全 文 ：酯 m/ z 207 [M+ H] +、m/ z 229 [M+ Na] + 峰; tR=
18. 1 min的色谱峰表现为 m/ z 191 [ M+ H] + 、m/ z
213 [M+ Na] +及 m/ z 229 [M+ K] + 峰,推测为泽
　　　　　表 1　10 批密花石斛的相对保留时间
Table 1　Relative r etention time of 10 ba tches
of D . densif lorum crude drugs
批号 峰　号
1 2( s) 3 4 5 6 7 8 9
1 0. 678 1. 000 1. 076 1. 690 1. 749 1. 997 2. 026 2. 089 2. 442
2 0. 681 1. 000 1. 076 1. 694 1. 753 1. 998 2. 027 2. 091 2. 443
3 0. 682 1. 000 1. 076 1. 695 1. 754 1. 997 2. 026 2. 090 2. 441
4 0. 683 1. 000 1. 076 1. 696 1. 755 1. 998 2. 027 2. 090 2. 443
5 0. 683 1. 000 1. 076 1. 698 1. 758 1. 999 2. 028 2. 091 2. 444
6 0. 684 1. 000 1. 076 1. 698 1. 758 1. 997 2. 027 2. 090 2. 443
7 0. 684 1. 000 1. 076 1. 699 1. 757 1. 997 2. 025 2. 089 2. 441
8 0. 685 1. 000 1. 076 1. 700 1. 759 1. 998 2. 027 2. 091 2. 443
9 0. 685 1. 000 1. 076 1. 700 1. 759 1. 997 2. 026 2. 090 2. 441
10 0. 686 1. 000 1. 076 1. 701 1. 760 1. 998 2. 026 2. 091 2. 442
均值 0. 683 1. 000 1. 076 1. 697 1. 756 1. 998 2. 026 2. 090 2. 442
　　s为参照物
　　s is reference su bstance
表 2　10 批密花石斛的相对峰面积
Table 2　Relative peak area of 10 batches
of D. densif lorum crude drugs
批号 峰　号
1 2( s) 3 4 5 6 7 8 9
1 0. 165 1. 00 0. 469 0. 058 0. 567 0. 179 0. 079 0. 083 0. 155
2 0. 150 1. 000 0. 468 0. 046 0. 563 0. 189 0. 045 0. 091 0. 154
3 0. 159 1. 000 0. 552 0. 067 0. 669 0. 152 0. 091 0. 089 0. 162
4 0. 163 1. 000 0. 458 0. 059 0. 597 0. 173 0. 075 0. 094 0. 146
5 0. 135 1. 000 0. 474 0. 059 0. 653 0. 180 0. 084 0. 091 0. 158
6 0. 152 1. 000 0. 467 0. 061 0. 569 0. 198 0. 095 0. 091 0. 153
7 0. 155 1. 000 0. 537 0. 075 0. 568 0. 186 0. 075 0. 097 0. 160
8 0. 159 1. 000 0. 395 0. 038 0. 463 0. 193 0. 058 0. 068 0. 126
9 0. 163 1. 000 0. 467 0. 061 0. 569 0. 179 0. 075 0. 089 0. 149
10 0. 158 1. 000 0. 473 0. 049 0. 634 0. 156 0. 049 0. 090 0. 179
均值 0. 156 1. 000 0. 476 0. 057 0. 585 0. 179 0. 073 0. 088 0. 154
　　s为参照物
　　s is reference su bstance
兰内酯。LC/MS 负离子检测图中, tR= 21. 3 min 的
色谱峰表现为 m/ z 259 [ M - H] - 峰, 推测为
t ristin; tR = 28. 2 min 的色谱峰表现为 m/ z 331
[M- H] - 峰,推测为鼓槌联苄; tR = 38. 6 min 的色
谱峰表现为m/ z 241 [M- H] - 峰,推测为 2, 5-二羟
基-4-甲氧基芴酮; tR = 39. 5 min 的色谱峰表现为
m /z 239 [M - H] - 峰, 推测为 moscat in; tR = 41. 9
