全 文 ：·药理与临床·
葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织MM P-10
与 TIM P-1 表达的影响
刘淑霞1, 陈志强2, 何　宁1, 刘青娟1, 李英敏1, 段惠军1Ξ
(11 河北医科大学 病理教研室, 河北 石家庄　050017; 21 河北医科大学中西医结合研究所, 河北 石家庄　050017)
摘　要: 目的　探讨葛根素对糖尿病大鼠肾小球结构、功能及肾组织基质金属蛋白酶 10 (MM P210)、基质金属蛋
白酶组织抑制剂 1 (T IM P21) 表达的影响。方法　ip 链脲佐菌素 (65 m gökg) 诱发糖尿病大鼠模型, 每日 ip 葛根素
注射液, 共 16 周。给药结束后, 收集尿液, 测定尿蛋白 (U p ro ) , 尿肌酐 (U cr) 含量; 腹主动脉取血, 测定血糖
(Glu) , 血肌酐 (Scr) , 尿素氮 (BUN ) 含量; 采用原位杂交法检测肾小球MM P210, T IM P21 mRNA 表达, 流式细胞
术和免疫组化检测肾皮质MM P210、T IM P21 及Ì 型胶原、层黏连蛋白 (LN ) 表达。结果　糖尿病组较对照组肾小
球MM P210、T IM P21 mRNA 及蛋白表达增加, 肾皮质MM P210, T IM P21 及Ì 型胶原、LN 表达亦增加; 反映肾功
能的各项生化指标水平升高。葛根素用药组较糖尿病组MM P210、T IM P21 mRNA、蛋白及Ì 型胶原、LN 表达减
少; 肾功能有所改善。结论　葛根素对糖尿病大鼠肾结构功能具有保护作用, 除降低血糖外, 调节肾小球MM P210,
T IM P21 表达从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。
关键词: 葛根素; 糖尿病肾病; 基质金属蛋白酶210 (MM P210) ; 基质金属蛋白酶组织抑制剂21 (T IM P21)
中图分类号: R 286172　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 02 0170 05
Effects of puerar in on rena l function and expression s of MM P-10
and TIM P-1 in k idney of d iabetic ra ts
L IU Shu2x ia1, CH EN Zh i2qiang2, H E N ing1, L IU Q ing2juan1, L I Y ing2m in1, DUAN H u i2jun1
(11D epartm ent of Patho logy, H ebeiM edical U niversity, Sh ijiazhuang 050017, Ch ina; 2. Inst itu te of Com bined
T radit ional Ch inese and W estern M edicine, H ebeiM edical U niversity, Sh ijiazhuang 050017, Ch ina)
Abstract: Object　To invest iga te the effects of puerarin on renal st ructu re, funct ion and exp ression s
of m atrix m eta llop ro teinase210 (MM P210) and t issue inh ib ito r of m ela llop ro teinase21 (T IM P21) in the k id2
ney of diabet ic ra ts. M ethods　U n ineph rectom ized m aleW istar ra ts w ere u sed to induce diabet ic models by
ip Strep tozocin (65 m gökg). Puerarin w as given daily by ip from the th ird day of induct ion to diabetes fo r
16 w eek s. T hen, U p ro , U cr in u rine and Glu, Scr, BUN in serum w ere determ ined. Situ hyb rid iza t ion
and imm unoh istochem istry w ere u sed to detect MM P210, T IM P21 mRNA exp ression s and MM P210,
T IM P21, co llagen Ì and L am in in (LN ) exp ression s in renal g lom eru li w ith im age analysis system ; flow
cytom etry w as u sed to detect the exp ression s of MM P210, T IM P21 of renal co rtex. Results　BUN , Ccr,
and U p ro in diabet ic ra ts w ere sign if ican t h igher than that in con tro l group. Compared w ith tho se in k id2
neys of con tro l group , d iabet ic k idneys show ed increased exp ression s of bo th MM P210, T IM P21 mRNA ,
p ro tein s and excessive depo sit ion of g lom eru li ex tracellu lar m atrix. Glu and the level of exp ression s of
MM P210, T IM P21, co llagen Ì , and LN w ere reduced by puerarin t rea tm en t, renal funct ion w as im -
p roved. Conclusion　Puerarin has som e renal p ro tect ive effect on diabet ic neph ropathy part ly th rough in2
h ib it ion of excessive depo sit ion of g lom eru li ex tracellu lar m atrix by dow n2regu la t ing MM P210 and T IM P21
exp ression s besides reducing Glu.
