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交泰丸方药 4种提取方法的比较研究
张学兰 1 ,李正杰 2
( 1. 山东中医药大学 ,山东 济南　 250014; 2. 河北以岭医药集团 ,河北 石家庄　 050091)
摘　要: 目的　优选交泰丸方药的提取工艺。方法　以小檗碱、肉桂酸、总生物碱 、挥发油、干浸膏为指标 ,在药材粒
度、溶剂量、煎提温度、滤过、浓缩等条件相同的前提下 ,对半仿生提取法 ( SBE法 )、水提取法 ( W E法 )、半仿生提取
醇沉法 ( SBAE法 )、水提取醇沉法 ( WAE法 )进行比较研究。 结果　 5个指标综合评价 Y值为: SBE法> WE法>
SBAE法 > W AE法。 结论　交泰丸方药的提取法以 SBE法为佳。
关键词: 交泰丸 ;提取方法 ;小檗碱 ;肉桂酸 ;总生物碱
中图分类号: R284. 02; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0895 04
Comparison of four extracting methods for Jiaotai Pill
*
ZHANG Xue-lan
1 , L I Zheng-jie
2
( 1. Shandong Univ er sity o f TCM , Jinan 250014, China; 2. Hebei Yiling
Pha rmaceutical Group, Shijia zhuang 050091, China)
Abstract: Object　 To evalua te the ex t racting techno logy o f Jiao tai Pi ll components. Methods　 Four
methods— the semi-bionic ex t raction ( SBE) , the w ater ex t raction ( WE) , the semi-bionic ex t raction by
precipi tation wi th alcohol ( SBAE) , and th e w ater ex t raction by precipitation w ith alcohol ( WAE) w ere
used to ex t ract Jiao tai Pill component , wi th berberine, cinnamic acid, to tal alkaloids, vo la tile oil and dried
ex t ract taken as the markers and to study the four methods under the same condi tions of drug g ranularity,
solvent amount , decocting temperature, fi lt ration, concentra tion, etc. Results　 The comprehensiv e values
Y were SBE> WE> SBAE> WAE. Conclusion　 SBE method is bet ter than the o ther three methods in the
ex t raction of Jiao tai Pi ll components.
Key words: Jiaotai Pill; ex tracting methods; berberine; cinnamic acid; to tal alkaloids
* Jiao tai Pil l is a Chinese prescription consisted of Rhizoma Copt idis andCortex Cinnamomi . It has the
function of co ordination betw een the hear t and the kidney.
　　交泰丸由黄连、肉桂组成 ,具有交通心肾的功
能。临床用于失眠、心律失常、口腔疾病等取得较好
效果 [1 ]。 为进一步探讨该方药采用半仿生提取
( SBE)法提取是否较目前普遍应用的提取方法为
佳 ,本实验根据 SBE法理论 [2 ] ,在优选出 SBE法提
取条件 [3 ]、药材组合方式及醇沉较佳浓度的基础上 ,
以小檗碱、肉桂酸、总生物碱、挥发油、干浸膏量为指
标 ,对该方药作 4种提取方法的比较研究。
