全 文 ：A-对照品　B-样品　C-“大观”牌血竭　1-对羟基苯甲酸乙酯　2-龙血素 A　3-龙血素 B　4-紫檀
A-reference s tandards　B-samp le　C-“Daguan”Dragon s Blood　1-eth yl-p -hydroxyb enzoate　2-lour eirin A　3-loureirin B　4-pteros til lben
图 1　HPLC 图谱
Fig. 1　HPLC chromatograms
谱条件中对羟基苯甲酸乙酯 Rf 值也大于龙血素
A、B,但与黄酮类化合物相近不易分离;若使用本实
验中 HPLC 条件测定未经前处理的龙血竭样品进
行时, 则测定对羟基苯甲酸乙酯时所有样品峰全部
检出约需 90 min (图 1-C) , 分析时间过长,不适合
样品快速分析, 因此,在进行 HPLC 法分析前, 对样
品进行薄层色谱分离的预处理, 既可使对羟基苯甲
酸乙酯与黄酮类和紫檀 化合物分离,又可以减少
样品测定时间,同时也减少各种杂质对色谱柱污染,
延长色谱柱的使用寿命。
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杜仲原生皮与再生皮次生代谢物含量分析
董娟娥1 ,赵德义1,张康健1,王　邈2

( 1. 西北农林科技大学林学院 陕西省经济植物资源开发利用重点实验室, 陕西 杨凌　712100;
2. 咸阳市秦都区农林局, 陕西 咸阳　712000)
摘　要: 目的　探讨杜仲原生皮与再生皮的次生代谢物含量的差异性。方法　利用游标卡尺测量 17 龄杜仲树的原
生皮与再生皮的厚度, 采用分光光度法测定桃叶珊瑚苷和总黄酮含量, 采用高效液相色谱法测定绿原酸含量。结果
杜仲原生皮和再生皮的内皮厚度分别为 1. 646 和 1. 631 mm ;原生皮中绿原酸、桃叶珊瑚苷和总黄酮的含量分别为
0. 402% , 0. 781% 和 0. 484% ,再生皮中绿原酸、桃叶珊瑚苷和总黄酮的含量分别为 0. 436% , 0. 849% 和 0. 516%。
结论　原生皮与再生皮的厚度基本相同; 原生皮与再生皮的次生代谢物含量无显著差异。
关键词: 杜仲; 原生皮; 再生皮; 次生代谢物含量
中图分类号: R282. 6　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2004) 02 0199 03
Analysis of secondary metabolite contents in original and reborn bark of Eucommia ulmoies
DONG Juan-e
1 , ZHA O De-yi
1 , ZHANG Kang-jian
1, WANG M iao
2
( 1. The Key Labor ato ry of Explo rat ion and U tilization of Economic Plant Resour ces in Shaanx i P ro vince, No rth -west
Sci-T ech Univ ersity o f Agr icultur e and Forest ry , Yangling 712100, China; 2. The Ag riculture
and Forestry Bureau of Q indu D istrict of X ianyang , Xianyang 712000, China )
Abstract: Object　T o invest igate the content dif ferences o f secondary metabo lites betw een Eucommia
ulmoides Oliver original and reborn barks. Methods　T o measure the thickness o f 17-years bark by vernier
caliper , determine aucubin and flavono ids by spect rophotometer , and chlorog enic acid by HPLC. Results　
·199·中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 35 卷第 2 期 2004年 2月

收稿日期: 2003-04-16基金项目:陕西省重大科技项目 97K04-G2作者简介:董娟娥( 1968—) ,女,陕西人,讲师,在读博士,主要从事天然产物提取的研究和教学工作。T el : ( 029) 7082592
The thickness of orig inal inner bark is 1. 646 mm, and of reborn inner bar k is 1. 631 mm ; the contents of
chlor ogenic acid, aucubin and f lavonoids in or ig inal bark ar e: 0. 402% , 0. 781%, and 0. 484% , and in re-
bo rn bark are: 0. 436% , 0. 849% , and 0. 516% separately . Conclusion　T he thickness, as w ell as the
contents of secondary metabo lites of o rig inal and reborn barks ar e similar each other .