min的色谱峰表现为 m/ z 269 [M- H] - 峰, 推测为
大黄素或芦荟大黄素。
　　质谱检测器可以提供更多化合物的信息, 是对
紫外检测器的一种补充。本实验根据密花石斛及已
知的石斛化学成分的报道, 利用质谱技术对其部分
成分进行了初步定性,可为密花石斛化学成分的进
一步研究及质量控制提供参考。研究结果也说明, 密
花石斛与同为石斛属的其他种石斛在化学成分上存
在着共性, 将其作为药典收载正品石斛的代用品不
无道理。
　　致谢:中国药科大学中药学院徐珞珊教授帮助
完成了密花石斛药材的 DNA 鉴定。
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液相色谱/蒸发光散射测定四物汤煎液中单糖和双糖的含量
梁乾德,马百平, 王升启X
(军事医学科学院放射医学研究所, 北京　100850)
摘　要:目的　建立液相色谱/蒸发光散射( HPLC-ELSD)测定四物汤煎液中 D-果糖、D-葡萄糖和蔗糖含量的方
·395·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 4 期 2004年 4月
X 收稿日期: 2003-08-05基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30271617, 30070913 ) ;军队“十五”重点项目( 01Z019) ; 北京市“二四八”重大创新工程项目
( H010210220113)作者简介:梁乾德( 1971—) ,男, 吉林省农安县人, 军事医学科学院助理研究员,博士, 1994年毕业于北京中医药大学中药系, 2000年、
2003年获得军事医学科学院药物分析学硕士、博士学位,主要从事中药现代化基础研究。
Tel: ( 010) 66931423　E-mail : lqd@nic. bmi. ac. cn
* 通讯作者　Tel: ( 010) 66932211　Fax: ( 010) 66932211　E-mail: sqwang@nic. bmi . ac. cn
法。方法　对四物汤煎液进行稀释、醇沉等处理后采用HPLC-ELSD 法分析。结果　1 mL 四物汤煎液中含 D-果糖
( 33. 4±1. 5) mg,D-葡萄糖( 24. 2±0. 9) mg, 蔗糖( 112. 7±6. 1) mg;D-果糖在 0. 15～3. 75 mg/ mL, D-葡萄糖和蔗
糖在 0. 15～5 mg/ mL,具有良好的线性关系;回收率为 D-果糖 128. 5% , D-葡萄糖 114. 7% , 蔗糖 124. 7% ;日内
RSD 为 D-果糖 3. 0% ,D-葡萄糖 3. 2% , 蔗糖 4. 4%。结论　四物汤中含有丰富的单、双糖; HPLC-ELSD 可用于四
物汤中单、双糖类物质的分析。
关键词:四物汤;糖;含量测定;液相色谱;蒸发光散射检测器
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2004) 04 0395 03
Determination of monosaccar ide and disaccaride in condensed
Siwu Decoct ion by HPLC-ELSD
LIANG Qian-de, MA Bai-ping, WANG Sheng-qi
( Instit ut e of Radiat ion Medicine, Acadamy of Milit ary Medical Sciences, Beijing, 100850, China)
Abstr act: Object　To establ ish a method by high performance liquid chromatography/ evapor at ive
light scat tering detector (HPLC-ELSD) for the determinat ion of contents of D-fructose, D-glucose, and
sucr ose in Siwu Decoct ion ( SWD) . Methods　Condensed SWD was analyzed by HPLC-ELSD after dilu-
tion, precipitation by ethanol. Results　Condensed SWD, 1 mL, contained ( 33. 4±1. 5) mg of D-fruc-
tose, ( 24. 2±0. 9) mg of D-glucose and ( 112. 7±6. 1) mg of sucrose. The standard curves were linear
within the range of 0. 15—3. 75 mg/ mL for D-fructose and 0. 15—5 mg/ mL for D-glucose and sucrose.