1　仪器与药品
Beckman高效液相色谱仪 (美国贝克曼公司 ) ,
·895·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-12-18基金项目:山东省自然基金资助项目 ( Q00C05)作者简介:张学兰 ( 1963— ) ,女 ,山东蓬莱人 ,副教授 ,硕士生导师 ,主要从事中药制剂及炮制研究。
Tel: ( 0531) 8836297　 E-mai l: zh angxl2440@ 163. com
CS— 930型薄层扫描仪 (日本岛津 ) , UV— 754型紫
外可见分光光度计 (上海第二分析仪器厂 ) ,高效硅
胶 GF254薄层板 (青岛海洋化工厂 )。
药材经张兆旺鉴定 ,黄连为毛茛科植物黄连
Copt is chinensis Franch.的干燥根茎 ,肉桂为樟科植
物肉桂 Cinnamomum cassia Presl的干燥树皮。
盐酸小檗碱、肉桂酸对照品 (中国药品生物制品
检定所 ) ,乙腈、甲醇 (色谱纯 ) ,纯净水 ,其余试剂均
为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　提取液的制备
2. 1. 1　水提取 ( WE)液: 将处方药材分别粉碎 ,按
处方比例分别称取黄连 20目粗粉 54 g ,肉桂 20目
粗粉 36 g ,分别加水提取 3次 (黄连采用回流提取
法 ,肉桂采用双提法 ;加水量依次为药材量的 10, 8,
8倍 ;浸 0. 5 h;提取 170, 80, 40 min) ,分别滤过 ,
2 000 r /min离心 20 min,合并上清液 ,水浴浓缩并
定容至 400 mL(相当于原药材 0. 225 g /mL)。
2. 1. 2　水提取醇沉 ( WAE)液: 取 WE液 200 mL,
水浴浓缩至 100 mL,加入 95%乙醇 ,调至醇体积分
数为 70% ,冷藏放置 12 h, 2 000 r /min离心 20
min,上清液回收乙醇 ,定容至 200 mL。
2. 1. 3　 SBE液:按 2. 1. 1项下方法 ,只将第一煎用
水以 0. 1 mo l /L HCl调至 pH 2. 20,第二、三煎用水
依次以 0. 1 mol /L NaOH调至 pH 6. 50和 pH
8. 70,依法制得。
2. 1. 4　半仿生提取醇沉 ( SBAE)液:取 SBE液 200
m L,按 2. 1. 2项下方法依法制得。
2. 2　供试液的制备:取 2. 1项下提取液各 5 m L,加
入硅藻土 4 g,拌匀 ,水浴蒸至近干 , 80℃烘干 ,研
细 ,用甲醇 150 m L索氏回流提取 5 h,回收甲醇 ,残
渣用甲醇定容至 25 mL,得供试液 A。取 2. 1项下提
取液各 10 mL,加重蒸馏水至 150 mL,用醋酸乙酯
萃取 ( 20 mL× 3) ,回收醋酸乙酯 ,残渣用甲醇定容
至 5 mL,得供试液 B。
2. 3　小檗碱的含量测定
2. 3. 1　对照液的制备: 称取盐酸小檗碱对照品
2. 00 mg ,置 5 mL容量瓶中 ,加甲醇至刻度。
2. 3. 2　线性关系考察: 精取盐酸小檗碱对照液 2,
4, 6, 8, 10, 12μL,点于同一薄层板上 ,以苯 -醋酸乙
酯 -甲醇 -异丙醇 -氨水 ( 6∶ 3∶ 1. 5∶ 1. 5∶ 0. 3)为展
开剂 ,另槽加入同体积的浓氨试液饱和 20 min,展
开 8 cm,取出 ,挥干 ,反射式锯齿扫描 ,λS= 342 nm ,
λR= 368 nm , SX= 5。以点样量为横坐标 ,峰面积为
纵坐标绘制标准曲线 ,结果盐酸小檗碱的线性范围
为 0. 80～ 4. 80μg ,回归方程: Y= 30 450. 42X+
18 069. 67, r= 0. 997 3。
2. 3. 3　含量测定:精取供试液 A各 2μL与盐酸小
檗碱对照液 2, 4μL,点于同一薄层板上 ,依法测定。
小檗碱含量以盐酸小檗碱计算 ,结果见表 1。
2. 4　肉桂酸的含量测定
2. 4. 1　色谱条件:色谱柱: Beckman C18 ( 4. 6 mm×
250 mm , 5μm) ;检测器: Beckman 163可变波长检
测器 ;检测波长: 267 nm;柱温: 室温 ;灵敏度: 1. 0
AUFS;流动相:乙腈-0. 1%磷酸 ( 27∶ 73) ;流速: 1
mL /min;进样量: 20μL。在此条件下 ,肉桂酸与相
邻峰达到基线分离 ,分离度> 2,见图 1。
* -肉桂酸
