全 文 ：·药理实验与临床观察·
当归补血汤中不同组分对正常及血虚小鼠免疫功能的影响
王燕平 1 ,李晓玉 1 ,宋纯清 2 ,陈长勋 2 ,胡之璧 2⒇
( 1. 中国科学院上海药物研究所 ,上海　 200031; 2. 上海中医药大学 ,上海　 200032)
摘　要: 目的　比较当归补血汤中的不同组分对正常及血虚小鼠模型的免疫调节作用。方法　采用 M TT法测 T、
B淋巴细胞的增殖率 ;分光光度法检测脾细胞中抗体的生成 ;用乙酰苯肼和环磷酰胺制备小鼠血虚模型。结果　黄
芪中的 4个不同组分对正常小鼠均具有增强 T、 B淋巴细胞增殖率及促进抗体生成作用 ,而当归中的 3个不同组
分则作用各异 ,但是对血虚模型小鼠均表现出明显的免疫调节作用。体外实验发现: 在 2. 5～ 250μg /m L浓度范围
内 ,黄芪黄酮、黄芪皂苷以及黄芪和当归的挥发油部分均表现为良好的双向免疫调节作用 ,而黄芪和当归的多糖组
分则为明显的浓度依赖性作用方式。 结论　当归补血汤中的组分具有不同程度的免疫调节作用。
关键词: 当归补血汤 ; 当归 ; 黄芪 ; 免疫调节作用 ; 血虚模型
中图分类号: R286. 95　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 02 0135 04
Effect of different fractions from DANGGUI BUXUE TANG
*
on immunological function in
normal and blood-deficiency mouse
W ANG Yan-ping1 , LI Xiao-yu1 , SON G Chun-qing2 , CHEN Chang-xun2 , HU Zhi-bi2
( 1. Shanghai Institute of Ma teria Medica, Chinese Academy o f Sciences, Shanghai 200031,
China; 2. Shanghai Univ e rsity of TCM , Shanghai 200032, China )
Abstract: Object　 To study the immunomodula to ry effect o f sev en fractions f rom DANGGUI
BUXU E T ANG in no rmal and blood-deficiency mouse. Methods　 The proli feration of T, B lymphocyte
w as measured by M T T assay; the activ ity of splenocy te antibody w as determined by spect ro scopic assay;
the blood-deficiency model w as prepared by injection of acety l pheny lhydra zine and cyclophosphamide.
Results　 Four f ractions f rom Astragalus membranaceus ( Fisch. ) Bunge al l promo ted prolifera tion of T and
B lymphocy te and antibody production. Three f ractions f rom Angelica sinensis ( Oliv. ) Diels had dif ferent
ef fects a t 200 mg /kg po in v ivo , but they all show ed signi ficant immunomodula to ry effects on blood-
deficiency mouse. In vitro , vo latile oil , f lav one and saponin f rom A. membranaceus and vola tile oil,
f lav one f rom A. sinensis exhibi ted fine dual-immunomodula to ry ef fects, poly saccha ride f rom bo th herbs
show ed w el l concentration-dependent immunomodula to ry effects at the doses o f 2. 5～ 250μg /mL.
Conclusion　 There are dif ferent immunomodulatory ef fects in the dif ferent f ractions f rom DANGGUI
BUXU E TANG.
Key words: DAN GGU I BUXU E TANG; Astragalus membranaceus ( Fish. ) Bunge; Angelica sinensis
( Oliv. ) Diels; immunomodula tion; blood-deficiency model
*
DANGGUI BUXU E TANG is a typical Chinese compound preparation wi th Radix Astragali and
Radix Angel icae Sinensis etc. . It has the function o f inv igo rating the spleen and replenishing qi .