Key words: puerarin; d iabet ic neph ropathy; m atrix m eta llop ro teinase210 (MM P210) ; t issue inh ib ito r
of m eta llop ro teinase21 (T IM P21)
　　糖尿病属于中医消渴病范畴, 葛根是治疗消渴 病的传统中药。葛根素是葛根的一个重要成分, 具有
·071· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
Ξ 收稿日期: 2003205228
基金项目: 教育部归国博士基金资助项目 (980601)
作者简介: 段惠军 (1955—) , 男, 河北省石家庄市人, 河北医科大学副校长, 教授, 博士生导师, 于 1991 年在日本信州大学获博士学位,
1991～ 1993 年在日本信州大学从事博士后研究工作, 研究方向为肾脏病理学和肿瘤病理学。
T el: (0311) 6266942 (办)　E2m ail: duanh j@hebm u. edu. cn
降血糖、改善微循环及凝血纤溶系统活性、调节内皮
细胞舒缩功能的作用[1～ 3 ]。糖尿病肾病 (d iabet ic
neph ropathy, DN ) 是糖尿病常见的微血管并发症,
本实验试用葛根素对糖尿病大鼠模型进行干预, 研
究葛根素对 DN 的发生、发展的影响, 为扩大该药
的临床应用范围提供理论依据, 并通过观察用药组肾
组织基质金属蛋白酶 10 (MM P210)、基质金属蛋白
酶组织抑制剂 1 (T IM P21)、Ì 型胶原、层黏连蛋白
(LN ) 表达的变化探讨其对DN 可能的作用机制。
1　材料
111　动物:W istar 雄性大鼠, 由河北医科大学实验
动物中心提供。
112　主要试剂和药物: 原位杂交和免疫组化试剂盒
购自武汉博士德生物工程有限公司, 其中试剂包括:
MM P210、T IM P21 探针 (美国 Sigm a 公司)、兔抗
MM P210、T IM P21、LN 多克隆抗体, 鼠抗Ì 型胶原
单克隆抗体 (San ta C ruz 公司) , 链脲佐菌素 (Sig2
m a 公司) , 麦普宁注射用葛根素 (山东瑞阳制药有
限公司, 主要成分为葛根素, 纯度 98% , 100 m gö支,
国药准字 X20010181)。
2　方法
211　动物分组及模型制备: 按 A nderson 等[4 ]建立
的方法, 选取体重 150～ 180 g W istar 雄性大鼠 30
只, 戊巴比妥钠 ip 麻醉 (40 m gökg) 后行右肾切除
术, 2 周后切口完全愈合。将大鼠随机分为 5 组: 右
肾切除对照组, 糖尿病模型组, 葛根素低、中、高剂量
组, 每组 6 只。除右肾切除对照组 ip 等体积枸橼酸
缓冲液外, 其余各组大鼠按 65 m gökg ip 链脲佐菌
素 (溶于 011 mo löL 枸橼酸缓冲液 pH 4. 5) , 48 h
后尾尖取血测定血糖, 取尿液测定尿糖, 血糖≥1617
mo löL , 尿糖+ + + ～ + + + + 者确定为糖尿病模
型。实验期间动物自由进食饮水, 不使用胰岛素及其
他降糖药物, 模型成立 3 d 后, 葛根素各组每日分别
ip 麦普宁注射用葛根素 40, 80, 160 m gökg, 对照组
及糖尿病模型组 ip 等量生理盐水。
212　标本收集: 糖尿病模型建成后 16 周时分别用
代谢鼠笼收集 24 h 尿液, 用于尿蛋白 (U p ro)、尿肌
酐 (U cr) 测定; 用 10% 水合氯醛 ip 麻醉, 腹主动
脉取血, 分离血清测定血糖 (Glu)、血肌酐 (Scr)、尿
素氮 (BUN ) ; 切除左肾, 去掉被膜, 滤纸吸干血迹后
称质量, 部分置于 4% 多聚甲醛固定留做光镜、原
位杂交、免疫组化检测, 部分置于 70% 乙醇固定后
进行流式细胞术检测。
213　常规光镜检查: 肾组织经 4% 多聚甲醛固定
后, 常规脱水、包埋, 切片厚 2 Λm , 分别行 H E 和
PA S 染色。
214　血、尿生化指标测定: Glu, Scr, U p ro , U cr,
BUN 均用日立 7170 全自动生化分析仪测定, 并根
据U cr, Scr 计算肌酐清除率 (Ccr)。
215　原位杂交测定: 组织切片常规脱蜡水化, 经
3% H 2O 2、胃蛋白酶 (1 ΛgömL ) 消化及预杂交液处
理后滴加含MM P210 或 T IM P21 探针的杂交液 42
℃ 杂交过夜, 经梯度 SSC 37 ℃ 严格冲洗, 地高辛
抗体孵育和 DAB 显色, 杂交前切片用预杂交液代
替探针杂交液做阴性对照。
216　MM P210, T IM P21, Ì 型胶原, LN 免疫组化
染色: 切片常规脱蜡至水, 一抗为兔抗鼠MM P210,
T IM P21, LN 多克隆抗体或鼠抗Ì 型胶原单克隆抗
体 (1∶100) , 二抗为生物素化 IgG (1∶100) , 以
PBS 代替一抗作为阴性对照,DAB 显色, 光镜观察