Key words : Eucommia ulmoides Oliver; orig inal bark; rebor n bark; contents of secondary metabo lite
　　杜仲 Eucommia ulmoides Oliver 传统以皮入
药,过去一直是砍树剥皮。20 世纪 70 年代以来,由
于“杜仲剥皮再生技术”[ 1, 2]的研究成功,无须再砍树
剥皮,而是采用在适当的时期活立木剥皮, 并给予塑
料薄膜保护, 使树干重新生长出新皮[ 3] ,这样生长的
新树皮谓之“再生皮”。再生皮一旦形成就会迅速生
长, 3～5 年左右便会生长成和原生皮 (原树皮) 一
样的厚度。但是,在排除个体差异干扰条件下的原生
皮和再生皮的有效成分含量[ 4] ,至今未见有关报道,
很多药材商人一直对再生皮的药用有效成分含量存
有疑问。为此,对杜仲原生皮和再生皮的总皮及内皮
厚度进行了分析,并对原生皮和再生皮中含量较高
的 3 种次生代谢物 (有效成分) 含量进行了测定。
1　材料、仪器与试剂
1. 1　材料: 在略阳县 17 龄杜仲林中, 随机选取 7
年前部分剥皮 (保留一部分原生皮) 后再生新皮的
杜仲树 3 株。为了排除个体差异因素的干扰,于 6
月份在每株树的原生皮与紧连接的再生皮处,同时
剥下原生皮和紧连接的再生皮 (不要分离) ,分株标
号,杀青后晒干备用。
1. 2　仪器与试剂: UV—2000 型紫外分光光度计
(上海第三分析仪器厂) , RE—52A 旋转蒸发仪 (上
海亚荣生化仪器厂) ,日本岛津 LC—10AT 高效液
相色谱仪 (日本) , 2K—82A 型真空干燥箱 (上海市
实验仪器总厂)。冰醋酸、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化
钠、磷酸、对二甲氨基苯甲醛等均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　树皮厚度的测量:分别测量各单株原生皮和再
生皮的树皮总厚度和内皮厚度, 每样品分别在不同
部位重复测定 5 次, 测定结果取平均值记录于
表 1中。
2. 2　次生代谢物含量的测定:按株分别割取一部分
原生皮和再生皮粉碎, 进行次生代谢物含量分析:分
别称取粉碎的树皮 5 g ,加入一定量的提取溶剂,超
声波提取 2 次,每次 40 min,合并 2 次滤液为杜仲
皮提取液,浓缩,定容于 50 mL 量瓶中。取 2 mL 提
取液,稀释至 25 mL,进行有效成分含量分析。每样
品重复提取测定 3 次, 测定结果取平均值记录于
表 2中。
表 1　原生皮与再生皮厚度测定结果
Table 1　Determining results of thickness
of original and reborn barks
样株 总皮厚/ mm原生皮 再生皮
内皮厚/m m
原生皮 再生皮
1 2. 061 1. 994 1. 601 1. 553
2 2. 360 2. 332 1. 643 1. 660
3 2. 420 2. 394 1. 694 1. 680
平均 2. 280 2. 240 1. 646 1. 631
表 2　杜仲原生皮与再生皮次生代谢物含量
Table 2　Analysis of secondary metabolite contents
in original and reborn barks
样株 桃叶珊瑚苷/ %原生皮 再生皮
绿原酸/ %
原生皮 再生皮
总黄酮/ %
原生皮 再生皮
1 0. 600 0. 668 0. 388 0. 573 0. 466 0. 660
2 0. 829 0. 862 0. 369 0. 366 0. 449 0. 444
3 0. 913 1. 017 0. 450 0. 369 0. 538 0. 445
平均 0. 781 0. 849 0. 402 0. 436 0. 484 0. 516
　　总黄酮的测定方法: 采用 Al( NO 3 ) 3—NaNO 2
比色法[ 5]。
总黄酮含量= ( 0. 996 0 A + 0. 008 2)×50×25
5×2×1 000 ×100%
式中 A 为吸光度。
桃叶珊瑚苷的测定方法: 采用改进对二甲氨基
苯甲醛法[ 6]。
桃叶珊瑚
苷含量 =
( 0. 116 05 A + 0. 000 33)×10×50×25
( 5×2×1 000) ×100%
式中 A 为吸光度。
　　绿原酸的测定采用高效液相色谱法[ 7]。色谱柱
