全 文 ：4. 6 mm, 5μm);流动相: 甲醇 -水 -四氢呋喃 ( 40∶
60∶ 1,用磷酸调整 pH 3) ;流速: 1. 0 mL /min;检测
波长: 276 nm;进样量: 20μL;柱温: 45℃。
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取 60℃真空干燥
4 h黄芩苷对照品 24. 6 mg ,置 50 mL量瓶中 ,加甲
醇至刻度 ,得含黄芩苷 0. 492 mg /mL的溶液 ,备用。
2. 3　供试品溶液的制备:取清肺抑火片粉碎过 80
目筛 ,精密称取 0. 6 g于 100 mL量瓶中 ,加甲醇至
刻度。40℃超声提取 30 min,用甲醇补至刻度 , 0. 45
μm有机滤膜滤过 ,取续滤液 ,备用。
2. 4　阴性对照溶液的制备:按处方组成 ,剔除黄芩 ,
依照清肺抑火片的制备工艺 ,制成不含黄芩的阴性
样品 ,按 2. 3项下方法制成缺黄芩阴性对照溶液。
2. 5　线性关系考察:分别精密量取黄芩苷对照品溶
液 0. 2, 0. 4, 0. 6, 0. 8, 1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5 mL于 10
m L量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,分别进样 20μL,测定峰
面积。 以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标
准曲线。得回归方程: Y= 1 807 723 X - 22 327, r=
0. 999 9,线性范围为 0. 197～ 2. 46μg。
2. 6　精密度试验: 取黄芩苷对照品溶液重复进样 6
次 ,每次 20μL,测定峰面积 ,计算得其 RSD=
0. 86% (n= 6)。
2. 7　重现性试验:取同一样品 (批号: 0212501)粉末
5份 ,分别按 2. 3项下方法制备供试品溶液 ,进样测
定 ,计算得黄芩苷含量的 RSD= 1. 43% (n= 5)。
2. 8　稳定性试验: 取同一供试品溶液 ,每 2 h进样
20μL,测定黄芩苷峰面积值 ,结果其 RSD= 1. 84%
(n= 11)。可见 ,供试品溶液在 20 h内稳定。
2. 9　加样回收率试验:精密称取已知黄芩苷含量的
样品适量 ,分别精密加入不同量的黄芩苷对照品 ,按
2. 3项下方法操作 ,进样测定 ,计算回收率 ,结果平
均回收率为 98. 4% , RSD= 1. 67% (n= 6)。
2. 10　样品的测定:分别精密称取 30 mg样品 3份 ,
置 10 mL量瓶中 ,按 2. 3项下方法操作 ,吸取上清
液 20μL进样分析 ,计算样品中黄芩苷的含量 ,结果
见表 1。 色谱图见图 1。
表 1　清肺抑火片中黄芩苷含量的测定 ( n= 3)
Table 1　 Baicalin in Qingfei Yihuo Tablet (n= 3)
批　号 黄芩苷含量 /( mg· 片 - 1 ) RSD /%
0303519 9. 90 1. 56
0304520 9. 68 1. 97
0212501 9. 84 1. 26
* -黄芩苷
* -baicalin
图 1　黄芩苷对照品 (A)、清肺抑火片 (B)
和阴性对照 (C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC of baicalin (A) , Qingfei Yihuo
Tablet (B) , and negative sample (C)
3　讨论
　　超声提取与回流提取比较 ,超声提取耗时短、提
取较完全。
　　本实验所选色谱系统具有保留时间合适 ,节约
流动相且峰形对称 ,分离效果好。本方法操作简便 ,结
果准确 ,重现性好 ,可作为该制剂的质量控制方法。
超微细化对三七中总皂苷溶出效果的影响
李春华 1 ,黄可龙 1 ,林　强 2
( 1. 中南大学化学化工学院 ,湖南 长沙　 410083; 2. 海南大学理工学院 ,海南 海口　 570228)
　　我国有丰富的中药资源 ,但传统的粗放型的加
工方法使得中药服用量大且机体吸收率低 ,很难发
挥其应有的效能 ,粉体微细化技术正好适应这一要
求。中药粉体有效成分的溶出与颗粒粒度之间存在
着密切的关系 ,中药通过超微细化后可以大大提高
有效成分的利用率。本研究以三七为代表 ,以总皂苷
为溶出指标 ,利用分光光度法测定其溶出量和溶出
速率 ,考察不同粒度三七粉中总皂苷的溶出规律 ,评
价超微细化对三七总皂苷溶出效果的影响。
1　实验部分
·647·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 6期 2004年 6月