* -cinnamic acid
图 1　肉桂酸对照品 ( A)和交泰丸 (B)的 HPLC图
Fig. 1　HPLC chromatograms of cinnamic
acid (A) and Jiaotai Pill (B)
2. 4. 2　对照液的制备: 称取肉桂酸对照品 2. 40
mg ,置 10 mL容量瓶中 ,加甲醇至刻度。
2. 4. 3　线性关系的考察: 精取肉桂酸对照液
0. 025, 0. 05, 0. 1, 0. 2, 0. 4, 0. 8, 1. 0 m L,分别加甲
醇定容至 1 m L,各取 20μL进样 ,测定峰面积。以进
样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标绘制标准曲线 ,结果
肉桂酸的线性范围为 0. 12～ 4. 8μg ,回归方程为
Y= 3. 551× 105X+ 100 364, r= 0. 999 2。
2. 4. 4　含量测定:取供试液 B,用 0. 45μm微孔滤
膜滤过 ,取滤液各 20μL进样 ,结果见表 1。
2. 5　总生物碱的含量测定
2. 5. 1　对照液的制备: 称取盐酸小檗碱对照品
1. 50 g ,加 pH 7. 0缓冲液定容于 10 mL容量瓶中。
2. 5. 2　线性关系的考察: 精取盐酸小檗碱对照液
0. 2, 0. 4, 0. 6, 0. 8, 1. 0, 1. 2 mL,分别置具塞三角瓶
中 ,均用 pH 7. 0缓冲液稀释至 2 mL,加入 0. 007%
溴麝香草酚蓝溶液 8 mL,加入氯仿 10 mL,盖好瓶
塞 ,充分振摇 2 min,移入分液漏斗中 ,静置分层 ,分
·896· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
取氯仿层 ,用干燥滤纸滤过。滤液以相应的试剂为空
白 ,在 420 nm处测定吸光度。 以浓度为横坐标 ,吸
光度为纵坐标绘制标准曲线 ,得回归方程: A=
36. 10C - 0. 003 9, r= 0. 998 1。线性范围为 0. 003～
0. 015 mg /mL。
2. 5. 3　含量测定:精取供试液 A各 0. 1 mL,置具
塞三角瓶中 ,水浴蒸干 ,按 2. 5. 2项下方法测定。总
生物碱含量以盐酸小檗碱计算 ,结果见表 1。
2. 6　挥发油的含量测定:按《中华人民共和国药典》
2000年版附录 XD测定法 (甲法 )依法测定 ,结果见
表 1。
2. 7　干浸膏量的测定: 精取 2. 1项下提取液各 10
mL,分别置恒重的蒸发皿中 ,水浴蒸干 ,烘至恒重。
计算干浸膏得率 ,结果见表 1。
2. 8　 4种提取方法所得溶液的综合评价: 将表 1中
各指标成分的测定数据 ,按公式 x - x /s进行标准化
处理 (式中 x为提取液中各指标成分的含量 ,x为各
指标成分含量 4个数据的平均值 , s为其标准差 )。
根据各指标在提取工艺选择中的主次地位 ,给予不
同的加权系数 ,以标准化后的值加权后求和 ,即得综
合评价 Y值 ,见表 2。其中 Y= (小檗碱+ 肉桂酸 )×
8+ (总生物碱+ 挥发油 )× 4+ 干浸膏× 2。
表 1　 4种提取方法所得溶液中各指标成分的含量 (n= 3)
Table 1　 Contents of each marker component extracted by four methods (n= 3)
提取液 小檗碱含量 /% RSD /%
肉桂酸
含量 /% RSD/%
总生物碱
含量 /% RSD /%
挥发油
含量 /% RSD /%
干浸膏
含量 /% RSD/%
SBE 2. 962 1. 77 0. 089 7 1. 17 3. 888 0. 64 0. 88 1. 36 27. 34 0. 83
WE 2. 429 3. 24 0. 091 4 0. 07 3. 742 0. 44 0. 70 4. 36 24. 14 2. 23
SBAE 2. 269 1. 55 0. 062 3 1. 14 2. 896 1. 38 0. 88 1. 36 13. 53 1. 56
WAE 1. 956 2. 51 0. 033 5 1. 82 2. 780 1. 52 0. 70 4. 36 13. 11 0. 64
表 2　 4种方法提取液的综合评价
Table 2　 Comprehensive evaluation of four
method extractions
提取液　小檗碱 肉桂酸 总生物碱 挥发油 干浸膏 Y