　　当归补血汤是经典的补中益气复方 ,由黄芪与
当归按 5∶ 1的比例组成 [1 ]。近代研究表明当归补血
汤具有补血 ,调节免疫功能等药理作用。临床对许多
免疫功能紊乱的疾病如类风湿性关节炎 ,系统性红
斑狼疮等自身免疫疾病均有较好疗效 [2 ]。黄芪和当
归两个单味药均是很好的补益药 ,究竟是其中哪些
成分在起免疫调节作用呢? 为了探索当归补血汤的
主要药效物质基础 ,我们运用现代药理学和现代植
物化学分离技术相结合的方法 ,将当归补血汤拆分
成 7个组分 ,分别观察各个组分对正常及“血虚模
型”小鼠脾淋巴细胞增殖及抗体生成功能的影响 ,以
明确当归补血汤的主要药效物质基础。
·135·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
⒇ 收稿日期: 2001-04-02基金项目: “九五”国家攀登计划预选项目:中药现代化关键问题的基础研究 ,编号 98pd09作者简介:王燕平 ,女 , 28岁 ,在读博士生 ,中国科学院上海药物研究所免疫药理室 ,邮编 200031
1　实验材料
1. 1　实验动物: ICR纯系小鼠 ,雌性 , 18～ 22 g ,由
中国科学院上海药物研究所动物中心提供 ;昆明种
小鼠 ,雌雄各半 , 18～ 22 g ,由上海中医药大学动物
中心提供。
1. 2　样品与试剂
1. 2. 1　样品制备: 样品由上海中医药大学提供 ,制
备方法如下: 黄芪用 90% 乙醇渗滤 ,回收乙醇后用
石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分配 ,依次得黄芪挥发油
( A)、黄酮 ( B)、皂苷 ( C)及黄芪经水煎浓缩加醇沉
淀后的多糖部位 ( D)。当归水煎液浓缩后 ,加醇沉淀
多糖 ( G) ,稀醇部分回收乙醇后 ,用石油醚和乙酸乙
酯分配 ,依次得当归挥发油 ( E)和黄酮 ( F)。 各样品
体内实验用 0. 1% CMC配制 ,体外实验用少量
DMSO溶解后 ,用 RPM I1640培养液稀释至所需
浓度。
1. 2. 2　试剂: RPM I1640培养液 , Gibco公司产品 ;
伴刀豆蛋白 ( ConA)和细菌脂多糖 ( LPS)均为
Sigma公司产品 ,四甲基偶氮唑蓝 ( M T T) , Fluka公
司产品 ;小牛血清 ,上海实生细胞生物公司购买。其
余试剂均为国产分析纯。
2　实验方法
2. 1　脾细胞悬液的制备: 方法同前文 [3 ]。体内实验
小鼠随机分组 ,每日 ig上述不同样品 1次 ,对照组
ig溶剂。小鼠眼眶放血致死后 ,无菌取脾脏 ,用 100
目不锈钢网研磨 ,使细胞分离 ,低渗破坏红细胞后取
上清液 500× g 离心 3 min,所得淋巴细胞用含
10% 小牛血清的 1640培养液配成 5× 106 /m L的
脾细胞悬液。
2. 2　淋巴细胞增殖实验: 方法略有改动 [4 ]。 将 5×
106 /mL的脾细胞悬液 ,以每孔 100μL接种于 96
孔培养板 , ConA (终浓度 5μg /m L)和 LPS (终浓
度 10μg /m L)加入不同孔内 ,以分别活化 T、 B淋
巴细胞。将此板置于 37℃ , 5% CO2培养箱内培养
48 h ,并于培养结束前 4 h,每孔加入 5 mg /mL
MT T 20μL, 4 h 后弃去上清液 ,每孔加溶解液
( 50% 二甲基甲酰胺 , 10% SDS, HCl调 pH至 7. 4)
100μL,充分溶解后 ,在酶联免疫仪上检测 570 nm
的吸光度 ( A570 nm )。
2. 3　抗体生成实验 [5 ]: 将 1× 107 /mL的脾细胞悬
液 ,绵羊红细胞和豚鼠血清各 1 mL混匀 , 37℃ 温
浴 1. 5 h, 800× g离心 15 min,用紫外分光光度计
检测 A520nm ,空白对照组用 PBS。
2. 4　血虚模型的制备:昆明种小鼠随机分为 8组。
对照组每天 ig生理盐水 ,治疗组分别 ig不同组分
(各相当于生药 10 g /kg )。 第 1天 sc乙酰苯肼 40
mg /kg ,第 4天减为 20 mg /kg ,同时 ip环磷酰胺 40
mg /kg ,随后连续 3 d仅 ip环磷酰胺 40 mg /kg ,第
14天时解剖。
2. 5　统计学处理: 所有数据均采用 Student-t test
统计处理。
