全 文 ：HPLC测定不同产地功劳木中盐酸巴马亭及盐酸小檗碱的含量
黄　捷 ,桑　彤 ,覃红萍
(广西药品检验所 ,广西 南宁　 530021)
摘　要: 目的　建立测定功劳木中盐酸巴马亭及盐酸小檗碱的含量的方法。 方法　 HPLC法 ,采用 Inter sil ODS-3
C18柱 ,乙腈-水 -十二烷基磺酸钠 ( 470∶ 530∶ 1 g )为流动相 ,检测波长为 265 nm,柱温 40℃ ,流速为 1. 0 m L /min。
结果　盐酸巴马亭在 4. 368～ 52. 416μg /m L范围内线性关系良好 (r= 0. 999 9) ,平均回收率为 98. 97% ;盐酸小檗
碱在 4. 532～ 54. 384μg /m L范围内线性关系良好 ( r= 0. 999 9) ,平均回收率为 98. 98%。结论　该法简便、快速、重
现性好 ,适用于功劳木中盐酸巴马亭及盐酸小檗碱的定量分析。
关键词: 功劳木 ;盐酸巴马亭 ;盐酸小檗碱 ; HPLC法
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 06 0503 02
Determination of palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride
inChinese Mahonia Stem from different habitats by HPLC
HUANG Jie, SAN G Tong, Q IN Hong-ping
( Guangx i Institute fo r Drug Cont rol, Nanning Guangxi 530021, China )
Abstract: Object　 To develop a method for the determina tion o f palmatine hydrochloride and berber-
ine hydrochlo ride in Chinese Mahonia Stem from di fferent habi ta ts. Methods　 HPLC method w as set up,
using Intersil ODS-3 C18 column, th e mobile phase w as acetont rile-w ater-sodium laurylsulfonate ( 470∶ 530
∶ 1 g ) , the UV detection waveleng th w as 265 nm, wi th a flow rate of 1. 0 m L /min at 40℃ . Results　 A
good linea ri ty was obtained in the range o f 4. 368-52. 416μg /mL(r= 0. 999 9) fo r palmatine hydrochlo ride
and 4. 532-54. 384μg /mL ( r= 0. 999 9) fo r berberine hydrochlo ride. The average recovery of palmatine
hydrochloride and berberine hydrochlo ride w as 98. 97% and 98. 98% , respectively. Conclusion 　 The
method is simple, rapid and wi th bet ter reproducibi li ty fo r the determination of palmatine hydrochlo ride
and berberine hydrochlo ride in Chinese Mahonia Stem .
Key words: Chinese Mahonia Stem ; palmatine hydrochloride; berberine hydrochlo ride; HPLC
　　功劳木是小檗科植物阔叶十大功劳 Mahonia
bealei ( Fo rt. ) Carr. 或细叶十大功劳 M. fortunei
( Lindl. ) Frdde的干燥茎。功劳木中小檗碱原型生
物碱为盐酸巴马亭、盐酸小檗碱以及药根碱 [1 ]。 《中
华人民共和国药典》 2000年版一部中其含量检测方
法是采用紫外分光光度法 ,以盐酸小檗碱计总生物
碱的含量。 本研究采用 RP-HPLC法对不同产地功
劳木中盐酸巴马亭及盐酸小檗碱的含量进行测定 ,
方法简便、快速、重现性好 ,能较好地控制其质量。
1　仪器与试药
美国 Tsp公司 P4000泵 , UV 6000LP二极管阵
列检测器 , AS1000自动进样器 , SN 4000系统控
制器。
盐酸巴马亭及盐酸小檗碱对照品由中国药品生
物制品检定所提供 ,盐酸巴马亭纯度为 99. 37% (批
号: 0732-9604) ,盐酸小檗碱纯度为 99. 31% (批号:
713-9906)。功劳木药材 12份 ,经本所韦家福主管药
师鉴定。 乙腈为色谱纯 ,水为高纯水 ,十二烷基磺酸
钠为分析纯 ,其它试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱 Inertsi l ODS-3柱 ( 5μm,
4. 6 mm× 250mm) ;流动相:乙腈 -水 -十二烷基磺酸
钠 ( 470∶ 530∶ 1 g ) ;流速: 1. 0 mL /min;检测波长:
265 nm;柱温: 40℃ ;外标峰面积法定量。对照品及
样品色谱图见图 1。
2. 2　供试品溶液及对照品溶液的制备
2. 2. 1　供试品溶液的制备:取本品粉末 (过三号筛 )
约 0. 25 g ,置 50 mL量瓶中 ,精密称定 ,加入盐酸-
