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Determination of flavonoids in tender stem and leaf of Ampelosis prossedentata by differential spectrophotometry

差示分光光度法测定广西瑶族藤茶中黄酮类成分的含量



全 文 :类中药大黄中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚提取率明
显高于种子类中药决明子中相同成分的提取率
(P < 0. 05) ; 4种中药中有效成分的提取率为花类>
根茎类> 种子类 ,这可能是由于中药材表面的质地
结构各不相同 ,如决明子外种皮坚硬 ,含木栓化细
胞 ,需用水浸泡多时表面才可软化 ,而金银花表皮较
薄且柔软 ,多为薄壁细胞组织、极易吸水膨胀。 这些
结构上的差异导致各种中药吸收微波的能力各不相
同 ,造成 ME明显的选择性。因此 ,在用 ME对不同
形态结构中药的浸提中应充分考虑到这一点。有关
ME对不同形态结构中药的浸提规律的影响 ,有待
于进一步研究证实。
参考文献:
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中绿原酸含量 [ J] .黑龙江医药 , 1997, 10( 1): 19-20.
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差示分光光度法测定广西瑶族藤茶中黄酮类成分的含量
覃洁萍 ,梁山丹* ,何翠薇
(广西中医学院 ,广西 南宁  530001)
摘 要: 目的 建立藤茶中黄酮类成分的含量测定方法 ,以控制其质量。 方法 采用差示分光光度法 ,以双氢杨梅
素皮素为指标 ,采用差示分光光度法 ,测定波长为 ( 318± 1) nm。 结果 对照品浓度在 4. 576~ 22. 88μg /mL范围
内 ,吸光度与浓度呈良好的线性关系 ( r= 0. 999 8) ,回归方程为 A= 29. 56C+ 0. 005 5,平均回收率为 100. 8% , R SD
为 1. 9% (n= 5)。 结论 本法操作简单、结果准确、重现性好 ,可作为该药材的质量控制方法。
关键词: 藤茶 ;黄酮类 ;双氢杨梅素皮素 ;差示分光光度法
中图分类号: R286. 02   文献标识码: A   文章编号: 0253 2670( 2002) 07 0607 03
Determination of flavonoids in tender stem and leaf of Ampelosis
prossedentata by differential spectrophotometry
QIN Jie-ping , LIAN G Shan-dan, HE Cui-wei
( Guangxi Colleg e o f TCM , Nanning 530001, China )
Abstract: Object  To develop a method fo r the determination of flav onoids f rom the tender stem and
leaf o f Ampelosis grossedentata ( Hand. -Mazz. ) W. T. Wang, and fo r i ts quali ty cont rol. Methods  Dif-
ferential spect ropho tometry w as used at the w aveleng th o f ( 318± 1) nm , w hile taking dihydromy ricetin as
index. Results  The reg ression equa tion, wi thin the range o f the contro l concentration in 4. 576~ 22. 88
μg /mL, was A= 29. 56C+ 0. 005 5, wi th a good linea ri ty (r= 0. 999 8) betw een the abso rbance and con-
centration. The average recovery ra te w as 100. 8% and RSD was 1. 9% (n= 5) . Conclusion  The method
is simple, reliable and easy to operate and sui table for the quality cont ro l of Chinese medicinal materials
w ith a bet ter reproducibility.
Key words: Ampelosis grossedentata ( Hand. -M azz. ) W. T. Wang; flavonoids; dihydromy ricetin; dif-
ferential spect ropho tometry
  广西瑶族藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡
萄 Ampelosis grossedentata ( Hand. -M azz. ) W. T.