阳性信号。
217　流式细胞术检测MM P210, T IM P21 蛋白表
达: 标本用网搓法制备单细胞悬液, 采用间接免疫荧
光标记法, 在细胞悬液中分别加入 1∶100 稀释的
兔抗MM P210 或 T IM P21 多克隆抗体, 37 ℃ 温浴
30 m in 后洗涤, 加入 1∶50 羊抗兔 F ITC2IgG, 温浴
洗涤后用流式细胞仪进行检测 (美国 BD 公司,
FA CS420) , 测量的数据输入计算机, 应用相应的程
序进行资料处理, 测定前以鸡红细胞作为标准细胞
样品调整仪器的 R SD 值在 5% 以内。
218　图像及统计学分析: 原位杂交和免疫组化结果
均应用 H P IA S21000 高清晰度彩色病理图文分析系
统, 分别测量出每个肾小球中 LN , Ì 型胶原,
MM P210, T IM P21 mRNA 的着色阳性面积、积分吸
光度和肾小球面积, 以前两个参数与肾小球面积比
表示该成分的相对含量和表达强度。每组分析 6 个
标本, 每个标本切片取 10 个完整的肾小球进行分
析, 取均值代表一只大鼠某种成分在肾小球中的相
对含量和表达强度。流式细胞术MM P210, T IM P21
表达的定量分析: 按照M o rkve 等[5 ]的方法, 以荧光
指数 (F I) 表示MM P210, T IM P21 的相对含量。实
验结果统计采用 F 检验, 应用 SA S 统计软件完成。
F I= 样品平均荧光强度- 对照样品平均荧光强度正常组织平均荧光强度- 对照样品平均荧光强度
3　结果
311　各组动物体重、肾质量、及肾质量ö体重 (肥大
指数) 变化: 16 周时糖尿病模型组与对照组相比,
体重下降而肾质量变化不明显, 肥大指数增加 (P <
·171·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
0101) , 葛根素各组与糖尿病模型组相比, 体重增高,
肥大指数降低, 尤以高剂量组明显 (P < 0101) , 见
表 1。
表 1　各组大鼠体重、肾质量、肥大指数的变化 (x±s, n= 6)
Table 1　Changes of body we ight, k indey we ight,
and k idneyöbody we ight ratio of rats
in d ifferen t groups (x±s, n= 6)
组　别
剂量ö(m g·kg- 1) 体重ög 肾质量ög 肥大指数
对照 　- 367180±18151 2116±0125 01005 9±01000 5
糖尿病模型 　 - 166160±221393 3 2168±0161 01016 0±01002 33 3
葛根素 　 40 177100±12177 2127±0131 01012 8±01000 8# #
　 80 184129±38112 2151±0148 01014 7±01001 1# #
　160 360100±22152# # 2170±0158 01007 5±01003 9# #
　　与对照组比较: 3 3 P < 0101
　　与糖尿病模型组比较: # # P < 0101
　　3 3 P < 0101 vs con tro l group
　　# # P < 0101 vs diabetic model group 312　各组肾功能改变: 16 周时糖尿病模型组与对照组相比, Glu, BUN , Ccr, U p ro 显著增高 (P <0105, 0101) , 葛根素各组与糖尿病模型组相比各项指标明显改善 (P < 0105, 0101) , 见表 2。313　一般形态学改变: 糖尿病模型组大鼠较对照组肾小球增大, 系膜基质增多, 葛根素组较糖尿病模型组有不同程度改善。314　MM P210, T IM P21 mRNA 在肾小球中的表达: 主要表达在肾小球系膜细胞、肾小管上皮细胞胞质内。糖尿病模型组肾小球内MM P210, T IM P21mRNA 相对含量及积分吸光度均增强, 与对照组相比差异均有显著性 (P < 0101) ; 葛根素各组MM P210, T IM P21 mRNA 的表达与糖尿病模型组相比均有不同程度的降低, 尤以高剂量组降低明显 (P <0101, 0105) , 见表 3。315　MM P210, T IM P21 蛋白在肾脏组织中的定位和定量检测: 免疫组化染色显示阳性颗粒主要定位
表 2　葛根素对糖尿病大鼠生化指标的影响 (x±s, n= 6)
Table 2　Effect of puerar in on Glu, BUN, Ccr and 24 h Upro of d iabetic rats (x±s, n= 6)
组　别 剂量ö(m g·kg- 1) Gluö(mmo l·L - 1) BUN ö(mmo l·L - 1) Ccrö(mL ·m in- 1) U p roö(m g·24 h- 1)
对照 - 　　7145±1156 　　13196±6176 　　0117±0110 　　31152±10144