收稿日期: 2003-12-08作者简介:李春华 ( 1969— ) ,男 ,湖南隆回人 ,中南大学讲师 ,博士 ,从事天然产物化学和资源综合利用研究。
1. 1　材料与仪器: 7550型紫外 -可见分光光度计
(上海分析仪器设备厂 ) , 80— 2型离心沉淀机 (深圳
国华仪器厂 ) ,三七经云南中医药研究所刘渊主任医
师鉴定 ,总皂苷含量为 11. 7% ;三七总皂苷对照品
(中国药品生物制品检定所 ) ;其他试剂均为分析纯。
1. 2　标准曲线的制备:取三七总皂苷对照品 ,精密
称定 12. 5 mg ,置 5 m L量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释
至刻度 ,摇匀。 精密吸取 10, 20, 30, 40, 50μL,分别
置比色管中 ,用热风吹去溶剂 ,各加入 5%香草醛 -
冰醋酸溶液 0. 2 mL和高氯酸 0. 8 mL,然后在 60
℃的水浴中加热 15 min,立即在冷水浴中冷却 10
min,加冰醋酸 5 m L并摇匀。在分光光度计 560 nm
波长测定吸光度。 将所得吸光度与相应的总皂苷含
量绘制标准曲线 ,得直线方程 A= 0. 002 17 C -
0. 027 3, r= 0. 999 8,线性范围: 2. 5～ 12. 5μg。
1. 3　三七粉不同粒度对总皂苷溶出量的影响: 分别
准确称取经过分级得到的不同粒度的三七粉 1. 00
g ,置于 25 m L锥形瓶中 ,准确加入 10 mL甲醇 ,恒
温水浴 ( 37± 0. 5) ℃ , 100 r /min恒速搅拌 ,溶出时
间 50 min,迅速离心。然后精密吸取上清液 2 mL于
5 mL量瓶中 ,挥干 ,加 2 mL二次蒸馏水溶解残渣 ,
过等量的大孔吸附树脂 ,逐毫升加入 10 mL蒸馏
水 ,洗涤至澄清 , 15 mL甲醇以 0. 5 m L /min的速度
洗脱。 15 mL甲醇洗脱液置水浴中浓缩至干 ,加入 5
m L甲醇定容。 取 40μL甲醇液同 1. 2项下方法进
行比色试验 ,测定三七总皂苷含量 ,然后换算为 1 g
三七粉在 10 mL甲醇中的总皂苷溶出量 ,见图 1。
图 1　总皂苷溶出量随三七粉颗粒粒径的变化
Fig. 1　Changes of total saponin accompanied with
diff erent granule size of P . notoginseng
　　可见 ,在 d50= 8. 17μm之前 ,随着颗粒粒度的
变小 ,总皂苷在 50 min内的溶出量逐渐增大 ;当三
七颗粒 d50达到 8. 17μm时 ,溶出量出现突然增大的
趋势 ,溶出量达到皂苷总含量的 77. 8% ;随着颗粒
粒度的进一步减少 ,总皂苷溶出量依然逐渐增大 ,但
变化幅度不大 ;当颗粒中粒径为 4. 24μm时 ,皂苷
溶出量达到峰值 ,并趋于完全 ,已达 88. 6% ;随后溶
出量随着颗粒粒径的减少呈现减少的趋势。
1. 4　不同粒度三七粉中总皂苷溶出速率试验:分别
准确称取 10 g不同粒度的三七粉于锥形瓶中 ,分别
加 100 mL甲醇 ,温度恒定于 ( 37± 0. 5)℃ ,搅拌转
速为 100 r /min,分别于 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40,
45, 50, 60 min定位吸取溶液 2 mL,同时补加 2 mL
同温甲醇。将吸取液挥干 ,加 2 m L二次蒸馏水溶解
残渣 ,过等量的大孔吸附树脂 ,逐毫升加入 10 mL
蒸馏水 ,洗涤至澄清 , 15 mL甲醇以 0. 5 mL /min的
速度洗脱。15 mL甲醇洗脱液置水浴中浓缩至干 ,加
入 5 mL甲醇定容。取 40μL甲醇液同标准曲线绘
制方法进行比色试验 ,测定三七总皂苷含量后换算
为 1 g三七粉在 10 mL甲醇中的总皂苷溶出量 ,绘
制不同粒度三七粉中总皂苷溶出速率曲线 ,见图 2。
A-500　 B-400　 C-300　 D-200　 E-100　 F-60
G-d50= 4. 24μm　 H-d50= 8. 17μm　 I-d 50= 2. 20μm
J-d 50= 10. 21μm　 K-d 50= 14. 23μm　 L-d 50= 18. 01μm
图 2　三七超微细粉中总皂苷溶出速率曲线
Fig. 2　 Dissolut ion curve of total saponin
from P . notogensing f ine powder
　　可见 ,从总体上看 ,随着三七粉颗粒粒度的减
·648· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 6期 2004年 6月
少 ,总皂苷的溶出速率曲线依次处于上方 ,说明溶出