3　实验结果
3. 1　体内作用
3. 1. 1　当归补血汤、当归和黄芪对正常小鼠的免疫
调节作用: 水煎剂按相当于生药的配比剂量给 ICR
小鼠 ig 6 d,第 3天 ip绵羊红细胞刺激抗体生成 ,
第 7天解剖。结果发现三者对正常小鼠的 T、 B淋巴
细胞增殖和脾细胞抗体生成均有明显的促进作用 ,
说明合剂及单味药都有明显的免疫增强作用 ,合剂
的免疫增强作用似乎略强于单味药 ,提示配伍用药
可能具有一定的协同作用 ,结果见表 1。
表 1　当归补血汤、黄芪和当归的免疫调节作用
组　别 剂　量
( g /kg)
A570 nm
T淋巴细胞　 B淋巴细胞
A 520 nm
抗体生成
正　常 - 0. 70± 0. 01 0. 83± 0. 05 0. 840± 0. 1
当归补 6 1. 06± 0. 00* * * 1. 05± 0. 02* 0. 861± 0. 6* *
血汤 12 0. 96± 0. 01* * * 1. 05± 0. 02* 0. 872± 0. 1* * *
黄　芪 5 0. 92± 0. 07* 0. 98± 0. 02* 0. 870± 0. 0* * *
10 0. 87± 0. 01* * * 1. 02± 0. 01* 0. 867± 0. 2* * *
当　归 1 0. 93± 0. 06* 0. 88± 0. 01 0. 864± 0. 1* * *
2 1. 01± 0. 01* * * 0. 94± 0. 05* 0. 874± 0. 3* * *
　　与正常对照组相比: * P < 0. 05　* * P < 0. 01　* * * P < 0. 001
3. 1. 2　当归及黄芪中不同组分的免疫调节作用: 将
A～ G 7个不同组分用 200 mg /kg ig ICR小鼠 6 d
后 ,结果黄芪的 4个不同组分 A～ D都表现出显著
的免疫增强作用 ,其中又以 C (黄芪皂苷 )的免疫增
强作用最为突出 ,能够使 T淋巴细胞增殖率提高近
5倍 ( P < 0. 001)。当归的作用较为复杂 ,在 3个不
同组分 E～ G中 , F表现为明显的抑制 T、 B淋巴细
胞增殖的作用 , G则能够促进 T、 B淋巴细胞增殖 ,
而 E仅促进 T细胞增殖 ;此外 , E～ G对正常小鼠
的抗体生成均无明显作用 ,结果见表 2。
3. 1. 3　当归补血汤中不同组分对血虚模型小鼠的
免疫调节作用: 用乙酰苯肼和环磷酰胺制备的血虚
模型小鼠 ,其免疫功能低下 ,主要表现为 T淋巴细
胞增殖能力下降 ,即 T细胞免疫功能降低 ( P <
0. 05)。当归补血汤中的不同组分分别以相当于生药
10 g /kg的剂量 ig 14 d后 ,发现除黄芪 D以外 ,均
具有明显提高血虚模型小鼠低下的细胞免疫功能的
能力 ,而且与正常对照组相比 ,黄芪 B、 C还可以促
·136· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
进静止淋巴细胞的增殖 ,黄芪 B对 B淋巴细胞增殖
也有明显的促进作用 ,结果见表 3。
表 2　黄芪、当归中的不同组分对抗体生成、
T、 B淋巴细胞增殖率的作用
样　品 抗体生成
(% )
T淋巴细胞增殖率
(% )
B淋巴细胞增殖率
(% )
A 41* * * 　 306* 　 235*
B 　 7* 　 165* 　 192*
C 10* 　 490* * * 99*
D 34* * * 35 60
E 　 4 　 54* - 6
F - 1 - 72* - 69*
G - 1 　 245* 38*
　　注:增殖率 (% )= (A样品 - A对照 ) /A对照× 100%
与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01　* * * P < 0. 001
由于样品为粗品 ,而且此处为初筛 ,所以没有用相对于生药的剂
量计算 ,仅以相同剂量的药效比较 ;此结果在以后的实验中亦得到证
实。 另外 , 100 mg /kg体内给药 6 d, F能够分别使增强 T、 B淋巴细
胞的增殖率提高 400% 和 37. 5%。
表 3　当归补血汤中不同组分对血虚模型
小鼠的免疫调节作用
样　品 A570 nm静止细胞 T淋巴细胞 B淋巴细胞
对照组 0. 37± 0. 02 0. 58± 0. 02 0. 50± 0. 03