糖尿病模型 - 20151±51253 3 29189±41653 3 0169±01373 143155±131893 3
葛根素 40 27125±2175# 29171±7148 0162±0111 96122± 4129# #
80 15157±3137# # 25167±4167 0162±0131 78166± 9143# #
160 10135±5132# # 13194±4140# 0158±0124 46129± 4137#
　　　与对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101; 　与糖尿病模型组比较: # P < 0105　# # P < 0101
　　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs con tro l group; 　# P < 0105　# # P < 0101 vs diam etic model group
表 3　各组肾小球中MM P-10, TIM P-1 mRNA 的表达 (x±s, n= 6)
Table 3　Expression s of MM P-10, TIM P-1 mRNA in renal glomerul i of d ifferen t groups (x±s, n= 6)
组　别
剂量ö(m g·kg- 1) MM P210 mRNA相对含量ö% 积分吸光度 T IM P21 mRNA相对含量ö% 积分吸光度
对照 - 　　9160±3157 　　1152±0154 　　14110± 2172 　　1185±0170
糖尿病模型 - 22152±51033 3 4173±11023 3 37198± 51113 3 6194±21463 3
葛根素 40 19192±2194 3176±1105 24113±10158# 5150±3178
80 21140±5192 3120±4114 7121± 2152# # 1106±0144# #
160 4166±3115# # 0178±0133# # 0141± 0126# # 0151±0123# #
　　　与对照组比较: 3 3 P < 0101; 　与糖尿病模型组比较: # P < 0105　# # P < 0101
　　　3 3 P < 0101 vs con tro l group; 　# P < 0105　# # P < 0101 vs diabetic model group
于肾小球和肾小管, 对照组肾小球和肾小管MM P2
10 和 T IM P21 有弱表达, 糖尿病模型组表达明显增
强 (P < 0101)。流式细胞术显示糖尿病模型组
MM P210 和 T IM P21 相对含量较对照组明显增强,
而葛根素各组与糖尿病模型组相比, 表达有不同程
度的减弱, 见表 4。
316　Ì 型胶原、LN 肾小球中表达: Ì 型胶原、LN 阳性染色在肾小球主要分布于系膜区、毛细血管基膜、肾小球囊壁和肾小管基膜、肾间质中。与对照组相比, 糖尿病模型组肾小球中Ì 型胶原、LN 明显增强; 葛根素各组较糖尿病模型组表达减弱, 见表 5。4　讨论　　本实验研究证明糖尿病模型大鼠在注射链脲佐菌素 16 周后BUN , Ccr,U p ro 及肥大指数均明显高
·271· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
表 4　各组大鼠MM P-10、TIM P-1 在
肾脏中的表达 (x±s, n= 6)
Table 4　MM P-10, TIM P-1 expression s in renal tissues
of rats in d ifferen t groups (x±s, n= 6)
组　别
剂　量ö(m g·kg- 1) MM P210 T IM P21
对照 - 　 1100±0101 　 1100±0101
糖尿病模型 - 1156±01103 3 1120±01063 3
葛根素 40 1135±0141# 1106±0104# #
80 1124±0106# # 1104±0111# #
160 1115±0106# # 1103±0106# #
　　与对照组比较: 3 3 P < 0101;
　　与糖尿病模型组比较: # P < 0105　# # P < 0101
　　3 3 P < 0101 vs con tro l group;
　　# P < 0105　# # P < 0101 vs diabetic model group 于正常对照组, 提示已有DN 发生。葛根素用药组上述各项指标均有不同程度改善, 说明葛根素对糖尿病大鼠肾结构和功能具有保护作用。本实验验证, 葛根素具有明显的降血糖作用, 血糖水平下降可通过减轻糖尿病时出现的“三高”现象 (高灌注压、高流量和高滤过) , 从而影响肾病的发生、发展。葛根素是否直接作用于糖尿病大鼠的肾脏特别是肾小球血管而影响肾病的发生、发展, 有待进一步研究。DN 是糖尿病微血管并发症之一, 肾小球细胞外基质 (ex tracellu lar m atrix, ECM ) 沉积是其主要的病理改变, ECM 主要由Ì 型胶原、LN、F i2b ronect ion 等组成, 其生理状态下处于快速更新代谢的动态平衡过程中, 该过程的失衡是导致肾小球