Wang的嫩茎叶经传统加工揉制、干燥而成。其性味
甘淡 ,具清热解毒等功效 ,主治黄疸型肝炎、感冒风
热、咽喉肿痛 ,并具解酒作用 [1, 2 ]。藤茶中主要有效成
分为黄酮类化合物 ,其中双氢杨梅树皮素含量最
·607·中草药  Chinese T raditional and Herbal Drug s  2002年第 33卷第 7期
收稿日期: 2001-10-30
基金项目:国家中医药管理局资助项目 ( 00-01LM 01)
作者简介:覃洁萍 ( 1962-)女 ,副教授 ,主要研究方向是中药和天然药物及其制剂的成分分析 ,现主持国家中医药管理局及省科技厅项目
各 1项。 发表论文近 20篇 ,多篇获省级优秀论文奖。 Tel: ( 0771) 3137043
* 广西中医学院药学系 2001届毕业实习生
高 [3, 4 ]。药理实验表明 ,双氢杨梅树皮素具有明显拮
抗肾上腺素和高 K+ 所致的免主动脉条收缩反应 ,
毒性低 [ 5] ;并有祛痰止咳、降血脂和保肝等作用 [6 ]。
研究还表明 ,藤茶中的黄酮类成分还具有较好的降
血糖作用 [7 ]。为更好地控制药材质量 ,本实验采用差
示分光光度法 ,通过在 ( 318± 1) nm处测定藤茶样
品溶液与 ZrO Cl2络合前后的吸光度差值 ,消除背景
吸收的干扰 ,测定藤茶样品中黄酮类成分的含量。
1 仪器与试药
日本岛津 UV -160A型紫外可见分光光度计。
甲醇为优级纯 (北京化工厂 ) ;冰醋酸为分析纯 (南宁
第二化工厂 ) ;其它试剂均为分析纯。 双氢杨梅树皮
素对照品为从广西瑶族藤茶中提取分离得到 ,经
UV、 MS、 1 HNMR、 IR光谱分析鉴定结构 ,并经
HPLC归一化法检测 ,含量均在 98. 5%以上。藤茶
购于广西恭城县 ,并经我院刘寿养副教授鉴定。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备
2. 1. 1 供试品溶液的制备:取不同级别 (精制品、特
级品、一级品和等外品 )的藤茶干燥嫩茎叶粉碎 ,过
20目筛 ,精密称定约 0. 5 g ,置 100 mL烧瓶中 ,用
95%乙醇回流提取 3次 ,每次 1 h,提取液定容至
200 mL,作为供试品溶液。
2. 1. 2 对照品溶液的制备:精密称取双氢杨梅树皮
素对照品 14. 30 mg ,置 25 mL容量瓶中 ,加 95%乙
醇溶解并稀释至刻度 ,制成 0. 572 mg /mL的溶液作
为对照品溶液。
2. 2 测量波长选择:精密吸取双氢杨梅树皮素对照
品溶液 0. 8 m L 2份 ,分置于 25 mL量瓶中 , 1份加
95%乙醇稀释至刻度 ,另 1份加 2% ZrOCl2· 8H2O
甲醇溶液 1. 50 mL,再加 95%乙醇稀释至刻度 ,摇
匀。放置 1 h后将前者置于参比池 ,后者置于样品
池 ,于 200~ 400 nm波长范围内扫描测定 ,记录对
照品络合前后的吸光度值 ,在 ( 318± 1) nm处有最
大差示吸光度值。
另取供试品溶液 0. 4 mL 2份 ,同上法操作 ,记
录供试品溶液络合前后的差示吸收光谱 ,可见对照
品和供试品溶液络合前后的差示吸收光谱基本一
致 ,均在 ( 318± 1) nm处有最大差示吸光度值 ,故选
择 ( 318± 1) nm作为测定波长。
2. 3 络合剂加入量的影响:分别精密吸取双氢杨梅
树皮素对照品溶液 0. 8 mL和供试品溶液 0. 4 mL
各 5份 ,分置于 25 mL量瓶中 ,分别在以上对照品
溶液和供试品溶液中加入 0. 0, 0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0