血虚模型 0. 41± 0. 03 0. 39± 0. 01* 0. 50± 0. 02
E 0. 48± 0. 03 0. 43± 0. 01# 0. 51± 0. 03
F 0. 45± 0. 01 0. 57± 0. 03# 0. 63± 0. 08
G 0. 46± 0. 06 0. 48± 0. 01# # 0. 50± 0. 09
A 0. 50± 0. 05 0. 43± 0. 01# 0. 53± 0. 03
B 0. 51± 0. 02* # 0. 51± 0. 01# # 0. 55± 0. 01*
C 0. 54± 0. 01* * # 0. 51± 0. 01# # 0. 53± 0. 03
D 0. 43± 0. 02 0. 39± 0. 03 0. 47± 0. 04
　　与对照组相比: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
与血虚模型组相比: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
3. 2　体外作用
3. 2. 1　黄芪、当归不同组分的体外免疫调节作用:
在 2. 5～ 250μg /m L的浓度范围内 ,黄芪 A、 B、 C对
静止淋巴细胞均具有明显的双向免疫调节作用 ,即
在 25μg /mL时促进静止淋巴细胞的增殖 ,促进率
分别为 20. 4%、 58. 2% 和 55. 5% ;而在 250μg /mL
时出现明显的抑制作用 ,抑制率分别为 60. 6%、
67. 8% 和 49. 9%。 黄芪 D在 2. 5～ 250μg /mL内
能够剂量依赖性促进静止淋巴细胞的增殖 ,最大促
进率为 50. 3% ;当归 G亦呈现剂量依赖性促进作
用 ,最大促进率为 21. 4% ,结果见图 1。
黄芪 B、 C对 T淋巴细胞增殖亦呈现明显的双
向调节作用 ,促进率分别为 29. 4% 和 20. 5% ;抑制
率分别为 77. 2% 和 66. 5% 。 黄芪 A和当归 E在
250μg /mL时为明显的抑制作用 ,抑制率分别为
72. 6% 和 68. 4% ,结果见图 2。
图 1　当归补血汤 7个组分对静息淋巴
细胞增殖的体外作用
图 2　当归补血汤 7个组分对 T淋巴
细胞增殖的体外作用
黄芪 B、 C对 B淋巴细胞的增殖同样为显著的
双向免疫调节作用 , 25μg /mL时促进率分别为
30. 8% 和 42. 0% ; 250μg /mL 时抑制率分别为
75. 5% 和 67. 7% 。而黄芪 D和当归 G剂量依赖性
促进 B淋巴细胞的增殖 ,在 250μg /mL时 ,分别为
13. 0% 和 21. 2% ;黄芪 A和当归 E在 250μg /mL
时明显抑制 B淋巴细胞的增殖 ,抑制率分别为
64. 4% 和 67. 2% ,结果见图 3。
图 3　当归补血汤 7个组分对 B淋巴
细胞增殖的体外作用
4　讨论
中药复方的开发中最为重要的一个环节是确定
该复方中产生药效的物质基础。基于这一目的 ,我们
选取了只有两味中药组成的当归补血汤这一传统的
补益复方 ,研究该方中的主要药效物质以及产生作
用的主要机制。 体内实验中发现 ,黄芪 4个组分对
正常小鼠均具有不同程度的免疫增强作用 ,提示黄
·137·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
芪的免疫增强作用可能是各个组分之间的协同作
用。当归对正常小鼠的免疫作用比较复杂 ,其整体的
免疫增强作用可能与各个组分之间的配伍有关 ,并
非简单的协同作用。而对血虚模型小组中低下的 T
淋巴细胞免疫 ,当归黄酮和黄芪黄酮、黄芪皂苷的作
用突出 ,说明当归补血汤的补益作用是建立在其单
味药中较强活性物质的基础上。同时 ,当归黄酮在低
剂量时有很强的免疫促进作用 ,但在高剂量时则表
现为明显的免疫抑制作用 ,而对免疫低下的血虚模
型小鼠则能将其降低的 T淋巴细胞增殖率提高至
接近正常 ,反映了当归黄酮极强的免疫调节作用 ,同
时 ,也可以看出当归不同组分之间剂量配比的重要
性。当归黄酮的免疫调节作用有待进一步的研究。
体外实验亦发现当归、黄芪不同组分产生免疫
活性强弱不同。在 2. 5～ 250μg /mL的浓度范围内 ,
黄芪挥发油、黄酮、皂苷以及当归挥发油均表现为显
著的双向免疫调节作用 ,其中黄芪黄酮和皂苷的作
