全 文 ：[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ √¨¯²³¤ °2 °≤ ° ·¨«²§·² §¨ ·¨µ°¬±¨³¯∏°¥¤ª¬± ¬± Πλυµ βαγο ζεψλανιχαo¤±§·²¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ¦²±2
·¨±·¶²©³¯∏°¥¤ª¬± ¬± §¬©©¨µ¨±·³¤µ·¶²©q Π1ζεψλανιχαq Μετηοδ : ׫¨ ¤±¤¯¼¶¬¶º¤¶¦¤µµ¬¨§²∏·¤·vs ε ²± ¤µ²°¤¶¬¯≤t{ ¦²¯∏°± ¨¯∏·¨§
º¬·«¤°²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ¦²±¶¬¶·¬±ª²©¤°¬¬·∏µ¨ ²©° ·¨«¤±²¯ 2º¤·¨µkyxΒ vxlq ׫¨ ©¯²º µ¤·¨º¤¶t °# °¬±pt o ·«¨ §¨ ·¨¦·²µº¤√¨¯ ±¨ª·«º¤¶
utv ±°q Ρ εσυλτ: ׫¨ ¦¤¯¬¥µ¤·¬²± ¦∏µ√¨º¤¶ ¬¯± ¤¨µº¬·«¬± ·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± µ¤±ª¨ ¶²©s1sus {2s1tsw Λªkρ s1||| |lq ׫¨ ¤√ µ¨¤ª¨
µ¨¦²√ µ¨¼ º¤¶|{1zh q ׫¨ ¦²±·¨±·¶¬± ·«¨ µ²²·o ¶·¨° ¤±§¯¨ ¤©º µ¨¨ s1v|w xh os1sxs {h os1svt wh µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q Χονχλυσιον: ׫¬¶
° ·¨«²§¬¶¶¬°³¯ o¨¤¦¦∏µ¤·¨oµ¨³¯¬¦¤·¨ ¤±§¶∏¬·¤¥¯¨©²µ·«¨ §¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©³¯∏°¥¤ª¬± ¬± Π1ζεψλανιχαq
[ Κεψ ωορδσ] Πλυµ βαγο ζεψλανιχα~ ³¯∏°¥¤ª¬±~ ¤¶¶¤¼~ °2 °≤ ≈责任编辑 张宁宁
≈收稿日期 ussx2st2ts
≈基金项目 湖南省卫生厅中医药科技基金 kuutustl
≈通讯作者 3 李新中 oר¯}kszvtlwvuzwxwo∞2°¤¬¯} ¬¼¯ ¬¬¬±
° §¨°¤¬¯1¦²°1¦±
多波长高效液相色谱法同时测定
黄连解毒汤中 v类成分
李新中 3 o雷 鹏 o刘 韶
k中南大学 湘雅医院 o湖南 长沙 wtsss{l
≈摘要 目的 }同时测定黄连解毒汤中 v类有效成分 k盐酸小檗碱 !盐酸巴马亭 !盐酸药根碱 !黄芩苷 !栀子苷 l
的含量 ∀方法 }三波长同时检测的高效液相色谱法 ~ ⁄¬¤°²±¶¬¯ ≤t{色谱柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°l~流动相水 2甲
醇 2s1sxh磷酸 k梯度洗脱 l~柱温 vx ε ~流速 t °# °¬±pt ~检测波长 vwxou{souv{ ±°∀结果 }建立了同时对黄连解
毒汤中的 x个成分进行定量的测定方法 o本法快速 !重复性好 !灵敏度高 ∀结论 }为黄连解毒汤提供了更合理 !可靠
的质控方法 ∀
≈关键词 高效液相色谱法 ~黄连解毒汤 ~盐酸小檗碱 ~盐酸巴马亭 ~盐酸药根碱 ~黄芩苷 ~栀子苷
≈中图分类号 u{w1t ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylus2ty{y2sv
黄连解毒汤原载于唐 # 5外台秘要 6o由黄连 !