表 5　各组肾小球中Ì 型胶原和L N 相对含量和积分吸光度比较 (x±s, n= 6)
Table 5　Compar ison of rela tive con ten t and in tegra l optica l den sity of collagen Ì
and L N in renal glomerul i of rats in d ifferen t groups (x±s, n= 6)
组　别
剂量ö(m g·kg- 1) Ì 型胶原相对含量ö% 积分吸光度 LN相对含量ö% 积分吸光度
对照 - 　　27141±11157 　　12147±14121 　　38136±3166 　　38118±25168
糖尿病模型 - 56130±141203 154118±451753 3 66171±61963 833189±931233
葛根素 40 48151± 7111 77136±56188 31103±7155# # 46152±44144# #
80 22125± 8163# # 10103± 7177# # 14120±8102# # 4183± 2107# #
160 11194± 3129# # 3173± 3173# # 13106±8120# # 3192± 2173# #
　　　与对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101; 　与糖尿病模型组比较: # # P < 0101
　　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs con tro l group; 　# # P < 0101 vs diabetic model group
组织结构破坏乃至肾小球硬化的关键性病理过程。
基质金属蛋白酶 (m atrix m eta llop ro teinase,
MM P s) 家族是肾脏内主要的基质降解酶体系, 其
表达量与活性的高低直接影响肾小球细胞外基质的
表达量和局部沉积[6 ]。MM P210 属于MM P s 家族,
它以酶原的形式释放, 由纤溶酶激活, 激活后其降解
基质的活性还会受到基质金属蛋白酶组织抑制剂的
调节。T IM P s 与活化的MM P s 有高度的亲和性。每
种 T IM P 都能在一定程度上结合和抑制MM P s。
MM P210 可以降解基质从而引起肿瘤转移和浸
润[7, 8 ]。Sagh izadeh 等[9 ]应用 R T 2PCR 等方法研究
糖尿病视网膜病变角膜中MM P210 表达, 表明糖尿
病患者其 mRNA 表达明显增强, 而其 3 种组织抑
制剂未见明显改变。有关MM P210 在糖尿病肾脏中
的表达及作用, 国内外尚未见报道。本研究表明: 糖
尿病肾组织MM P210, T IM P21 mRNA 及蛋白表达
增加。
注射用葛根素由野葛根的提取物制成, 其主要
成分是葡萄糖基异黄酮, 是醛糖还原酶的抑制剂, 国
内近来研究表明, 黄酮类药物具有降低糖尿病病人
蛋白尿的作用。本实验葛根素用药组大鼠在血糖降
低、蛋白尿减轻、肾功能改善的同时, 肾小球MM P2
10 和 T IM P21 表达明显下调, 肾小球细胞外基质沉
积明显减轻, 提示葛根素有可能通过调节基质金属
蛋白酶及其组织抑制剂的表达影响肾小球细胞外基
质的质和量, 从而保护肾小球结构和功能。实验还发
现, 16 周时右肾切除对照组肾小球基底膜有轻度增
厚, 而高剂量用药组Ì 型胶原、LN 等水平较右肾切
除对照组低, 提示葛根素通过改善肾脏微循环, 可能
对正常老龄大鼠肾小球硬化有一定的预防作用。
实验结果表明, 葛根素可以保护糖尿病大鼠的
肾小球结构和肾功能。降低血糖改善肾小球内血液
动力学状况是其作用途径之一, 此外, 调节肾小球基
质金属蛋白酶及其组织抑制剂的表达, 从而减轻肾
小球细胞外基质的沉积也可能是其作用途径之一。
References:
[ 1 ]　H an H 1 Effects of puerarin fo r in jection on 36 cases of dia2
bete [J ]1 A cta A cad M ed Guang z hou (广州医学院学报) ,
2000, 28: 752761
[ 2 ]　Yu Z L , Zhang G Q , Zhao H Q 1 Effects of puerariae iso
flavone against cereb ral ischem ia [J ]1 J Ch ina P harm U niv
(中国药科大学学报) , 1997, 28: 31023121
·371·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
