全 文 ：RSD= 0. 89% 。
2. 4. 3 加样回收率: 取总藤黄酸 10 mg,精密称定 ,
置 25 mL量瓶 ,加甲醇至刻度 ,精密取该液 0. 5 mL
置 25 mL量瓶 ,按照高 ( 120% )、中 ( 100% )、低
( 80% )分别添加藤黄酸对照品 ,加流动相至刻度 ,按
上述色谱条件测定 ,计算即得。结果 3水平平均回收
率为 97. 2% ,RSD= 1. 5% 。
2. 4. 4 重现性试验: 取本品一批 ( 20001015) ,按上
述方法平行测定 6次 ,计算藤黄酸含量 ,结果藤黄酸
含量为 867 mg /g, RSD= 0. 5% 。
2. 4. 5 稳定性试验: 取含量测定样品溶液 ,隔 4 h
进样测定藤黄酸峰面积 ,连续考察 24 h,结果溶液
在 12 h内稳定 RSD= 1. 0%。
2. 5 样品的测定:照上述方法分析制备供试品溶液
与对照品溶液 ,各取 20μL分别注入液相色谱仪 ,测
定峰面积 ,以外标法计算样品中藤黄酸的含量 , 3个
批号样品的含量测定结果见表 1,色谱图见图 1。
表 1 样品的含量测定结果 (n= 5)
Table 1 Results of content of samples (n= 5)
批 号 藤黄酸 / (mg· g- 1 )
20001015 860
20001021 871
20001027 841
3 讨论
3. 1 藤黄酸的紫外吸收图谱显示最大吸收为 290
nm和 360 nm,但考虑到 360 nm处溶剂的干扰小 ,
故选择 360 nm为测定波长。
3. 2 稳定性试验表明藤黄酸在甲醇中不稳定 ,甲醇
溶液中回流 4 h,藤黄酸含量下降约 10% ,其降解或
异构化产物正在进一步研究中。
3. 3 将藤黄酸置 60℃放置 10 d,含量下降 6% ,故
应置阴凉处保存。
图 1 藤黄酸对照品 ( A)和总藤黄酸 (B)色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of gambogic
acid (A) and total gambogic acid ( B)
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bogic acid and derivatives in Gamboge b y HPLC-ELSD [ J ]. J
Ch ina Pharm Un iv (中国药科大学学报 ) , 1999, 30( 3): 202-
205.
三七化痔丸的质量标准研究
黎炳华 ,丘文珍
(广州中一药业有限公司 ,广东 广州 510140)
三七化痔丸是由盐肤木、三七、千里光等数味中
药组成的成方制剂 ,具有清热解毒、止血止痛等功
效。为了更好地控制其质量 ,本实验对原千里光的薄
层鉴别进行了改良 ,增加了盐肤木、三七的薄层鉴
别 ,并采用薄层扫描法对制剂中的人参皂苷 Rg1进
行含量测定 [1 ]。
1 材料、仪器与试剂
三七化痔丸为本公司产品 ,人参皂苷 Rg1对照
·707·中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2002-10-31
品、三七 Panax notoginseng ( Burk. ) F. H. Chen
对照药材、千里光 Senecio scandens Buch. -Ham.对
照药材 (中国药品生物制品检验所 ) ,盐肤木 Rhus
chinensis Mill.对照药材 (本公司提供 ) ;硅胶 G( 60
型 ) (中国青岛海洋化工集团公司 ) ; CAMAG薄层
扫描仪 ; CAMAG紫外双波长荧光分析灯 ;定量毛
细管 ;实验中所用试剂、试药均为分析纯。
2 薄层鉴别
2. 1 千里光薄层鉴别: 取本品 2. 5 g ,研细 ,加乙醇
50 m L,超声 30 min,过滤 ,水浴蒸干 ,用乙醇溶解成
2 mL,得样品溶液。另取千里光对照药材 4 g ,缺千
里光药材的阴性样品 2. 4 g ,按样品处理方法制成对
照药材溶液、缺千里光药材的阴性样品溶液。吸取上
述 3种溶液各 2μL分别点于同一硅胶 G板上 ,以
苯 -醋酸乙酯 ( 14∶ 1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷
以 10%硫酸乙醇溶液 ,在 105℃加热约 10 min,置
紫外光灯 ( 365 nm )下检视。供试品色谱与对照药材
色谱相应的位置上 ,显相同颜色的斑点 ,缺千里光药
材的阴性样品无干扰 (图 1-A)。