The recover y rates wer e 128. 5% for D-fructose, 114. 7% for D-glucose, and 124. 7% for sucrose. T he
relative standard deviat ions ( RSD) within-days were 3. 0% for D-fr uctose, 3. 2% for D-glucose, and
4. 4% for sucrose. Conclusion 　SWD contains abundant monosaccharide and disaccharide. HPLC-ELSD
can be used to analyse the monosaccharide and disaccharide in SWD.
Key wor ds : Siwu Decoct ion ( SWD) ; saccharide; determinat ion; HPLC; ELSD
　　四物汤是补血常用方剂, 现代研究显示其具有
促进机体造血功能的作用[ 1]。四物汤中单、双糖类物
质具有一定的促进血虚模型小鼠造血功能的作用,
并且这些单、双糖主要由 D -果糖、D-葡萄糖和蔗糖
组成[ 2]。为了深入研究四物汤的药效成分, 需要测定
这 3种糖在四物汤煎液中的含量。单、双糖类物质的
含量测定通常采用高效液相色谱(HPLC)连接示差
折光检测器 (RID, refract ive index detector )的方
法,但是该方法具有灵敏度较低、不能用于梯度洗脱
等不足[ 3]。蒸发光散射检测器 ( evaporat ive light
scattering detector, ELSD)作为新一代通用型检测
器,具有灵敏度高、可进行梯度洗脱等优点。目前对
中药水煎液中单、双糖含量测定的方法报道较少。本
实验采用 HPLC-ELSD 建立了四物汤浓煎液中 D -
果糖、D-葡萄糖和蔗糖的含量测定方法。
1　仪器与试药
高效液相色谱系统: Waters 2695(包括泵和自
动进样器等,美国) , Alltech ELSD2000蒸发光散射
检测器(美国) , 色谱工作软件为 Waters Empower
Pro, Millipore超纯水系统(美国)。
　　对照品 D-葡萄糖、蔗糖为分析纯, D-果糖为生
化试剂, HPLC流动相使用色谱纯乙腈和Milipore
超纯水,其他试剂均为分析纯。两批四物汤药材饮片
均购于北京同仁堂药店, 经军事医学科学院马百平
副研究员鉴定分别为玄参科植物地黄 Rehmannia
glut inosa Libosch. , 伞形科 植物 当归 Angelica
sinensis (Ol iv. ) Diels, 川芎 Ligusticum chuanxiong
Hort . , 毛茛科芍药 P aeonia lact if lor a Pall . 的根及
根茎加工而成。
2　方法与结果
2. 1　HPLC-ELSD 分析条件: 色谱柱为 Zorbax
Carbohydrate 柱( 250 mm×4. 6 mm, 5 Lm) , 保护柱
为 Zorbax NH2 柱( 12. 5 mm×4. 6 mm, 5 Lm) , 流
动相为乙腈-水( 75∶25) , 流速为 1 mL/ min, ELSD
检测器温度为 100 ℃,气流速度为 2. 4 L/ min。色谱
图见图 1。
2. 2　四物汤煎液的制备:取四物汤生药 200 g(其中
熟地 73. 2 g, 当归 48. 8 g,白芍 48. 8 g, 川芎 29. 3
g) , 加 1 600 mL水常温浸泡 1 h,煎 30 min, 三层纱
布滤出药液后,再加 1 200 mL 水, 煎 20 min, 滤过
后将两煎药液合并, 60℃浓缩至 200 mL,得四物汤
煎液。
2. 3　供试品溶液的制备:取四物汤煎液 1 mL, 加水
稀释至 100 mL,逐滴缓慢地加入乙醇 400 mL,抽滤
除去沉淀,溶液浓缩至约 1 mL, 用 50%乙醇溶液定
容至 25 mL 量瓶,经 0. 45 Lm微孔滤膜滤过后用于
·396· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 4 期 2004年 4月
a-D-果糖　b-D-葡萄糖　c-蔗糖
a-D-fructos e　b -D-glucose　c-sucrose
