全 文 ：出量。结果见表 2, 方差分析见表 3, 4。
表 2 L9( 34)试验设计及结果
Table 2 Design and result of L9 ( 34) orthogonal test
列号 A B C D(空白)
固形物
得率/ %
延胡素乙素
浸出量/ mg
1 1 1 1 1 10. 56 16. 93
2 1 2 2 2 15. 32 17. 23
3 1 3 3 3 15. 41 18. 55
4 2 1 2 3 10. 01 24. 98
5 2 2 3 1 12. 63 25. 90
6 2 3 1 2 13. 53 26. 68
7 3 1 3 2 9. 11 23. 60
8 3 2 1 3 11. 55 23. 30
9 3 3 2 1 11. 57 23. 95
固体物得率Ⅰ 41. 29 29. 68 35. 64 34. 76
Ⅱ 36. 17 39. 50 36. 90 37. 96
Ⅲ 32. 23 40. 51 37. 15 36. 97
R 9. 06 10. 83 1. 51 3. 20
SS j 9. 12 13. 03 0. 25 1. 14
延胡索乙素
浸出量Ⅰ 52. 71 65. 51 66. 91 66. 78
Ⅱ 77. 56 66. 43 66. 16 67. 51
Ⅲ 70. 85 69. 18 68. 05 66. 83
R 24. 85 3. 67 1. 89 0. 73
SS j 68. 61 1. 50 0. 40 0. 06
表 3 固形物得率方差分析
Table 3 Variance analysis of solid extracting
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 13. 76 2 6. 88 12. 29 P < 0. 05
B 23. 86 2 11. 93 21. 30 P < 0. 01
误差( C+ D) 2. 23 4 0. 56
F0. 05( 2, 4) = 6. 94 F0. 01( 2, 4) = 18. 00
表 4 延胡索乙素浸出量方差分析
Table 4 Variance analysis of tetrahydropalmatine extract
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F值 显著性
A 110. 18 2 55. 09 918. 17 P < 0. 01
B 2. 43 2 1. 22 20. 33
C 0. 61 2 0. 31 5. 17 P < 0. 05
误差( D) 0. 11 2 0. 06
F0. 05( 2, 2) = 19. 00 F0. 01( 2, 2) = 99. 00
以固形物得率为评价指标,乙醇体积分数对其
有显著性影响, 加醇量对其有极显著性的影响,最佳
提取工艺为 A 1B3C1 ; 以延胡索乙素总量为评价指
标,乙醇体积分数对其具有极显著的影响,加醇量对
其有显著性的影响, 最佳提取工艺为 A 2B3C1。提取
固体物的多少与有效成分的浸出并不一定完全呈正
比关系, 相反, 乙醇体积分数愈小,水溶性杂质成分
溶出会更多。70%乙醇提取时延胡索乙素量明显大
于 60%乙醇提取的延胡索乙素量, 而且统计学上差
异具有显著性( P< 0. 01) ,这也说明 70%乙醇更利
于延胡索中醇溶性成分的浸出,因此A 2B3C1醇提工
艺条件应该更具有合理性,故选用 A 2B3C1方案对延
胡索进行提取。
2. 4 验证试验:取延胡索粗粉适量, 按照最佳工艺
条件 A 2B3C1 进 行试 验, 结 果固 形物 得率 为
12. 65%, 延胡索乙素浸出量达 26. 68 mg ,与正交试
验中结果一致。
3 讨论
由方差分析结果可知,乙醇体积分数、加醇量对
固形物得率和延胡索乙素得率均有显著影响, 而提
取时间仅有一定影响。
在最优工艺条件下延胡索乙素的转移率达
88. 7%,提取已比较完全,且验证试验结果表明该工
艺稳定可行,适合大于生产。
References:
[1] Xu T , Jin X L, Cao H M. Advance in resear ch of
ph arm acological activit ies of dl-tet rahydropalmat ine [ J] . Chin
J Clin P harm (中国临床药学杂志) , 2001, 10( 1) : 58-60.
[2] Chen P, Xing Z R. Comparis on of ext ract ing and an alys is of
total alk aloid s f rom Rhizoma Corydal is [ J ] . Chin J Mod Ap pl
P harm (中国现代应用药学) , 1993, 10( 6) : 15-16.
[3] Gong Q, Zhou D. Assay of terah ydropalmat ine in Yanhu suo
by HPLC [ J] . Chin J Mod App l P harm ( 中国现代应用药
学) , 2000, 17( 4) : 315-317.