为 Shim-park ODS 柱。色谱条件为:柱温 25 ℃; 流
动相: 甲醇-水-冰醋酸 ( 10∶9∶1) , 流速: 1 mL/
m in; 检测波长: 237 nm, 见图 1。
3　讨论
　　由表 1可知,原生皮的总皮厚度为 2. 280 mm ,
内皮厚度为 1. 646 mm, 再生皮的总皮厚度为 2. 240
mm, 内皮厚度为 1. 631 mm。原生皮和再生皮的总
皮厚度和内皮厚度均无显著差异,这与前人研究结
果基本一致[ 1]。
　　由表 2可知,原生皮的绿原酸含量为 0. 402% ,
桃叶珊瑚苷 含量为 0. 781%, 总 黄酮含量 为
0. 484%; 再生皮的绿原酸含量为 0. 436% , 桃叶珊
·200· 中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 35 卷第 2 期 2004年 2月
图 1　绿原酸 HPLC 色谱图
Fig. 1　HPLC chromatogram of chlorogenic acid
瑚苷含量为 0. 849%, 总黄酮含量为 0. 516%。所测
定的 3 种主要次生代谢物桃叶珊瑚苷、绿原酸、总
黄酮的含量, 在原生皮和再生皮中均无显著差异。
通过对 3 株 17 年原生皮与 7年再生皮的比较
分析认为,原生皮与再生皮的厚度基本相同; 3 株中
主要次生代谢物 (药用有效成分) 的含量无显著差
异。从而可以认为,原生皮和再生皮在药理作用方面
基本一致。
原生皮与再生皮的厚度(总皮和内皮)之所以无
显著差异,这主要是由于再生皮比原生皮生长迅速
的缘故。研究资料证实,再生皮的厚度虽然在剥皮后
3 年内都比同株树上的原生皮薄, 但差距在逐年减
少。而且, 与对照 (原生皮) 同样位置的树皮厚度比
较,再生皮只有在剥皮当年明显比对照薄, 第 2年
就与对照相似, 第 3年比对照还厚。可见,新皮 (再
生皮) 的生长比原生皮快[ 1～3]。
所测定的 3 种主要次生代谢物桃叶珊瑚苷、绿
原酸、总黄酮的含量在原生皮和再生皮中均无显著
差异,这是由于新生皮与原生皮结构基本相同的缘
故[ 1, 2]。虽然新皮 (再生皮) 生长的时间短,但由于
受伤刺激,使它生长速度快,很快就与原生皮相连相
通,形成了一个整体的营养运输通道,次生代谢物的
合成积累自然就达到了一致。
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真菌诱导子对长春花愈伤组织中吲哚生物碱积累的影响
张向飞,张荣涛,王宁宁, 王　勇,王淑芳

(南开大学生命科学学院, 天津　300071)
摘　要: 目的　研究分别来源于镰刀菌 Fusar ium solani 和黑曲霉 A sp ergillum niger 的真菌诱导子 ( fungal elici-
tor s) 对长春花愈伤组织中吲哚生物碱积累的影响。方法　用真菌诱导子对长春花愈伤组织进行诱导处理后提取
吲哚总碱, 并用 RP-HPLC 法测定其中阿玛碱和长春质碱含量。结果　两种真菌诱导子对吲哚总碱及其中阿玛碱
和长春质碱的积累均有较明显的正向调节作用,并且确立了真菌诱导子最佳处理时间。结论　这两种真菌诱导子
对长春花愈伤组织中吲哚生物碱的积累有显著影响。
关键词: 长春花; 真菌诱导子; 阿玛碱; 长春质碱; 愈伤组织
中图分类号: R282. 6　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2004) 02 0201 04
Effects of fungal elicitors on accumulation of indole alkaloids
in Catharanthus roseus calli
ZHANG Xiang-fei, ZHANG Rong-tao, WANG Ning-ning , WANG Yong , WANG Shu-fang
( Colleg e of L ife Science, Nankai U niver sity , T ianjin 300071, China)
·201·中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 35 卷第 2 期 2004年 2月

收稿日期: 2003-05-12基金项目:天津市自然科学基金资助项目 ( 013609211)作者简介:张向飞( 1978—) ,女,山东淄博人,现为南开大学植物学专业硕士研究生。Tel: ( 022) 23503714