用明显强于黄芪挥发油和当归挥发油 ,这与体内结
果一致 ,说明二者是黄芪产生免疫增强作用的主要
活性物质。两个多糖成分 (黄芪多糖和当归多糖 )则
表现为明显的浓度依赖性作用方式 ,其中 ,二者对静
息细胞和 B淋巴细胞的增殖有明显的促进作用 ,而
对 T淋巴细胞增殖无明显作用 ,黄芪多糖的作用要
强于当归多糖。
尽管黄芪多糖是目前公认的免疫促进剂 ,但是 ,
本实验发现其对 T和 B淋巴细胞的增殖作用和抗
体生成以及对血虚模型小鼠的调节作用均不如黄芪
皂苷和黄芪黄酮两个组分。尤其是黄芪皂苷具有较
强的免疫调节作用 ,可以认为是当归补血汤中药效
的主要物质基础。
参考文献:
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人参皂苷-Rg1对中性粒细胞与血小板之间粘附的影响
沈志强 1 ,吴蓝鸥 1 ,雷伟亚 1 ,陈植和 1 ,刘吉开 2⒇
( 1. 云南省天然药物药理重点实验室 ,昆明医学院 ,云南 昆明　 650031;　 2. 中国科学院昆明植物研究所 开
放实验室 ,云南 昆明　 650204)
摘　要:目的　探讨人参皂苷 -Rg1对大鼠血小板与中性粒细胞之间粘附及颈动脉血栓形成的影响。 方法　采用
Cha rlton等方法评价人参皂苷 -Rg1对电刺激大鼠颈动脉血栓形成的作用 ;应用玫瑰花结试验观察对大鼠血小板与
中性粒细胞之间粘附的影响。结果　 25 mg /kg人参皂苷-Rg1使血栓形成时间从对照组的 ( 18. 7± 1. 8) min延长到
( 36. 4± 2. 1) min (P < 0. 05) ;显著降低凝血酶激活的血小板与中性粒细胞间的粘附率 ,其 IC50为 81. 2μmo l /L。结
论　人参皂苷 -Rg1具有较强的抗血栓的作用 ,其机制可能与抑制中性粒细胞与血小板之间的相互作用有关。
关键词: 人参皂苷 -Rg1; 中性粒细胞 ;血小板 ;粘附 ;血栓形成
中图分类号: R286. 3　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 02 0138 03
Effects of ginsenoside-Rg1 on adhesion of neutrophil to platelet
SHEN Zhi-qiang
1
, WU Lan-ou
1
, LEI Wei-ya
1
, CHEN Zhi-he
1
, L IU Ji-kai
2
( 1. Yunnan Pharmaco lo gica l Labo rato ry of Natura l Products, Kunming M edical Colleg e, Kunming Yunnan 650031, China;
2. Opening Labor ato ry , Kunming Institute o f Bo tany , Chinese Academy o f Sciences, Kunming Yunnan 650204, China)
Abstract: Object　 To investig ate the effects of ginseno side-Rg1 on adhesion o f neutrophi l to pla telet,
and on carotid th rombosis in ra t. Methods　 Cha rl ton and Roset te test w ere used to evalua te the effect of
ginsenoside-Rg1 on ca ro tid thrombosis induced by elect rical stimulation and to observe i ts ef fect on the
·138· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
⒇ 收稿日期: 2001-04-25基金项目:云南省自然科学基金资助项目 ,课题号: 98C066M作者简介:沈志强 ,男 , 35岁 ,博士 ,副教授 ,研究方向:天然药物与心血管药理学 ,于国内外发表论文近 30篇。 Tel: ( 0871) 5332956
E-mai l: s zq2000@ yahoo. com　 Fax: ( 0871) 5377271