HPLC法测定参葛颗粒中葛根素的含量
戎欣玉1 ,邵文亮2,马 燕2,胡献菊2
( 1. 河北科技大学化学与制药工程学院 ,河北 石家庄 050018; 2. 河北省药物研究所, 河北 石家庄 050061)
参葛颗粒是由人参、葛根、麦冬、茯苓、黄芪、生
地等 10味中药加工而成的中药制剂, 具有生津止
渴、清热除烦、养阴滋肾、益气和中之功效。为了有效
控制该制剂的质量, 本实验对其君药葛根中的有效
·1013·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 35 卷第 9 期 2004年 9月
收稿日期: 2004-01-28作者简介:戎欣玉( 1962—) ,女,石家庄市人,副教授,主要从事教学及药物制剂的研究开发。
T el: ( 0311) 8632185 E-m ail : xyrong @ hebu st . edu . cn
成分葛根素进行了含量测定研究。本方法简便、快速、
结果准确,为该制剂的质量控制提供了实验依据。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪:江申 LC—10系列,江申通用
汉字色谱工作站, 美国 Rheodune 7725i进样阀( 20
L)。
葛根素对照品(批号: 0752-9907, 供含量测定
用, 中国药品生物制品检定所) ; 甲醇(分析纯) ; 水
(亚沸水) ;参葛颗粒(自制)。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备:精密称取葛根素对照品适
量,加 25%甲醇制成 50 g/ mL 溶液, 即得。
2. 2 供试品溶液的制备: 精密称取研细的本品粉末
0. 45 g, 置 100 mL 具塞烧瓶中,精密加入 25%甲醇
50 mL, 称定质量, 加热回流 30 m in, 放冷, 再称定质
量, 用 25%甲醇补足减失的质量, 摇匀, 静置, 取上清
液适量。用微孔滤膜( 0. 45 m)滤过, 取滤液,即得。
2. 3 阴性样品溶液的制备: 按样品处方称取除葛根外
的中药材适量, 按供试品提取制备方法制备, 即得。
2. 4 色谱条件[ 1, 2] : Hypersil C18色谱柱( 250 mm×
4. 6 mm , 5 m) ;流动相: 甲醇-水( 25∶75) ;检测波
长: 250 nm ;柱温:室温; 体积流量: 1. 4 mL/ m in。在
上述色谱条件下, 对照品、阴性样品及供试品色谱见
图 1。可见, 阴性样品在葛根素峰位置处无假性峰,
表明参葛颗粒中其他成分对葛根素的测定无干扰。
此条件下葛根素与其他组份均能达到基线分离。
* -葛根素
* -puer arin
图 1 葛根素对照品(A)、参葛颗粒( B)
及阴性样品(C)的 HPLC图谱
Fig. 1 HPLC chromatograms of puerarin (A) , Shenge
Granule (B) , and blank (C)
2. 5 线性关系的考察:精密称取葛根素对照品制成
质量浓度为 100 g/ mL 的溶液。各取适量分别稀释
成 10、20、30、40、50 g / mL 的溶液, 按上述色谱条件
各取 20 L 进样,测定峰面积。以峰面积 A 为横坐
标,进样量 X 为纵坐标, 得回归方程: X = 1. 976×
10- 7 A - 1. 272×10- 2 , r= 1. 000 0。结果表明葛根
素在 0. 2～2. 0 g 与峰面积呈良好的线性关系。
2. 6 精密度试验:精密吸取葛根素对照品溶液 20
L, 在上述色谱条件下重复进样 6 次, 分别测定峰
面积值,其 RSD= 0. 16%。
2. 7 稳定性试验:精密吸取供试品溶液 20 L, 按
上述色谱条件, 在 0、1、2、3 h 分别进样,测定峰面积
值, 结果 3 h 内数据稳定, 葛根素峰面积 RSD =
0. 21%。
2. 8 重现性试验:取同一批号样品, 平行制备 5份
供试品溶液,分别进样, 测定峰面积值, 结果葛根素
峰面积RSD= 0. 28%。
2. 9 回收率试验:采取加样回收法。精密称取批号
为000814的样品 5份适量(含葛根素约 1. 5 mg ) ,
分别加入葛根素对照品溶液适量(含葛根素约 1. 5
mg) ,混匀,制备供试品溶液, 分别进样,测定峰面积
值, 计算, 结果平均回收率为 99. 36%, RSD 为
2. 22% ( n= 5)。
2. 10 样品的测定: 取 10 个批号的样品,制成供试
品溶液, 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各
20 L, 注入液相色谱仪,测定峰面积,计算含量, 结
果见表 1。
表 1 参葛颗粒中葛根素的含量 ( n= 2)
Table 1 Puerarin in Shenge Granule ( n= 2)
批 号 葛根素/ ( mg·g- 1) 批 号 葛根素/ ( mg·g- 1)
000731 6. 84 000912 5. 72
000814 6. 39 000916 5. 21
000828 6. 40 000920 5. 61
000904 5. 83 000922 5. 84
000908 5. 57 000925 5. 81
3 讨论
3. 1 流动相的选择:试验中曾以甲醇-水( 30∶70)、
甲醇-水( 21∶79)不同流动相试验,但制剂中葛根素
峰分离状态不佳或保留时间过长。本法采用甲醇-水
( 25∶75)为流动相, 处方中各成分可有效地分离, 且
其他组份对葛根素含量测定无干扰。
3. 2 供试品提取方法的选择: 用 50%乙醇、30%乙
醇、25%甲醇为溶剂提取样品, 结果显示以 25%甲
醇提取,峰形最优,且提取完全。经比较超声提取、热
浸回流和不同的回流时间试验,结果以热浸回流 30
m in最佳。
3. 3 方法学考察结果显示,本试验所建立的方法准
确可靠,可作为该制剂中葛根素的含量测定方法。
References:
[1] Ch P (中国药典) [ S] . Vol Ⅰ. 2000.
[2] Chen L M, LR F, Xiong F L. Determ inat ion of pu erarin in
Lanqijiangtang Capsules by HPLC [ J] . Chin T rad it P at Med
(中成药) , 1999, 21( 10) : 505-506.
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