图 1　混合对照品(A)和四物汤煎液(B)的 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromatograms of mixed ref er ence
substances (A) and SWD ( B)
分析。
2. 4　标准曲线制备:精密称取D -果糖、D-葡萄糖和
蔗糖对照品各 500 mg(实际称量值为 D-果糖488. 6
mg、D-葡萄糖 482. 1 mg和蔗糖 471. 7 mg) ,以 50%
乙醇溶液溶解定容于 50 mL 量瓶,得各糖浓度为 10
mg/ mL 的对照品溶液。对此溶液进行稀释得到各
糖浓度为0. 15, 1, 1. 25, 2, 2. 5, 3, 3. 75, 5 mg/ mL的
溶液 (实际浓度按相应比例计算) , D-果糖进样
0. 15, 1, 2, 3, 3. 75 mg/ mL 对照品溶液各 10 LL, D -
葡萄糖和蔗糖进样 0. 15, 1. 25, 2. 5, 3. 75, 5 mg/ mL
的对照品溶液各 10 LL,以浓度和峰面积为横纵坐
标绘制标准曲线。结果表明, D -果糖在 0. 15～3. 75
mg/ mL, D -葡萄糖和蔗糖在 0. 15～5 mg/ mL,峰面
积与浓度呈良好的线性关系, 回归方程和相关系数
分别为 D -果糖: C= 1. 515 2×10- 7A+ 0. 022 74,
r= 0. 999 96; D-葡萄糖: C = 1. 679 5×10- 7A +
0. 072 26, r= 0. 999 87;蔗糖: C= 1. 424 2×10- 7
A+ 0. 022 99, r= 0. 999 84。
2. 5　回收率和精密度考察:取 5份四物汤煎液各 1
mL, 每份加入 D-果糖 20 mg、D-葡萄糖 13 mg、蔗
糖 50 mg,混匀后按供试品溶液制备方法制备供试
品溶液,稀释一倍后进样 10 LL, 按标准曲线方程计
算 D-果糖、D-葡萄糖和蔗糖含量, 另取 5份四物汤
煎液直接测定含量。将二者含量差值除以加入糖的
量,计算回收率, 得回收率及其 RSD 分别为 D-果
糖: 128. 5% , 12. 6% ; D-葡萄糖: 114. 7%, 11. 9%;
蔗糖: 124. 7% , 7. 1%。同时用这 5份样品测得的含
量计算精密度,得日内 RSD 分析为D -果糖 3. 0%,
D -葡萄糖 3. 2% ,蔗糖 4. 4%。
2. 6　样品含量测定:将两批四物汤煎液(药材批号
001101和 010619)按供试品溶液制备方法各制备 5
份供试品溶液,稀释一倍后进样 10 LL,按标准曲线
方程计算 D-果糖、D-葡萄糖和蔗糖含量,结果见表
1。可见由两批药材所制备的四物汤煎液中各糖的比
例相近。
表 1　两批药材制备的四物汤浓煎液中单、
双糖的含量测定结果 (n= 5)
Table 1　Determination r esults of mono-and disaccar ides
in condensed SWD from two batches of Chinese
medicina l ma terials (n= 5)
批　号 D-果糖
/ ( mg·mL- 1)
D -葡萄糖
/ ( mg·mL- 1)
蔗糖
/ ( mg·mL - 1)
001101 33. 4±1. 5 24. 2±0. 9 112. 7±6. 1
010619 48. 8±1. 5 35. 4±1. 1 110. 2±4. 9
3　讨论
　　四物汤水煎液成分复杂, 将水煎液稀释后进行
80%乙醇沉淀, 可以去除保留时间较长的大分子糖
类物质以及蛋白质、黏液质等,这样的样品前处理方
法比较简便、实用。本方法中单、双糖的保留时间和
峰面积对环境温度比较敏感, 宜使用柱温箱。本实验
中未使用柱温箱,对方法的回收率有一定影响。
　　蒸发光散射检测器灵敏度远远高于示差折光检
测器,使用的样品很少,并且能避免大量进样对分离
效果的不利影响,是一种实用的糖类检测手段。
　　从测定结果看出,四物汤水煎液中含有丰富的
单、双糖,其中蔗糖含量特别高,占四物汤生药质量
的1/ 10以上。这些数据对于探讨四物汤补血作用的
物质基础具有参考价值。
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