 1H-NMR, 300 MHz; 13 C-NM R, 75 M Hz)型核磁共
振仪 , TM S为内标。 EI-M S为 AEI- M S- 50质谱
仪。美国 Waters公司高效液相色谱仪 , Waters 2487
紫外检测器 ,检测波长为 213 nm , Waters 600工作
站。 高效液相制备柱用美国 Prep Nova- pak○R HR
C18柱 ( 7. 8 mm× 300 mm)。流动相为甲醇 -水 ( 35∶
65) ,流速为 2. 5 mL /min。二次制备时流动相为甲
醇 -水 ( 25∶ 75) ,流速为 3 mL /min。
长柄梭罗树皮采自海南省尖峰岭 ,经北京大学
天然药物学系屠鹏飞教授鉴定为长柄梭罗 R. long
ipetiolata Merr. et Chun的树皮 ,标本存放在北京
大学中医药现代研究中心标本室。
2　体外肿瘤细胞活性实验
2. 1　样品制备: 长柄梭罗树皮粗粉 100 g,用 8倍量
70%乙醇回流提取 ,每次 2 h ,共提取 3次 ,合并提取
液 ,减压浓缩至无醇味 ,悬于水中 ,依次用石油醚、醋
酸乙酯、正丁醇萃取。分别将石油醚、醋酸乙酯、正丁
醇及水部分浸膏干粉配制成 5 mg /mL的浓溶液。
2. 2　方法:将肿瘤细胞株复苏 ,传代。取对数生长期
细胞 ,稀释至约 1× 105个 /m L,接种于 96孔板上 ,每
孔 100μL。 37℃ , 5% CO2条件下培养 24 h。 加入
不同浓度样品液 ,每个浓度平行 3孔 ,并作阴性对照
和空白对照。 样品终浓度为 400, 200, 100, 50, 25,
12. 5, 6. 25μg /mL。培养 48 h后 ,加入 M TT( 5 mg /
mL) , 20μL /孔 ,培养 4 h后 3用 DMSO溶解沉淀 ,
于 490 nm波长下用酶联免疫检测仪检测吸光度
值 ,并计算细胞存活率。以细胞存活率对样品浓度作
图 ,求出 IC50值。
3　提取与分离
长柄梭罗树皮粗粉 4. 6 kg ,用 8倍量 70%乙醇
回流提取 ,每次 2 h,共提取 3次。合并提取液 ,减压
浓缩至无醇味 ,悬浮于水中 ,依次用石油醚、醋酸乙
酯、正丁醇萃取。 醋酸乙酯萃取物 33. 5 g经常压硅
胶柱色谱 ,石油醚 -丙酮 ( 20∶ 1→ 1∶ 1)梯度洗脱 ,
500 mL为 1流份 ,共收集 188流份。合并 29～ 37流
份 ,浓缩 ,重结晶 ,得化合物Ⅲ 333. 4 mg。合并 149～
170流份 ,浓缩 ,重结晶 ,得化合物Ⅱ 63. 0 mg。合并
8～ 26流份 ,再经反复硅胶柱色谱 ,石油醚-丙酮
( 50∶ 1→ 0∶ 1)梯度洗脱 ,得化合物Ⅰ 52. 7 mg和
Ⅴ 10 mg。合并 139～ 143流份 ,再经 Sephadex L H-
20多次纯化后 ,用 HPLC制备分离 ,并二次纯化得
化合物Ⅳ 9. 1 mg。
4　鉴定
化合物Ⅰ ;在石油醚 -丙酮 ( 1∶ 1)中为白色针
晶 , mp 142℃～ 143℃。 Liebermann-Burchard反应
呈阳性。与 β -谷甾醇对照品共薄层 , Rf值一致 ,混合
熔点不下降。此化合物鉴定为 β -谷甾醇。
化合物Ⅱ : 在丙酮中为白色粉末 , mp 305℃ (分
解 )。 Liebermann-Burchard反应和 Molish反应均
为阳性。其 1H-NMR, 13 C-NM R数据与文献报道 [ 2]的
胡萝卜苷基本一致。 确定此化合物为胡萝卜苷。
化合物Ⅲ : 在氯仿-甲醇 ( 2∶ 1)中为白色片状晶
体 , mp 282℃～ 285℃。 1H-NM R( DM SO-d6 )δ:
12. 05 ( 1H, brs, O H) , 4. 69( 1H, brs, H-30α) , 4. 56
( 1H, brs, H-30β ) , 3. 35 ( 1H, H-3 ) , 0. 65, 0. 76,
0. 87, 0. 93, 0. 98, 1. 64 ( 6× CH3 )。 13 C-NMRδ:
177. 2 ( C-28) , 150. 3( C-20) , 109. 7( C-30) , 76. 8( C-
3 ) , 55. 4 ( C-17) , 54. 9 ( C-5) , 49. 9 ( C-9) , 48. 5( C-
19) , 46. 6( C-18) , 42. 0( C-14) , 40. 3( C-8) , 39. 2( C-
1 ) , 39. 5( C-4) , 38. 5( C-13) , 37. 6( C-10) , 36. 7( C-