[ 3 ]　L uo Z R , Ge X B, Zheng W X, et a l. Effects of puerarin on
unstab le angina pecto ris and its coagu lan t, fib rino lytic and
function of endo thelial cells [J ]1 Ch in J In terg ra ted T rad it
W est M ed In tensive C rit Care (中国中西医结合急救杂志) ,
2000, 7: 10521061
[ 4 ]　A nderson S, Rennke H G, B renner B M. N ifedip ine versus
fo sinop ril in un ineph rectom ized diabetic rats [J ]1 K id ney
In t, 1992, 41: 89128971
[ 5 ]　M o rkve O , L earun O D 1 F low cytom etric m easurem en t of
P53 p ro tein exp ression and DNA conten t in paraffin em bed2
ded tissue from bronch ial carcinom as [J ]1 Cy tom etry , 1991,
12: 43824411
[ 6 ]　M clennan S V , Kelly D J , Cox A J , et a l. D ecreased m atrix
degradation in diabetic neph ropathy: effect of A CE inh ib it ion
on the exp ression and activit ies of m atrix m etallop ro teinases
[J ]1 D iabetolog ia , 2002, 45: 26822751
[ 7 ]　V an B ilsen J H , W agenaar2H ilbers J P, V an der Camm en J
M , et a l. Successfu l imm uno therapy w ith m atrix m etallop ro2
teinase2derived pep tides in adjuvan t arth rit is depends on the
tim ing of ep tide adm in istration [J ]1 A rth ritis R es, 2002, 4:
R 21
[ 8 ]　M athew R , Khanna R , Kum ar R , et a l. Strom elysin22 over2
exp ression in hum an esophageal squamous cell carcinom a:
po ten tial clin ical imp lications [J ]1 Cancer D etect P rev , 2002,
26: 22222281
[ 9 ]　Sagh izadeh M , B row n D J , Castellon R , et a l. O verexp res2
sion of m atrix m etallop ro teinase210 and m atrix m etallop ro2
teinase23 in hum an diabetic co rneas: a po ssib le m echan ism of
basem ent m em brane and in tegrin alterations [J ]1 A m J
P a thol, 2001, 158: 72327341
枇杷叶抗炎和止咳作用研究
王立为1, 刘新民1, 余世春2, 肖培根1, 杨峻山1Ξ
(11 中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所, 北京　100094;
21 安徽省安泰医药生物技术有限责任公司, 安徽 合肥　230088)
摘　要: 目的　研究枇杷叶抗炎和止咳作用的有效成分, 为制定枇杷叶的质量标准提供科学可靠的实验依据。方法
采用二甲苯致小鼠耳肿胀法、二氧化硫引起小鼠咳嗽和枸橼酸喷雾致豚鼠咳嗽模型, 观察枇杷叶不同分离部分及
单体成分的抗炎及止咳作用。结果　P2 和 P3 部分对小鼠耳肿胀法所致的炎症具有较好的对抗作用, 且 P2 部分具
有明显的止咳作用。P2 部分中的枇杷苷É , P3 部分中的总三萜酸和熊果酸均具有良好的抗炎、止咳效果。结论　枇
杷苷É、熊果酸和总三萜酸是枇杷叶抗炎、止咳作用的主要成分, 可作为制定枇杷叶质量标准的定量指标。
关键词: 枇杷叶; 抗炎; 止咳; 枇杷苷É
中图分类号: R 28515　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 02 0174 03