黄芩 !黄柏和栀子组成 o为清热解毒的代表方 ∀运用
高效液相色谱法研究黄连解毒汤化学成分的文献已
有不少 o但绝大部分只对其中的单一成分 k如盐酸
小檗碱 l进行定量测定 ≈t o小部分对多种黄连生物
碱类物质进行了定量分析 ≈u o至今未见运用 °≤
对其中 v类成分进行同时测定的文献报道 ∀现代药
理实验表明 o仅将盐酸小檗碱作为黄连解毒汤的质
控指标是不够的 o很有必要将其中生物碱 !黄酮类 !
环烯醚萜苷类物质的测定纳入到质控标准中 ≈v ∀
本研究应用二极管阵列检测器 k⁄⁄lo根据黄连解
毒汤中 v类组分不同的光谱特性 o建立了在 v个紫
外检测波长下 o同时测定其中 v类组分 kx个成分 l
含量的方法 o并将本方法运用于不同厂家配方颗粒
制备的黄连解毒汤中各成分的测定 ∀
1 仪器与试药
ª¬¯¨ ±·ttss高效液相色谱仪 ≈ktvtt四元
梯度泵 ! tvtv 自动进样器 ! tvtt 柱温箱 !
tvtx二极管阵列检测器 l k美国惠普公司 l ~
u{x分析天平 k德国梅特勒公司 l~≥ p yss⁄超
声清洗机 k宁波科生仪器厂 l∀
盐酸小檗碱 !盐酸药根碱 !黄芩苷 !栀子苷对照
品 k中国药品生物制品检定所 o批号分别为 sztv2
||syoszvv2usssswosztx2||s|ozw|2ussts{lo盐酸巴
马亭 k自制 o归一法计算含量大于 |{h l~甲醇 k色谱
纯 l o其他试剂分析纯 o流动相用水为重蒸馏水 ~黄
连 !黄柏 !黄芩 !栀子药材 k湖南省药材公司提供 o由
中南大学湘雅医院药剂科李新中教授鉴定 l~黄连 !
黄柏 !黄芩 !栀子配方颗粒 k分别由江阴天江药业有
限公司 !广东一方药业有限公司 !四川天绿药业科技
发展股份有限公司 !三九药业有限公司提供 l∀
2 方法与结果
#y{yt#
第 vt卷第 us期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto¶¶∏¨ us
¦·²¥¨ µoussy
211 色谱条件 ⁄¬¤°²±¶¬¯× ≤t{色谱柱 kw1y °° ≅
uxs °°o x Λ°l~流动相 水 2
甲醇 2 ≤ s1sxh磷
酸 k梯度洗脱 l~检测波长 vwxou{souv{ ±°~柱温 vx
ε ~流速 t °# °¬±pt ~进样量 ts Λ∀线性梯度洗
脱时间程序见表 to分析时间为 ux °¬±∀理论塔板
数按盐酸小檗碱峰 !巴马亭 !药根碱 !黄芩苷 !栀子苷
计算均不低于 t万 o在上述色谱条件下 o对照品和样
品的色谱图见图 t∀
表 t 梯度洗脱程序
τr°¬± rh
rh ≤ rh
s wx ux vs
ts vs ws vs
tx s {s us
us s |s ts
图 t 黄连解毒汤 °≤图
q对照品 ~
q样品 ~t盐酸小檗碱 ~
u1盐酸巴马亭 ~v1盐酸药根碱 ~w1黄芩苷 ~x1栀子苷
212 对照品溶液的制备及线性关系考察 精密称
取盐酸小檗碱 !盐酸巴马亭 !盐酸药根碱 !黄芩苷 !栀
子苷对照品适量 o加甲醇溶解定容 o配制成 s1ty{o
s1szuos1tswos1vswos1uvu °ª# °pt的混合对照品
储备液 o将上述对照品溶液制成一系列不同质量浓
度的对照品溶液 o以峰面积对进样量作线性回归 o得
各组分的线性范围和回归方程 o见表 u∀
表 u 线性关系试验结果 kν yl
对照品 线性范围 rΛª 回归方程 ρ
盐酸小檗碱 s1tsx ∗ t1y{s Ψ s1uyu Ξ n {1s|w s1||| |