SBE 　1. 326 4 0. 750 9 0. 985 6 0. 865 9 1. 071 1 26. 17
WE 0. 059 4 0. 813 2 0. 729 1 - 0. 865 9 0. 630 6 7. 69
SBAE - 0. 320 9 - 0. 252 7 - 0. 757 2 0. 865 9 - 0. 816 4 - 5. 79
WAE - 1. 064 9 - 1. 307 7 - 0. 961 0 - 0. 865 9 - 0. 888 0 - 28. 06
2. 9　转移率试验:精密称取黄连粗粉 0. 1 g ,按《中
华人民共和国药典》 2000年版黄连项下方法提取 ,
按 2. 3项下方法测得其小檗碱含量为 6. 248% ,按
2. 5项下方法测得其总生物碱含量为 9. 325% 。精密
称取肉桂粗粉 0. 5 g ,用乙醚 150 mL索氏回流提取
5 h,水浴回收乙醚 ,残渣用甲醇定容至 2 mL,按 2. 4
项下方法测得其肉桂酸含量为 0. 0445% 。另称取肉
桂粗粉 50 g ,加水 500 m L,按 2. 6项下方法测得其
挥发油含量为 1. 74%。 称取肉桂粗粉 50 g ,按 2. 2
项下 SBE法工艺条件提取 ,测得其挥发油含量为
2. 20% 。由于 SBE法提得的挥发油量明显高于药典
蒸馏法 ,故以 SBE法测得的挥发油含量为 100% ,计
算提取液中挥发油的转移率。将表 2中小檗碱、肉桂
酸、总生物碱、挥发油的含量按方中黄连、肉桂的量
折算 ,求出其转移率 ,结果见表 3。
3　小结与讨论
3. 1　以小檗碱、肉桂酸、总生物碱、挥发油及干浸膏
量为指标 ,对交泰丸方药 4种提取方法进行比较 ,结
果 5个指标综合评价 Y值为 : SBE液 > W E液 >
表 3　转移率试验结果 %
Table 3　Result of transf erence test %
提取液 小檗碱 肉桂酸 总生物碱 挥发油
SBE 79. 01 50. 39 69. 49 100. 00
W E 64. 79 51. 35 66. 88 79. 55
SBAE 60. 53 35. 00 51. 76 100. 00
W AE 52. 18 18. 82 49. 69 79. 55
SBAE液> WAE液。 SBE液中小檗碱、总生物碱、
挥发油的转移率均大于 50% ,提示本制剂的方药提
取采用 SBE法为佳。SBE法符合口服药物经人体胃
肠道转运吸收的原理 ,且有效成分含量高 ,生产成本
低。 若欲再减少服用量 ,进一步去除杂质 ,可采用
SBAE法 ,其较 WAE法提取的成分含量高。
3. 2　对 4种方法提取液中 5个指标成分试验结果
进行标准化处理 ,以消除各指标的单位和量纲的不
同 ,以及各指标变量范围相差悬殊所造成的影响 ,同
时根据各指标在工艺选择中的主次 ,确定不同的加
权系数 ,以标准化处理加权求和后的 Y值为综合指
标 ,评判 4种提取方法的优劣 ,较各指标成分含量直
接相加更加科学、合理。
3. 3　小檗碱含量测定中 ,是以苯-醋酸乙酯 -甲醇-
异丙醇-氨水 ( 6∶ 3∶ 1. 5∶ 1. 5∶ 0. 3)为展开剂 ,由
于苯、醋酸乙酯在紫外下有吸收 ,因此 ,实验的关键
是色谱展开后 ,薄层板一定要用吹风机吹干至无味 ,
再进行扫描 ,否则测出的实验结果不稳定。
3. 4　肉桂酸测定时检测波长的选择:取肉桂酸对照
品溶液适量 ,加甲醇稀释 ,用 UV 2201紫外分光光
·897·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
度计于 200～ 400 nm波长扫描 ,结果肉桂酸最大吸
收波长为 267 nm,故选定检测波长为 267 nm。
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复脉汤提取工艺的研究
李文宏 ,余日跃 ,陈　奇* ,汪　亮
(江西中医学院 ,江西 南昌　 330006)
摘　要:目的　优选复脉汤的提取工艺。方法　采用均匀设计试验法 ,通过 HPLC法测定提取液中甘草酸和人参皂
苷 Rb1的含量。结果　加醇量、提取温度影响具有显著性。复脉汤的最佳提取工艺为:用 10倍药材量的 50%乙醇于
60℃温浸 4 h。 结论　按此工艺提取 ,复脉汤中有效成分甘草酸、人参皂苷 Rb1含量高。
关键词: 复脉汤 ;提取工艺 ;均匀试验 ;甘草酸 ;人参皂苷 Rb1 ;高效液相色谱
中图分类号: R284. 02; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0898 03