An ti- inf lamma tory and an titussive effects of E r iobotrya j ap on ica
W AN G L i2w ei1, L IU X in2m in1, YU Sh i2chun2, X IAO Pei2gen1, YAN G Jun2shan1
(11 Inst itu te of M edicinal P lan t D evelopm ent, Ch inese A cadem y of M edical Science and Pek ing U nion of M edical Co llege,
Beijing 100094, Ch ina; 2. A nhui A n2tech M edicine & B io logical T echno logy Co. L td. , H efei 230088, Ch ina)
Abstract: Object　To research the act ive componen ts from leaves of E riobotry a jap on ica T hunb. on
an t i2inf lamm ato ry and an t itu ssive effect fo r con tro lling its quality. M ethods　 Inflamm ato ry model induced
by dim ethyl benzene of ear edem a in m ice; tu ssive models induced by SO 2 in m ice, and cough model in2
duced by cit ric acid in gu inea p igs w ere u sed to ob serve the an t i2inf lamm ato ry and an t itu ssive effects of d if2
feren t part from the leaves of E. jap on ica. Results　F ive fract ion s from raw m ateria ls of E. jap on ica w ere
tested on an t i2inf lamm ato ry and an t itu ssive effects w ith m ice and gu inea p igs. T he resu lts show ed that the
ear edem a induced by dim ethyl benzene cou ld be obviou sly reduced w hen ig P2 and P3 105 m gökg in m ice;
T he EJA (eriobo tro side É ) iso la ted from P2, EJB (u rso lic acid) and EJC ( to ta l t riterpen ic acid) iso la ted
from P3 w ere m ain componen ts on an t i2inf lamm ato ry effect. P2 and P3 75 m gökg cou ld reduce the ep isodes
of cough and p ro long the la tency of cough induced in m ice by SO 2. A fter 1 h ig P2 105 m gökg show ed the
relief effects to cough induced by cit ric acid in gu inea p igs, and fu rther experim en ta l resu lts a lso show ed
the EJA , EJB , and EJC are an tagon ist componen ts to cough. Conclusion　T he EJA , EJB , and EJC iso la t2
ed from the leaves of E. jap on ica are m ain an t i2inf lamm ato ry and an t itu ssive componen ts. T he p resen t ex2
perim en ta l resu lts f irst ly p rovide st rong evidence to con tro l quality of E. jap on ica.
Key words: the leaves of E riobotry a jap on ica T hunb. ; an t i2inf lamm ation, an t itu ssive; eriobo tro sid I
·471· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
收稿日期: 2003206212
基金项目:“九五”国家攻关课题 (962903202102)