速率随着颗粒粒径的变小 ,总皂苷溶出速率加快 ;当
粒径为 8. 17μm时 ,在溶出初期溶出速率突然变
快 ;随后 ,随着三七颗粒的进一步细化 ,颗粒粒径达
到 2μm时 ,溶出速率表现出异常 ,在 30 min前 ,溶
出速率反而小于粒径为 8. 17μm的溶出速率。
2　结论
　　当 d50> 8. 17μm时 ,三七粉中总皂苷溶出量随
着颗粒粒度的减少而增大 ,溶出速率依次增大 ;当超
微细到 d50为 8. 17μm,溶出量突然增大 ,溶出速率
在溶出初期突然加快 ,进一步超细粉碎 ,当 d50为
4. 24μm时 ,溶出量达到峰值 ,溶出速率最大 ,随后
逐渐减少。
　　颗粒粒度与有效成分的溶出效果之间有着密切
关系 ,颗粒的超微细化可以大大提高其溶出量和溶
出速率 ,从而提高中药有效成分的利用率 ,对药效快
速释放、节约资源等具有重要的作用。但同时也表明
在中药超微细过程中 ,并不是越细越好 ,而应控制在
一定的粒度范围内进行适度粉碎 ,这是由中药超微
粉体颗粒的特性所决定的。
薄层扫描法测定芪黄口服液中黄芪甲苷的含量
杨书良
(哈尔滨商业大学药学院 ,黑龙江 哈尔滨　 150076)
　　芪黄口服液由黄芪、黄精、穿山龙、益母草等组
成 ,健脾补肾 ,活血化瘀、清+ 热利湿 ,用于治疗气阴
两虚型的慢性肾炎。黄芪为君药 ,其主要活性成分黄
芪甲苷具有明显的补气益肾作用。本实验采用薄层
扫描法测定黄芪甲苷的含量 ,作为质量控制指标。
1　仪器与试药
岛津 CS— 910双波长薄层扫描仪 ;黄芪甲苷对
照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;硅胶 G(薄层色谱
用 ,青岛海洋化工厂 ) ;硅胶 G预制板 (青岛海洋化
工厂分厂 ) ;试剂均为分析纯 ;芪黄口服液 (自制 )。
2　方法与结果
2. 1　薄层扫描条件:选用 510 nm为测定波长。由
于薄层图谱上黄芪甲苷斑点与相邻斑点距离较近 ,
不适于锯齿扫描 ,同时 ,因其斑点圆整、清晰 ,故选用
线性扫描。展开剂:氯仿 -甲醇 -10%氢氧化钠水溶液
( 65∶ 35∶ 10)。显色剂: 10%硫酸乙醇溶液。测定方
式:反射法、线性扫描。
2. 2　供试品溶液的制备: 精密吸取本品 10 mL,置
分液漏斗中 ,以氯仿 -正丁醇 ( 2∶ 1)萃取 4次 ,第 1
次 40 mL,以后每次 30 m L,合并萃取液 ,置水浴蒸
干 ,残渣加 2%氢氧化钾甲醇溶液溶解 ,并置水浴回
流提取 2 h,然后再置水浴蒸干 ,残渣加水 30 mL溶
解 ,并转移至分液漏斗中以氯仿 -正丁醇 ( 2∶ 1)萃取
4次 ,第 1次 50 mL,以后每次 30 mL,合并萃取液 ,
用 1%磷酸二氢钾溶液 50 mL洗涤 ,弃去磷酸二氢
钾溶液 ,洗涤后的萃取液置水浴上蒸干 ,加乙醚脱脂
3次 ,每次 5 mL,弃去乙醚液 ,挥干 ,残渣加甲醇溶
解 ,转移至 2 m L量瓶内 ,稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 3　对照品溶液的制备: 取黄芪甲苷对照品约 1
mg ,精密称定 ,加甲醇制成 1 mg /mL的对照品液。
2. 4　线性关系考察:精密称取黄芪甲苷 5mg,置 10
mL量瓶中 ,加甲醇至刻度。分别精密吸取 1. 0, 2. 0,
4. 0, 6. 0, 8. 0, 10. 0μL点于同一硅胶 G板 ,以氯仿-
甲醇-10%氢氧化钠水溶液 ( 65∶ 35∶ 10)下层溶液
为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 10%硫酸乙醇溶
液 ,在 110℃烘 5～ 7 min,至斑点清晰 ,取出 ,在薄
层板上覆盖同样大小的玻璃板 ,周围用胶布固定 ,进
行扫描 ,测定积分值。以积分值为纵坐标 ,黄芪甲苷
质量为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程: Y =
0. 034 2+ 0. 992 0 X , r= 0. 999 1。结果表明: 黄芪甲
苷点样量在 0. 5～ 5μg与积分值线性关系良好。
2. 5　精密度试验:在同一薄层板上点 5个相同量的
黄芪甲苷对照品溶液 ,测定 ,结果积分值的 RSD为
1. 6% ;在 5块不同薄层板上点相同量的黄芪甲苷对
照品溶液 ,测定 ,结果积分值的 RSD为 2. 7%。
2. 6　稳定性试验: 以 10%硫酸乙醇溶液喷雾 ,在
110℃烘 5～ 7 min,显色后每隔 30 min扫描一次 ,
结果黄芪甲苷含量的 RSD为 2. 8% (n= 5) ,表明供
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收稿日期: 2003-11-12