m L 2% ZrO Cl2· 8H2O甲醇溶液 ,然后加 95%乙醇
稀释至刻度 ,摇匀。放置 1 h后 ,将第 1份不加络合
剂的溶液置于参比池 ,然后将其余溶液依次置于样
品池 ,分别测定各溶液的差示吸光度值。结果表明:
络合剂的加入量在 0. 5~ 2 mL范围内对测定结果
没有影响 ,其差示吸光度值基本一致。
2. 4 样品稳定性考察: 将配制好的样品溶液 ,在室
温条件下避免阳光直射 ,放置不同时间 ,在 ( 318± 1)
nm处测其络合前后的差示吸光度值。结果显示 ,在
温度为 25℃~ 30℃时 , 1 h后其差示吸光度值可达
到稳定 ,并且在 3 h内基本保持不变。
2. 5 标准曲线的制备:精密吸取双氢杨梅树皮素对
照品溶液 0. 2, 0. 4, 0. 6, 0. 8, 1. 03 mL各 2份 ,分别
置于 25 mL量瓶中 , 1份加 95%乙醇稀释至刻度 ,
摇匀 ,作为参比液 ;另 1份加 2% ZrOCl2· 8H2O甲
醇溶液 1. 50 mL,再加 95%乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,
作为测定液。放置 1 h ,分别在 ( 318± 1) nm处测定
不同浓度溶液络合前后的吸光度差值 (△ A ) ,结果
表明 ,双氢杨梅树皮素对照品浓度在 4. 576~ 22. 88
μg /mL范围内与△A值呈良好线性关系。回归方程
为:△ A= 29. 56C+ 0. 005 5, r= 0. 999 8。
2. 6 加样回收率试验:精密称取已知含量的藤茶样
品细粉适量 5份 ,置 100 mL烧瓶中 ,分别精密加入
一定量的双氢杨梅素皮素对照品 ,然后按供试品溶
液的制备方法制备供试液 ;精密吸取每种供试液各
2份 ,以下按 “标准曲线的制备”项下 ,从 “置于 25
mL量瓶中……”起操作 ,测定每份供试液的△ A
值 ,计算加样回收率。 平均回收率为 100. 8% , RSD
为 1. 9% (n= 5)。
2. 7 样品含量测定:分别精密吸取已制备好的藤茶
精制品、特级品、一级品和等外品供试液各 0. 40
mL,每种供试液分别取 2份 ,以下按“标准曲线的制
备”项下 ,从“置于 25 mL量瓶中……”起操作 ,测定
每份供试液络合前后的吸光度差值 (△ A ) ,然后计
算各藤茶样品中黄酮类成分的含量 ,结果见表 1。
表 1 藤茶样品含量测定结果 (n= 3) (% )
藤茶样品 黄酮类成分的含量 R SD
精制品 45. 50 0. 65
特级品 41. 60 0. 54
一级品 37. 15 0. 83
等外品 28. 00 0. 94
  为验证方法的可行性 ,取上述供试品溶液 ,按文
献 [9 ]方法进行 HPLC分析 ,测定供试品中黄酮类成
分的含量。将测定结果与本法进行比较 ,可见两种方
法的测量结果基本一致。 见表 2。
表 2 HPLC法含量测定结果 ( n= 3) (% )
藤茶样品 双氢杨梅树皮素 R SD 杨梅树皮素 R SD 总黄酮
特级品 40. 54 0. 54 1. 23 2. 5 41. 77
一级品 35. 87 1. 6 1. 06 3. 8 36. 93
3 讨论
3. 1 从色谱分析结果可知 ,藤茶供试品溶液中主要
·608· 中草药  Chinese T raditional and Herbal Drug s  2002年第 33卷第 7期
黄酮类成分为双氢杨梅树皮素 ,故本实验采用双氢
杨梅树皮素为指标来测定藤茶药材中黄酮类成分的
含量。
3. 2 藤茶样品中含有较多叶绿素 ,有报道 [8 ]用石油
醚除去其叶绿素后 ,加入 AlCl3溶液 ,直接在双氢杨