2. 2 盐肤木薄层鉴别: 取盐肤木药材 10 g ,缺盐肤
木药材的阴性样品 10 g ,按 2. 1项下方法同法制成
对照药材溶液、缺盐肤木药材的阴性样品溶液。取
2. 1项下所得样品溶液与盐肤木对照药材溶液、缺
盐肤木药材的阴性样品溶液各 1μL点于同一 5%
磷酸二氢钠 -0. 3% CMC-Na硅胶 G板上 ,展开 ,取
出 ,晾干 ,置紫外光灯 ( 365 nm )下检视。供试品色谱
与对照药材色谱相应的位置上 ,显相同颜色的斑点 ,
缺盐肤木药材的阴性样品无干扰 (图 1-B)。
2. 3 三七薄层鉴别: 取本品粉末 2. 5 g,加乙醚 50
mL回流 1 h,弃去乙醚 ,残渣挥去醚 ,加甲醇 30 mL
浸过夜 ,超声 20 min,静置 ,过滤 ,残渣再加甲醇 20
mL超声 15 min,过滤 ,用甲醇洗涤残渣 2次 ,每次
10 mL,合并滤液 ,水浴蒸至约 1. 5 mL,加中性氧化
铝 3 g,拌匀 ,水浴挥去甲醇至粉末状。将吸收了样品
的中性氧化铝加至大孔树脂柱 ( 2. 0 cm× 8 cm,加中
性氧化铝 1. 5 g ) ,先用 8 mL水洗涤 ,弃去水液 ,再
加 30%乙醇液 ,静置 5 min,用 30%乙醇洗涤 70
mL,弃去 30%乙醇 ,最后用 60%乙醇洗涤 120 mL,
收集 60%乙醇液。 水浴蒸干 ,用甲醇溶解至 2 mL。
另取三七对照药材 0. 5 g、缺三七药材的阴性样品 5
g ,同法制成对照药材溶液、缺三七药材的阴性样品
溶液。取人参皂苷 Rg1对照品 ,加甲醇制成 0. 5mg /
mL的溶液 ,作为对照品溶液。吸取上述 4种溶液各
5μL分别点于同一硅胶 G板上 ,以氯仿 -甲醇-正丁
醇-水 ( 2∶ 1∶ 4∶ 2)混合液冰箱分层 ,取下层溶液为
展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 30%硫酸乙醇溶液 ,
于 105℃烘 5 min。在日光下检视。供试品与对照药
材、人参皂苷 Rg1对照品在相应的位置上 ,显相同
颜色的斑点 ,缺三七药材的阴性样品溶液无干扰 (图
1-C)。
A B C
1-缺千里光阴性 1, 6-缺盐肤木阴性 1-缺三七阴性
2-千里光对照药材 2-盐肤木对照药材 2～ 4-三七化痔丸
3～ 5-三七化痔丸 3～ 5-三七化痔丸 5, 6-人参皂苷 Rg1
1-sample wi th out S . scandens 1, 6-sam ple wi thout R . chinensis 1-sample w i thou t P. notoginseng
2-S . scandens crude d rug 2-R . chinensis crude d rug 2-4-Sanqi Huazhi Pill
3-5-Sanqi Huazhi Pi ll 3-5-Sanqi Huazhi Pi ll 5, 6-ginsensid e Rg1
图 1 千里光 (A)、盐肤木 (B)和三七 (C)的 TLC图谱
Fig. 1 TLC chromatograms of S . saussureoids (A) , Rhus chinenisis (B) andP . notoginseng (C)
·708· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 34卷第 8期 2003年 8月
3 含量测定
3. 1 薄层扫描条件: 吸附剂为高效硅胶 G板 ( 10
cm× 20 cm ) ;展开剂: 氯仿 -甲醇 -正丁醇 -水 ( 2∶ 1∶
4∶ 2)混合液冰箱分层 ,取下层 [2 ] ;展开方式:上行展
开 ;显色剂: 30%硫酸乙醇溶液 , 105℃加热显色约 5
min;双波长扫描 ;检测波长 510 nm,参比波长 700
nm;扫描速度 20 mm /min;狭缝 10 mm× 0. 40 mm。
3. 2 对照品溶液的制备: 精密称取人参皂苷 Rg1
4. 984 mg ,加甲醇溶解并置 10 mL量瓶中稀释至刻
度 ,摇匀 ,作为对照品溶液。
3. 3 供试品溶液的制备:精密称取本品粉末 2. 5 g ,
加乙醚 50 mL回流 1 h,弃去乙醚 ,残渣挥干乙醚 ,
加甲醇 30 m L浸过夜 ,超声 15 min,滤过 ,再用甲醇
洗涤残渣 2次 ,每次 10 m L,合并滤液 ,水浴蒸至约
1. 5 mL,加中性氧化铝 3 g ,拌匀 ,水浴挥去甲醇至
粉末状。将吸收了样品的中性氧化铝加至大孔树脂
柱 ( 2. 0 cm× 8 cm ,中性氧化铝 1. 5 g ) ,先用 8 mL