盐酸巴马亭 s1swx ∗ s1zus Ψ s1uzw Ξ n s1|wz s1||| {
盐酸药根碱 s1syx ∗ t1sws Ψ s1uxx Ξ n v1w|s s1||| z
黄芩苷 s1t|s ∗ v1sws Ψ s1yzw Ξ p tw1uzt s1||| |
栀子苷 s1twx ∗ u1vus Ψ s1vsv Ξ p z1xut s1||| |
213 黄连解毒汤的制备 称取黄连 | ªo黄柏 y ªo
黄芩 y ªo栀子 | ªo加入水 uws °浸泡 us °¬±o煎煮
vs °¬±o滤过 o滤渣加水 t{s °o煎煮 vs °¬±o滤过 o
合并 u次滤液 o调整体积至 uxs °o即得黄连解毒
汤饮片汤剂 ∀
称取与药材相当量的黄连 !黄柏 !黄芩 !栀子配方
颗粒 o混合 o加入 tss ε 左右的水 uss °搅拌溶解 o冷
后定容至 uxs °o即得黄连解毒汤配方颗粒汤剂 ∀
214 供试品溶液的制备 精密吸取黄连解毒汤
t1s °o置于 ts °量瓶中 o加甲醇 { °o超声振荡
vs °¬±o室温放置 vs °¬±o加甲醇至刻度 o摇匀 o滤
过 o续滤液用 s1wx Λ°滤膜滤过 o即得 ∀
215 精密度试验 吸取对照品溶液 ts Λo连续进
样 x次 o测定峰面积 o计算 o ≥⁄ uh o结果见表 v∀
216 稳定性考察 取同一供试品溶液 o按上述色谱
条件分别在 souowo{otu «进样 ts Λo测定峰面积 o
计算 o ≥⁄ uh o表明供试品溶液在 s ∗ tu «内
稳定性良好 ∀
217 重复性试验 取同一汤剂样品 x份 o按供试品
溶液制备方法项下操作 o平行制备 x份 o按上述色谱
条件测定峰面积 o计算 o ≥⁄ uh o精密度 !稳定性 !
重复性结果见表 v∀
表 v 精密度 !稳定性 !重复性的 ≥⁄kν xl h
测定成分 精密度 稳定性 重复性
盐酸小檗碱 s1uy s1vv s1|u
盐酸巴马亭 s1vs s1uz t1ut
盐酸药根碱 s1uy s1yy t1xz
黄芩苷 s1ux s1u{ t1wx
栀子苷 s1us s1v| s1z|
218 加样回收率 取已知含量黄连解毒汤 x份 o每
份 t1s °o分别添加 s1ty{os1szuos1tswos1uvuo
s1vsw °ª# °pt的盐酸小檗碱 !盐酸巴马亭 !盐酸
药根碱 !黄芩苷 !栀子苷对照品溶液 x °o按 214项
下供试品溶液制备方法制备并测定 o计算 o见表 w∀
表 w x种成分加样回收率 kν xl
测定成分
样品中含量
r°ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
平均回收率
rh
≥⁄
rh
盐酸小檗碱 s1||u s1{ws t1{t{ |{1vv t1u{
盐酸巴马亭 s1u|z s1vys s1ywz |z1uu t1yt
盐酸药根碱 s1uwu s1xus s1zx{ ||1uv t1tz
黄芩苷 t1w{y t1xus u1|{{ |{1{u t1vx
栀子苷 t1s|z t1tys u1uw| ||1vt t1{w
219 样品测定 精密吸取对照品溶液与样品溶液
各 ts Λo按上述色谱条件测定 o并计算各样品中盐
酸小檗碱 !盐酸巴马亭 !盐酸药根碱 !黄芩苷 !栀子苷
的含量 ∀结果见表 x∀
3 讨论
对检测波长的选择 o通过 ⁄⁄在 uss ∗ yss ±°
波长扫描 o结果表明生物碱类在 vwx ±°处有最大吸