甲醇 ( 1∶ 100)混合溶液 48 mL,于 55℃水浴中加热
15 min,取出 ,放冷 ,超声提取 45 min,放至室温 ,加
盐酸 -甲醇 ( 1∶ 100)溶液至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,弃去初
滤液 ,精密量取续滤液 5 mL,蒸干 ,残渣用乙腈 -水
·503·中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2002年第 33卷第 6期
收稿日期: 2001-10-08
A-对照品　 B-样品　 1-盐酸巴马亭　 2-盐酸小檗碱
图 1　功劳木 HPLC图
( 1∶ 1)溶解 ,转移至 5 mL量瓶中并稀释至刻度 ,摇
匀 ,滤过 ,取滤液 ,即得。
2. 2. 2　对照品溶液的制备: 精密称取盐酸巴马亭、
盐酸小檗碱对照品适量 ,分别加乙腈-水 ( 1∶ 1)制成
15μg /mL的对照品溶液。
2. 3　线性关系的考察:分别精密称取盐酸巴马亭、
盐酸小檗碱对照品约 12mg,置于 25 mL量瓶中 ,加
乙腈-水 ( 1∶ 1)溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,备用。分别
精密吸取以上 2种对照品溶液各 0. 1, 0. 2, 0. 4,
0. 8, 1. 2 mL置 10mL量瓶中 ,加乙腈 -水 ( 1∶ 1)稀
释至刻度 ,摇匀 ,进样测定。以峰面积积分值为坐标 ,对
照品浓度为坐标绘制标准曲线 ,盐酸巴马亭回归方程
为: Y= 4. 348 5× 10- 6X - 2. 601 1, r= 0. 999 9,线
性范围为 4. 368～ 52. 416μg /mL。盐酸小檗碱回归方
程为: Y= 4. 095 5× 10- 6X - 1. 709 8, r= 0. 999 9,
线性范围为 4. 532～ 54. 384μg /m L。
2. 4　精密度试验: 对同一供试品溶液 ,连续进样 5
次 ,结果盐酸巴马亭及盐酸小檗碱含量的 RSD分
别为 0. 34% , 0. 30% (n= 5)。
2. 5　重复性试验: 测定同批样品 5份 ,结果盐酸巴
马亭及盐酸小檗碱含量的 RSD分别为 0. 78% ,
1. 79% (n= 5)。
2. 6　稳定性试验: 对同一供试品溶液 ,每隔 2 h测
定 1次 ,共测定 7次 ,结果盐酸巴马亭含量 RSD=
0. 43% (n= 7) ,盐酸小檗碱含量的 RSD= 0. 25%
(n= 7)。表明在 12 h内基本稳定。
2. 7　加样回收率试验:精密称取已知含量的功劳木
药材适量 ,分别精密加入一定量的盐酸巴马亭及盐
酸小檗碱对照品 ,结果盐酸巴马亭的平均回收率为
9 9. 97% ,RSD= 0. 83% (n= 5) ;盐酸小檗碱的平均
回收率为 98. 98% , RSD= 1. 63% (n= 5)。
2. 8　样品测定:分别精密吸取对照品溶液和供试品
溶液各 10μL,进样 ,测定并计算 ,测定了 12批样
品 ,结果盐酸巴马亭含量在 0. 262% ～ 1. 027% ,盐
酸小 檗碱 含量 在 0. 145% ～ 1. 805% , 总量 在
0. 610%～ 2. 530% (见表 1)。
表 1　样品测定结果 (% ,n= 2)
编号 药材来源 巴马亭含量 小檗碱含量 总量
1 广西贺县 0. 539 0. 286 0. 825
2 浙江金华 0. 748 0. 286 0. 925
3 广西南宁 0. 318 0. 177 0. 610
4 广西岑溪 1. 027 0. 293 1. 388
5 广西桂平 0. 529 0. 361 1. 102
6 广西邕宁 0. 725 1. 805 2. 530
7 广西百色 0. 262 0. 554 0. 816
8 广西上思 0. 332 0. 305 0. 637
9 广西桂林 0. 561 0. 509 1. 070
10 广西柳江 0. 488 0. 329 0. 816
11 广西平乐 0. 541 0. 145 0. 686
12 广西梧州 0. 642 0. 473 1. 115
3　讨论
3. 1　本研究建立了功劳木中 2种主要生物碱的
HPLC含量测定方法 ,因其主要成分盐酸巴马亭及
盐酸小檗碱结构相似 ,在一般的液相色谱仪中难以
达到基线分离 ,经参考有关文献 [2 ] ,加入离子对试剂
十二烷基磺酸钠 ,以离子对色谱进行分离 ,从而达到
较好的分离效果。以盐酸巴马亭峰计 ,在塔板数为 4
000时 ,盐酸巴马亭及盐酸小檗碱两峰的分离度为
1. 6。 用二极管阵列检测器对样品峰进行检测 ,无杂
质干扰。
3. 2　提取条件的条件:在提取方法上对加热回流及
超声提取进行了筛选 ,加热回流采用水浴中回流
30, 60 min的方法 ,超声提取采用 55℃水浴中加热
后再超声处理 15, 30, 45, 60 min的方法 ,结果显示
55℃水浴中加热 15 min后再超声处理 45 min提取
效率最佳。
3. 3　本研究测定了 12批次样品 ,由于产地和采收
时间不同 ,盐酸巴马亭和盐酸小檗碱含量差异较大 ,
尤其是盐 酸小檗碱。 但 其总量在 0. 610% ～
2. 253% ,差异相对较小。
参考文献:
[ 1 ]　国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 中华本草 (第三册 )
[M ]. 上海:上海科学技术出版社 , 1999.
[2 ]　原田正敏 .繁用生药の成分定量 [M ]. 东京:广川书店 , 1989.
·504· 中草药　 Ch inese Tradi tional and Herbal Drugs　 2002年第 33卷第 6期