水洗涤 ,弃去水液 ,再加 30%乙醇液 ,静置 5 min,用
30%乙醇洗涤 70 mL,弃去 30%乙醇 ,最后用 60%
乙醇洗涤 120 mL,收集 60%乙醇液。水浴蒸干 ,用
甲醇溶解至 2 mL,作为供试品溶液。
3. 4 线性关系考察: 精密吸取对照品溶液 1. 0,
2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0μL点于同一硅胶 G高效薄层板
上 ,在上述展开条件下展开 ,显色 ,于 105℃烘至显
色 ,取出用同样大小的玻璃板覆盖 ,胶布固定 ,放冷。
在上述扫描条件下测定 ,以扫描面积为纵坐标 ,点样
量为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得人参皂苷 Rg1的回
归方程为 Y= 713. 970+ 2 956. 538X , r= 0. 999 1。
线性范围为 4. 984～ 24. 92μg。曲线不经过原点 ,用
外标两点法定量。
3. 5 空白试验:精密称取不含三七的空白样品约
2. 5 g ,提取 ,点样 ,展开 ,显色 ,在人参皂苷 Rg1的位
置上 ,未见干扰斑点 ,并不显示其他三七皂苷的斑
点 ,光谱扫描未见有吸收。
3. 6 精密度试验: 在同一硅胶 G高效薄层板上 ,点
5个相同浓度的对照品溶液 ,展开 ,显色 ,扫描测定 ,
结果人参皂苷 Rg1峰面积积分值 RSD= 0. 32% 。在
5块硅胶 G高效薄层板上 ,点相同浓度的对照品溶
液 ,在上述条件下测定 ,结果人参皂苷 Rg1峰面积
积分值 RSD= 0. 86% 。
3. 7 稳定性试验:对同一硅胶 G高效薄层板每隔 1
h测定一次 ,结果 5 h内人参皂苷 Rg1斑点峰面积
积分值稳定 , RSD= 1. 79%。
3. 8 重现性试验: 精密称取同一批号样品 5份 ,分
别测定人参皂苷 Rg1的含量。结果人参皂苷 Rg1含
量的 RSD= 1. 42% 。
3. 9 回收率试验:取已测定含量的供试品 5份 ,加
入人参皂苷 Rg1对照品 ,依法操作 ,结果平均回收
率为 98. 93% , RSD= 0. 99% 。
3. 10 样品测定:按照提取方法项下操作 ,测定样品
的含量 ,结果见表 1。
表 1 三七化痔丸中人参皂苷 Rg1的含量测定结果 ( n= 2)
Table 1 Ginsenoside Rg1 in Sanqi Huazhi Pill ( n= 2)
批 号 人参皂苷 Rg 1 / ( mg· g- 1)
99040015 0. 198
99060035 0. 220
00060056 0. 260
00060062 0. 194
01050070 0. 238
01050085 0. 181
4 讨论
4. 1 在千里光的鉴别中 ,采用原方法 ,斑点分离度
不好且不清晰。 分别试用方法:①用原展开剂 ,改用
硅胶 G板展开 ,以 1% FeCl3乙醇溶液显色 ;②用
苯-醋酸乙酯 ( 14∶ 1)为展开剂 ,薄层板为硅胶 G,显
色剂为 10%硫酸乙醇溶液 ,加热显色。 经多次比较
试验后 ,结果发现②法重现性好 ,分离度好且缺千里
光的阴性样品未见干扰斑点。
4. 2 在盐肤木的鉴别中 ,取盐肤木药材、样品分别
用乙醇回流提取 ,乙醇超声提取 ;展开剂用氯仿 -乙
酸乙酯 -丙酮 ( 8. 5∶ 0. 5∶ 1)与甲苯-乙酸乙酯 -甲酸
( 5∶ 4∶ 1) ;薄层板用硅胶 G与 5%磷酸二氢钠的
0. 3% CMC-Na硅胶 G板交叉试验。结果发现用乙
醇超声提取 ,展开剂用甲苯-乙酸乙酯 -甲酸 ( 5∶ 4∶
1) ,薄层板用 0. 5%磷酸二氢钠的 0. 3% CMC-Na
硅胶 G板 ,展开效果最好。
4. 3 在人参皂苷 Rg1含量测定 [ 3]中 ,将层析显色
后的薄层板 ,置薄层扫描仪中 ,分别对成药中的人参
皂苷 Rg1的斑点和对照品人参皂苷 Rg1进行光谱
扫描 ,结果图谱基本一致 ,表明分离完全并无其他杂
质干扰 ;在光谱图中 ,两者均在 532 nm波长处有最
大吸收 ,与选定的波长 λS= 510 nm,λS= 700 nm处
进行扫描相比较 ,结果λS= 510 nm处扫描的峰形较
好 ,故选用 510 nm作为测定波长。
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·709·中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 34卷第 8期 2003年 8月