22) , 34. 0( C-7) , 31. 7( C-16) , 30. 1( C-15) , 29. 2( C-
21) , 28. 1( C-23) , 27. 2( C-2) , 25. 1( C-12) , 20. 5( C-
11) , 19. 0( C-29) , 18. 0( C-6) , 16. 0( C-25) , 15. 9( C-
·977·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
26) , 15. 8( C-24) , 14. 4( C-27)。 EI-M S (m /z ): 456
[ M
+ ] , 248, 207, 203, 189。 以上氢谱、碳谱、质谱数
据与文献报道 [3 ]的白桦脂酸基本一致。
化合物Ⅳ:白色粉末 , mp 217℃～ 219℃。以上
质谱、氢谱、碳谱数据与文献报道 [ 3]的羽扇豆醇基本
一致。
化合物Ⅴ : 棕色粉末 , mp 172℃～ 174 ℃。
[α]24D = + 15°( CH3OH, c, 0. 13)。 13 C-NMR( DM SO-
d6 )δ: 156. 6( C-9) , 156. 3( C-5) , 155. 8( C-7) , 144. 5
( C-3′) , 144. 5 ( C-4′) , 130. 6( C-1′) , 118. 1( C-2′) ,
115. 0 ( C-5′) , 114. 5( C-6′) , 98. 5 ( C-10) , 95. 1 ( C-
6) , 94. 1( C-8) , 78. 1( C-2) , 65. 0( C-3) , 28. 2( C-4)。
以上碳谱数据与文献报道 [4 ]的 (+ )-儿茶素基本一致。
5　讨论
Ratnayake等报道 β -胡萝卜苷对肺癌 A-549、
乳腺癌 MCF-7、结肠癌 HT-29的 LC50值为 4. 73,
44. 39, 0. 44μg /mL[ 5]。另有文献 [6, 7 ]报道 ,羽扇豆醇
对鼠淋巴白血病 P-388和 Walker 256肿瘤体系有
细胞毒作用 , Shun-ichi等研究认为羽扇豆醇的抗癌
活性与其选择性抑制拓扑异构酶Ⅱ的催化活性 ,从
而阻止 DNA解旋有关 [8 ]。 尤其值得关注的是白桦
脂酸。 1995年 Centofanti报道其特异性抗黑素瘤有
效 ; Fulda近年来的研究表明白桦脂酸可能成为对
神经外胚层肿瘤 (包括神经母细胞瘤、成神经管细胞
瘤、成胶质细胞瘤、尤因瘤 )和黑素瘤的有效新制剂 ,
并研究了其作用机制 [9 ] ; Setzer等实验得到白桦脂
酸对 Hep-G2和 MDA-MB-231肿瘤细胞株的 LC50
值分别为 34. 0, 9. 61μmol /L[10 ]。结合已有资料及初
筛结果 ,认为白桦脂酸可能为细胞毒活性主要成分。
长柄梭罗体外细胞毒活性具体由何种成分引起 ,抑
或各成分间的协同作用 ,尚待进一步证实。
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黄花败酱化学成分
姜　泓 1 ,初正云 1 ,王虹霞 2 ,李　琳 1* ,刘云峰 1*
( 1. 辽宁中医学院 ,辽宁 沈阳　 110032;　 2. 营口中药厂 ,辽宁 营口　 115003)
摘　要: 目的　自黄花败酱 Patrinia scabiosaef olia Fisch.的全草中分离得到一个新化合物。方法　利用各种色谱技
术进行分离纯化 ,通过理化方法及光谱分析 ( UV , IR, HRM S, ESI-M S, 1 H-NM R, 13C-NM R, FGCOSY , DEPT ,
FGHMQC, FGHM BC)鉴定化学结构。结果　鉴定为齐墩果酸 -3-O-β -D-葡萄吡喃糖基 ( 1→ 3) -α-L-阿拉伯吡喃糖苷
( 3-O-β -D-g lucopy ranosy l-( 1→ 3) -α-L-arabinopy rano syl oleano lic acid)。 结论　该化合物是一新的皂苷类化合物。
关键词: 黄花败酱 ;皂苷
中图分类号: R284. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 11 0978 03
·978· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
收稿日期: 2003-03-13基金项目:辽宁省教委课题 ( 226002)作者简介:姜　泓 ,女 ,讲师 ,辽宁中医学院生药学在读博士。 　　 Tel: ( 024) 86237958-52051
* 辽宁中医学院中药系 96级学生