收 o黄酮类在 u{s ±°处有最大吸收 o栀子苷在 uv{
#z{yt#
第 vt卷第 us期
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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±°处有最大吸收 ∀为了使各组分达到吸收强 !干扰
表 x 黄连解毒汤中各成分测定结果 kν vl °ªr剂
样品 小檗碱 巴马亭 药根碱 黄芩苷 栀子苷
饮片汤剂 t uw{1t zw1u ys1x vzw1t uzw1v
饮片汤剂 u uvw1y xu1{ vs1u vy|1y ux|1u
饮片汤剂 v uuy1w vw1t t|1x u|v1y t{v1y
饮片汤剂 w t{w1z yy1v {y1t twz1u tv{1v
颗粒汤剂 t u{s1w tss1t xu1y uwt1w txw1v
颗粒汤剂 u twy1| ww1t ux1t tss1y ys1x
颗粒汤剂 v zy1{ v1w t|1u |t1w t{s1{
颗粒汤剂 w |v1u tt1u uz1u tw{1u yv1u
小的目的 o选择在 vwx ±°测定盐酸小檗碱 !盐酸巴
马亭 !盐酸药根碱 o选择在 u{s ±°测定黄芩苷 o选择
在 uv{ ±°测定栀子苷 ∀
通过对多批黄连解毒汤饮片汤剂 !配方颗粒汤剂
中 x个主要成分的含量测定 o发现盐酸小檗碱 !盐酸
巴马亭 !盐酸药根碱 !黄芩苷 !栀子苷的含量差异较
大 o有的成分含量相差数十倍 o样品如此大的含量差
异是否会造成临床用药剂量无法把握应予以考虑 ∀
由传统饮片煎煮的汤剂由于药材来源 !个人的习惯 !
对火候的掌握及加水量的多少等诸多因素影响 o导致
有效成分的含量差异较大 o疗效不确切 ~而不同厂家
生产的配方颗粒之间的差异 o可能是各厂家使用的原
料药材不同 !生产工艺不同等因素所造成 ∀
≈参考文献
≈t 姚国新 o张晓燕 o朱美艳 1高效液相色谱法测定黄连解毒汤中
小檗碱的含量 ≈ 1时珍国医国药 oussuotvkxl}uzy1
≈u 洪筱坤 o王 凌 o王智华 1黄连解毒汤中生物碱的多组分分析
研究 ≈ 1上海中医药大学学报 ot|||otvkul}xt1
≈v 陈光亮 o张秀荣 o王 钦 1黄连解毒汤药理研究进展 ≈ 1安徽
中医学院学报 ousstouskxl}yz1
∆ετερµ ινατιον οφv κινδσ οφ χοµ πονεντσ ιν Ηυανγλιαν ϑιεδυ δεχοχτιον
βψ ΗΠΛΧ υνδερ διφφερεντ Υς ωαϖελενγτησ
÷¬±2½«²±ªo ∞° ±¨ªo ≥«¤²
(∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχψ οφ Ξιανγψα Ηοσπιταλ, ΧεντραλΣουτη Υνιϖερσιτψ, Χηανγσηα wtsss{, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ ·¨µ°¬±¤·¨ v ®¬±§¶²© ©¨©¨¦·¬√¨¦²°³²± ±¨·¶kx ¦²°³²∏±§¶l ¬± ∏¤±ª¯¬¤± ¬¨§∏ §¨ ¦²¦·¬²± ¤··«¨
¶¤°¨·¬° o¨ ±¤°¨¯¼ ¥¨ µ¥¨ µ¬± o¨ ³¤¯°·¬± o¨ ¤·µ²µµ«¬½¬± o¨ ¥¤¬¦¤¯¬± ¤±§ª¨ ±¬³²¶¬§¨ 1 Μετηοδ : °≤ ° ·¨«²§§¨ ·¨¦·¨§¥¼ v §¬©©¨µ¨±·∂