Study on extracting process of Fumai Decoction
*
LI Wen-hong, YU Ri-yue, CHEN Qi, WANG Liang
( Jiangx i Co lleg e of TCM , Nanchang 330006, China)
Abstract: Object　 To optimize the ex t raction condi tions of Fumai Decoction. Methods　 Unifo rm de-
sign test w as used, and the contents o f g lycy rrhizinic acid and ginseno side Rb1 in ex t racted solv ent w ere de-
termined by HPLC. Results　 The ethanol v olume and the ex t racting temperature in the uni fo rm test im-
pacted the test remakably. The best ex traction process o f Fumai Decoction as fo llow s: the raw drug s w ere
ex t racted by 10 times o f 50% ethanol a t 60℃ fo r 4 hours. Conclusion　 Glycyrrhetinic acid and ginseno-
side Rb1 contents in Fumai Decoction are higher acco rding to the above ex t raction process.
Key words: Fumai Decoction; ex t racting process; unifo rm test; glycy rrhizinic acid; ginsenoside Rb1;
HPLC
* Fumai Decoction is a Chinese prescription made o f Radix Glycyrrhizae Preparata , Radix Panacis
Quinquefolii , and Radix Ophiopogonis , etc. wi th the function of supplementing qi and nourishing y in.
　　复脉汤由炙甘草、西洋参、麦冬等药物组成 ,有
益气养阴复脉之功效 ,主治气阴两虚型心动悸脉结
代 ,用于抗心律失常 [ 1]。在以前的工作中 ,曾比较了
水煎煮法、水温浸法、饮片乙醇温浸法、粗粉乙醇温
浸法、渗漉法提取对复脉汤抗心律失常有效成分甘
草酸及人参皂苷 Rb1含量的影响。结果在尽可能相
似的条件下 ,饮片乙醇温浸法提取所得目标成分含
量及总量最高 ,且总固体量相对较小。因此 ,本实验
选择饮片乙醇温浸法作为复脉汤的提取方法 ,采用
均匀设计试验法 ,以确定提取复脉汤中有效成分的
最佳工艺。
1　仪器及试药
Agilent 1100 series HPLC仪 , VWD紫外检测
器 , HP ch emstation。甲醇、乙腈为色谱纯 ,其他试剂
均为分析纯。甘草酸单铵盐对照品 (中国药品生物制
品检定所 ,批号: 731-9903)、人参皂苷 Rb1对照品
(中国药品生物制品检定所 ,批号: 0704-200012)。甘
草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.由内蒙古医学院中
药系提供 ;西洋参 Panax quinquefolium L.、麦冬
Ophiopogon japonicus ( Thunb. ) Ker-Gawl.药材购
·898· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-11-18基金项目:江西省自然基金课题 ( 0140010) ;江西省教育厅课题作者简介:李文宏 ( 1974— ) ,男 ,江西南昌市人 ,讲师 ,硕士 ,现为北京中医药大学 2001级博士生 ,主要从事新药开发和中药药理研究。
E-mai l: lw hong@ jx tcmi. com
* 通讯作者　 Tel: ( 0791) 6825769　 E-mail: chenqi666@ 263. net