梅树皮素与 AlCl3络合物的最大吸收波长下测定藤
茶样品中黄酮类成分的含量。但我们在实验中发现 ,
用石油醚提取虽可除去大部分叶绿素 ,但仍存在背
景吸收 ,直接用普通分光光度法测定往往会使测得
值偏高。本实验采用差示分光光度法 ,利用藤茶样品
溶液中黄酮类成分与 ZrOCl2络合后 ,在 ( 318± 1)
nm波长下吸光度值发生显著变化 ,所测得的络合
前后的吸光度差值与藤茶中黄酮类成分在一定浓度
范围内呈线性关系 ( 4. 576~ 22. 88μg /m L) ,而样品
中共存的其它组分如叶绿素等由于在此波长下不发
生吸收性质改变 ,因而对测定无影响 ,可较好解决背
景吸收的问题。而且 ,实验表明采用差示分光光度法
测定尚可省略除叶绿素这一步骤 ,因而使测定方法
更加简便。
3. 3 双氢杨梅树皮素与 2% ZrOCl2· 8H2O形成的
络合物在 95%乙醇中稳定 ,但在水中很不稳定 ,故
本实验采用 95%乙醇作溶剂测定。
3. 4 络合剂 2% ZrOCl2· 8H2O必须用甲醇配制 ,
因 ZrOCl2· 8H2O在乙醇中溶解度较小。 由于水对
络合物的稳定性有影响 ,因此在溶液配制过程中应
避免用水作溶剂。
参考文献:
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( 1): 30-32.
何首乌中二苯乙烯苷提取工艺优选及炮制对其含量的影响
戚爱棣
(天津中医学院 中药系 ,天津  300193)
摘 要: 目的 优选何首乌中二苯乙烯苷的提取工艺 ,比较何首乌炮制前后二苯乙烯苷的含量。方法 采用正交试
验法 ,通过 HPLC测定提取液中二苯乙烯苷的含量。结果 何首乌中二苯乙烯苷的最佳提取工艺为:用 6. 0倍药材
量的 50%乙醇加热回流 30 min,何首乌炮制前后二苯乙烯苷的含量相差 2~ 3倍。结论 正交设计中的乙醇浓度因
素影响显著 ,何首乌炮制前后二苯乙烯苷的含量差异显著。
关键词: 何首乌 ;二苯乙烯苷 ;正交试验 ;炮制
中图分类号: R286. 02   文献标识码: A   文章编号: 0253 2670( 2002) 07 0609 03
Optimum for extract processing of stilbene glucoside fromPolygonum multiflorum
QI Ai-di
( Depar tment o f Chinese Ma teria Medica , Tianjin Colleg e o f TCM , Tianjin 300193, China )
Key words: Polygonum multi f lorum Thunb. ; sti lbene gluco side; orthogonal test; processing
  何首乌为蓼科植物何首乌 Polygonum mult i-
f lorum Thunb.的干燥块根。按其炮制方法不同又
有生首乌与制首乌之分。生首乌味苦、涩 ,性平 ,具有
润肠、解毒和截疟之功 ;制首乌味苦、甘、涩 ,性温 ,具
有补肝肾、益精血、壮筋骨乌须发之效 [1 ]。现代药理
研究证明 ,何首乌所含的二苯乙烯苷类化合物具有
抗衰老、降低胆固醇、提高免疫功能、防治动脉硬化
及保肝等作用 [2 ]。本实验通过正交试验 ,确定了何首
乌中二苯乙烯苷提取的最佳工艺 ,并在此基础上比
较了炮制前后二苯乙烯苷的含量。
·609·中草药  Chinese T raditional and Herbal Drug s  2002年第 33卷第 7期
收稿日期: 2001-10-31
基金项目:天津市自然科学基金重点课题 ( 023803711)