º¤√¨¯ ±¨ª·«¶vwx ±° ©²µ¥¨ µ¥¨ µ¬± o¨ ³¤¯°·¬±¨¤±§¤·µ²µµ«¬½¬± o¨ u{s ±° ©²µ¥¤¬¦¤¯¬±o uv{ ±° ©²µª¨ ±¬³²¶¬§¨ 1 ⁄¬¤°²±¶¬¯≤t{ kw1y °° ≅
uxs °°o x Λ°l ¦²¯∏°± º¤¶∏¶¨§o ·«¨ °¬¬·∏µ¨ ²©u klo ≤v k
l ¤±§s1sxh v °w ¶²¯∏·¬²± k≤l ¤¶°²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ¬± ªµ¤§¬2
±¨·°²§¨ 1 ׫¨ ¦²¯∏°± ·¨°³¨ µ¤·∏µ¨ º¤¶vx ε ¤±§·«¨ ©¯²º µ¤·¨ º¤¶t °# °¬±pt 1 Ρ εσυλτ: ׫¬¶° ·¨«²§º¤¶¤³³¯¬¨§·² §¨ ·¨µ°¬± §¨x
¦²°³²∏±§¶¬± ∏¤±ª¯¬¤± ¬¨§∏ §¨ ¦²¦·¬²± µ¤³¬§¯¼ ¤±§ ¤¦¦∏µ¤·¨¯¼1 Χονχλυσιον: ׫¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ° ·¨«²§¬¶¦²±√ ±¨¬¨±·o µ¨¤¶²±¤¥¯¨
¤±§¦µ¨§¬¥¯¨©²µ∏¤±ª¯¬¤± ¬¨§∏§¨ ¦²¦·¬²±1
[ Κεψ ωορδσ] °≤~ ∏¤±ª¯¬¤± ¬¨§∏§¨ ¦²¦·¬²±~ ¥¨ µ¥¨ µ¬± ~¨ ³¤¯°·¬± ~¨ ¤·µ²µµ«¬½¬± ~¨ ¥¤¬¦¤¯¬±~ ª¨ ±¬³²¶¬§¨
≈责任编辑 鲍 雷
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[ Αβστραχτ]
¤¶¨§²± ·«¨ ³µ²ªµ¨¶¶¬± ·«¨ º²µ¯§°¤µ®¨ ·²©§µ∏ª§¨ ¬¯√ µ¨¼ ¶¼¶·¨° k⁄⁄≥l ³µ²§∏¦·¤±§·«¨ µ¨¶¨¤µ¦«³µ²©¬¯¨ ²©⁄⁄≥
²©¦²°³²∏±§≤«¬± ¶¨¨ §¨¬¦¬± o¨ ׫¨ ¤µ·¬¦¯¨³∏·¶©²µº¤µ§¤± º¨ ° ·¨«²§²©¶·∏§¬¨¶²± ⁄⁄≥ ²©¦²°³²∏±§≤«¬± ¶¨¨ §¨¬¦¬± 1¨ ·¬¶ ¬¨³¨ ¦2
·¨§·«¤··«¨ ·«¨ ²µ¼ ²©¦²°³¤·¬¥¬¯¬·¼ ²©¦²°³²∏±§≤«¬± ¶¨¨ §¨¬¦¬±¨¦¤± ¥¨ ¶«²º± ¤±§¬·¶µ²¯¨¦¤± ¥¨ ¬¨¨ µ·¨§·²·«¨ ¤¯µª¨ ¶·¨¬·¨±·º¬·«·«¨
¤³³¯¬¦¤·¬²± ²©³«¤µ°¤¦¨∏·¬¦¶·¨¦«±²¯²ª¼ ·²¦«¤±ª¨ ·«¨ °²§¨ ²©§µ∏ª§¨ ¬¯√ µ¨¼ ²©¤¦·¬√¤·¨§¦²°³²± ±¨·¶²©¦²°³²∏±§≤«¬± ¶¨¨ §¨¬¦¬± 1¨
[ Κεψ ωορδσ] ⁄⁄≥ ²©¦²°³²∏±§≤«¬± ¶¨¨ ° §¨¬¦¬± ~¨ ¦²°³¤·¬¥¬¯¬·¼ ²©¦²°³²∏±§≤«¬± ¶¨¨ ° §¨¬¦¬± ~¨ §µ∏ª§¨ ¬¯√ µ¨¼ ∏±¬·~ °²§¨ ²©
§µ∏ª§¨ ¬¯√ µ¨¼
≈责任编辑 鲍 雷
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